实验一紫外可见分光光度计的性能检验题库.docx
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实验一紫外可见分光光度计的性能检验题库
实验一紫外－可见分光光度计的性能检验
一、实验目的
1.掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法
2.学会UV-1100型紫外－可见分光光度计的使用方法二、实验原理
分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。
因此，要对仪器进行性能检查，以保证测定结果的准确性。
三、仪器和试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪
石英比色皿（一对）
擦镜纸
K2Cr2O7溶液
KMnO4溶液
蒸馏水
四、实验内容及操作步骤
1.比色皿的配对性将蒸馏水注入到比色皿中，以其中一个比色皿作空白，在
440nm
波长处分别测定其他各
比色皿中的透光率。
2.波长精度的检查用KMnO4溶液的最大吸收波长525nm为标准，在待测仪器上测绘
测得的最大吸收波长在5251nm以内，则仪器的波长精度符合使用要求。
3.重复性以0.02mol/L的H2SO4溶液的透光率为100%，用同一K2Cr2O7溶液连续测定
0.5%，则重复性符合要求。
KMnO4溶液的吸收曲线，若
7次，求出极差，如小于
4.吸收值的准确度考察
取K2Cr2O7溶液，在以下波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如
下表所示，其相对偏差在
1%以内，则吸收值的准确度符合要求。
波长/cm
235
257
313
350
（最小）
（最大）
（最小）
（最大）
吸收系数E1cm1%
123.0～126.0
142.8~146.2
47.0~50.3
105.5~108.5
五、思考题
1.同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？
2.检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？
实验二、吸收曲线的测绘及吸收系数的测定
一、实验目的
1.掌握测绘吸收曲线的方法
2.学会测定吸收系数二、实验原理
若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的
λmax、λmin或λ（S）为一定值，且他们的数目也一定，从而为鉴
别化合物提供了有力的证据。
百分吸收系数是指当溶液浓度为
1%，液层厚度为1cm时，指定波长的吸光度。
即E11%cm
A
C
1
三、仪器和试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度计
石英比色皿（一对）
100ml烧杯1个
擦镜纸
95%乙醇（A.R）
丹皮酚对照品
四、实验内容及操作步骤
丹皮酚对照品母液的配制：
称取丹皮酚对照品10mg，用95％乙醇溶解，定容至10ml，摇匀。
吸取5ml于100ml
量瓶内，用95%乙醇定容，作为母液备用，此溶液中丹皮酚的含量为0.005%。
1.吸收曲线的测绘吸取母液1ml于10ml量瓶内，用95％乙醇定容。
此时，丹皮酚含量为0.0005%。
将此溶
液与空白溶液（95％乙醇）分别用两个相同的比色皿盛装后，放置在仪器的比色架上，按仪器使用方法进行光
谱扫描，得到吸收曲线图。
2．吸收系数的测定利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度，计算百分吸收系数。
实验三、分光光度法测定槐花中总黄酮的含量
一、实验目的
1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法
2.巩固紫外－可见分光光度计的操作方法二、实验原理
黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构，这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物。
铝盐比色法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚硝酸钠同黄酮类化合物生成稳定的有色配合物，可用于定量分析。
三、仪器和试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪
石英比色皿（一对）
5%NaNO2溶液
10%Al（NO3）3溶液
NaOH试液
芦丁对照品
槐花药材
其余试剂均为分析纯
四、实验内容及操作步骤
1.对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水
浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。
精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。
2.标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，
加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，
加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓
度为横坐标，绘制标准曲线。
3.样品测定取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃
去乙醚液。
再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶
中，加甲醇至刻度，摇匀。
精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。
精密量取3ml，至25ml量瓶
中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量（μg），计算，即得。
槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于8.0%。
五、注意事项
1、对照品和样品应同时显色
2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确
六、思考题
1.分光光度法有哪些影响因素？
2.试述标准曲线法的优点。
实验四、薄层板的制备
一、实验目的
掌握薄层板的制板方法
二、仪器和试剂
天平（0.1mg）研钵
玻璃板10cm×20cm
CMC-Na水溶液
蒸馏水
95％乙醇（A.R）
薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工厂）
三、实验内容及操作步骤
1.洗板选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在薄层板放置架上阴干备用。
（要求：
薄板应光滑、平整、不符
水珠。
）2．匀浆3．铺制
将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。
将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使
吸附剂均匀铺开成一薄层。
置水平台上阴干。
4．活化将阴干的薄层板至于110℃烘箱中活化
30分钟，置于有干燥器中备用。
要求：
制备好的薄层板应检查其均匀度,即在反射光及透射光的检视下其表面应均匀、光滑、平整、无麻点、无
气泡、无破损及无污染。
四、注意事项
1.玻璃板的规格有多种10*20cm、20*20cm等，可根据实验需要选择不同规格的玻璃板。
2.CMC-Na水溶液做为薄层板制备的粘合剂，《中国药典》2005年版规定其浓度在2‰～5‰，其浓度大小决定
了所制备薄层板的硬度，本次实验粘合剂浓度为3‰。
3.除硅胶GF254外，薄层用硅胶还有硅胶G、硅胶H、硅胶GF365、硅胶GH254、硅胶GH365等，不同种类的硅
胶所制备出的薄层板性能不同。
本次试验所用的硅胶GF254是指一种含有煅石膏的硅胶并在其硅胶中加入了一
种在254nm下显强荧光背景的荧光剂，主要用于分离、检视在紫外和可见光下物无吸收的成分。
五、思考题
1．薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？
实验五薄层色谱定性分析（五味子的定性鉴别）
一、实验目的
1.掌握薄层色谱的定性分析方法
2.熟悉薄层板的点样方法二、实验原理
中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。
三、仪器与试剂
毛细管
薄层板10cm×20cm
所用试剂均为分析纯
五味子粉末
四、实验内容及操作步骤
取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品液。
另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。
吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
五、注意要点
1.五味子有南、北之分。
《中国药典》2005年版（一部）所收载的五味子为木兰科植物五味子Schisandra
chinensis（TurcZ）Bail的干燥成熟种子。
习称“北五味子”。
2.本次实验操作分为点样、展开、检视与记录数据四个过程。
具体操作要点如下：
2.1点样：
在干燥、清洁的环境中用毛细管分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和样品溶液于同一硅胶
GF薄
254
层板上，点样基线距离底边10~15mm，点样圆点不大于3mm，接触点样时勿损伤薄层板表面。
点间距离不少于8mm。
2.2展开：
浸入展开剂的深度为距底边5mm为宜。
上行展开10cm左右，达到展距后取出薄层板、晾干、待检测。
（展开之前应注意预平衡：
在双槽展开箱的一侧槽内加入适量的展开剂，密闭，一般保持15～30min，待容积
蒸汽平衡后，应迅速将薄层板放入展开箱中，立即密闭，展开。
）
2.3检视与记录数据：
将展开、晾干的薄层板置于254mm紫外灯下检视，观察供试品溶液所显示的主斑点的颜色
和位置（Rf值）与对照品溶液、对照药材溶液是否一致。
当供试品溶液主斑点与对照品、对照药材能对应时，即可认为该药材为药典收载五味子。
六、思考题
1．如何克服薄层展开过程中的边缘效应？
引起边缘效应的因素有哪些？
实验六、高效液相色谱仪的使用
一、实验目的
1.掌握高效液相色谱仪的使用方法
2.了解高效液相色谱仪的结构
二、仪器和试剂
L-2000液相色谱仪（紫外检测器）；
C18反相键合色谱柱（250mm×4.6mm）；
微量进样器（25μl）；
过滤器（0.45μm）及脱气装置；
苯、甲苯、萘；
甲醇（色谱纯）；
重蒸馏水（新制）；
三、实验内容与步骤
（一）．流动相的预处理：
1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2．对过滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
（二）．安装色谱柱
（三）．液相色谱仪的使用方法
1.启动液相色谱仪：
（1）检查仪器的电源线是否已连接。
（2）打开仪器的电源开关。
（3）打开输液泵电源。
（4）打开检测器电源。
（在平衡和冲洗色谱柱时请将检测器关闭）
2..排除管道内空气：
（1）将吸滤头放入经过处理后的溶剂内。
（2）将输液泵阀打开（逆时针旋转180o）。
（3）按下pumpon/off键，开启输液泵。
（4）按下purge键，开始排管道内气泡。
（5）仔细观察管路，至无气泡流出时，再次按下purge键，暂停排液。
（6）按下pumpon/off键，关闭输液泵。
（7）顺时针旋紧输液泵阀。
3.泵流速的设定：
（1）按下manual键。
（2）按下1键，按ent键确认。
（3）输入需要的流速，按ent键确认。
4.检测器波长的设定：
按下wl键，输入需要的波长，按ent键确认。
5.打开T2000P色谱工作站：
（1）选择实时进样通道1，进入样品信号采集界面。
（2）鼠标左键点击“方法”，修改或者新建分析方法。
（3）鼠标左键点击“谱图”，设置谱图显示。
（4）在“停止时间”项下输入采集停止时间。
（5）在“路径及文件名规则”项下输入文件保存路径。
（6）鼠标右键点击“使用方法”项下分析方法，选择分析方法。
6.色谱柱预平衡：
按下pumpon/off键，开启输液泵。
至基线平稳时可开始进样。
7．进样：
（1）进样前按A/Z键将基线调零。
（2）将进样阀逆时针旋至于load位，插入进样针，进样。
（3）进样后立即将进样阀顺时针旋至injecti位。
工作站开始采集信息。
8.数据采集完毕后，点击停止进样。
9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处理，出报告图。
10.实验完毕后冲洗色谱柱。
11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源。
附:
练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量
色谱条件流动相为甲醇∶水（80∶20）；固定相为C18反相键合色谱柱；检测波长为
速：
1ml/min。
样品溶液含苯、甲苯、萘浓度分别为1μg/ml的甲醇溶液。
进样量：
10μl。
254nm；流
四、问题讨论
流动相在使用前为何要过滤和脱气？
实验七高效液相色谱定性及定量分析——中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定
（色谱分析设计实验）
一、实验目的
1.
掌握利用高效液相色谱法进行定性及定量分析
2.
巩固高效液相色谱仪的使用方法
二、实验内容
中药赤芍中芍药苷的高效液相色谱分析
三、实验提示
赤芍为常用中药，主要含芍药苷，并含氧化芍药苷、芍药内酯苷、牡丹酚、挥发油等，赤芍中的芍药苷是其主要活性成分，为了控制其含量，对赤芍中的芍药苷进行含量测定。
四、实验要求
1.在老师的指导下查阅文献，系统了解赤芍中的芍药苷的测试方法。
2.设计赤芍的提取处理方案。
3.设计液相色谱分离条件（色谱柱，流动相，检测器等）与定量方法。
4.实验报告按设计实验的要求书写。
五、思考题
1．外标一点法的主要误差来源是什么？
2．紫外检测器的优缺点是什么？
实验八、气相色谱仪的使用
一、实验目的
1.掌握气相色谱仪的使用方法
2.了解气相色谱仪的结构二、实验原理
气相色谱法是采用气体作流动相（载气）流经色谱柱进行分离分析的方法。
所用的仪器为气相色谱仪，主要由气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。
三、仪器与试剂
岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器）
樟脑对照品溶液
试剂均为A.R纯；
四、实验内容及操作步骤
（一）、启动GC-2014气相色谱仪：
1、检查仪器的电源线及氮气、空气、氢气的接头是否连好；
2、打开氮气、空气、氢气钢瓶及减压阀；
3、打开仪器右侧的电源开关，待自检完成后，开启电脑；
（二）、参数的设定：
1、进样口温度：
按下“INJ”键，设定进样口温度；
2、柱温：
按下“COL”键，设定柱温；
3、检测器温度：
按下“DET”键，设定检测器温度；
4、载气的流量：
按下“FLOW”键，设定载气的流量；
5、分流比：
按下“FLOW”键后，设定“SPLITRATIO”项；
（三）、打开N2000色谱工作站：
（四）、运行GC-2014气相色谱仪：
1、点击“SYSTEM”，按下“STARTGC”键开启系统，再按下“MONITOR”键，在监视栏中观察流量、柱
温、进样口温度、检测器温度的变化；
2、待温度达到设定值后，点击“MONITOR”键后，点击flameon，确认点火是否成功。
3、确认点火成功后，观察图谱的基线；
（五）、进样
1、进样前按“ZEROADJUST”键，将基线调零；
2、将进样针迅速插入进样口，并快速进样，然后立即按下数据采集开关，稍过片刻后拔出进样针；
（六）、待数据采集完毕后，点击停止采集；
（七）、待样品分析结束后，在离线处理数据，察看数据报告，打印报告。
（八）、关机：
1、将进样口、柱温箱、检测器的温度设为室温；
2、待各单元温度低于80度后，点击“MONITOR”键后，按下“SYSTEM”键，再点击“STOPGC”键关闭
系统；
3、关闭N2000色谱工作站，关闭主机电源；
4、关闭氮气、空气、氢气钢瓶。
附:
练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量
色谱条件：
聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm）；柱温为160℃。
样品溶液樟脑对照品溶液。
进样量：
1μl。
五、思考题
使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？
实验九、气相色谱法定性及定量分析——樟脑、冰片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定一、实验目的
1.掌握采用内标法进行定量分析的方法
2.熟悉利用气相色谱仪进行定性分析
二、实验原理
在已知待测组分的情况下，得到的气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保留值进行定性。
利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造成的误差。
公式：
校正因子（f）=AsCs
ARCR
A
含量（Cx）=f'x'
三、仪器与试剂
岛津GC-2014气相色谱仪（FID）；
10μl微量进样器；内标物：
萘；
樟脑对照品；
混合样品溶液（由樟脑、冰片和薄荷脑组成）；
其余试剂均为A.R纯；
四、实验内容及操作步骤
仪器条件聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m、内径0.25mm、膜厚度0.25μm），柱温160℃。
校正因子的测定取萘适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作为内标溶液。
取樟
脑对照品6mg置10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。
吸取1μl，注入气
相色谱仪，计算校正因子。
测定法精密吸取样品溶液1ml，，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇
匀。
吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。
五、思考题
1．内标法定量的优点是什么？
2．内标法定量有哪些不足？
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