葡萄糖氧化酶法的实验报告.docx

葡萄糖氧化酶法的实验报告.docx

《葡萄糖氧化酶法的实验报告.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《葡萄糖氧化酶法的实验报告.docx（6页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

葡萄糖氧化酶法的实验报告

葡萄糖氧化酶法的实验报告

　　篇一：

葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法

　　葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖

　　原理

　　葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

　　试剂

　　1．/L磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠调pH至，用蒸馏水定容至1L。

　　2．酶试剂称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/LNaOH调pH至，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。

3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。

4．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。

　　5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。

　　6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。

2h以后方可使用。

　　7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

　　操作步骤

　　1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。

　　2．手工操作法取试管3支，按下表操作。

　　读取标准管及测定管吸光度。

　　计算

　　参考范围空腹血清葡萄糖为～/L。

　　临床意义

　　1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。

2．病理性高血糖

　　糖尿病：

病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。

　　内分泌腺功能障碍：

甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。

引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。

注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。

　　颅内压增高：

颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。

　　脱水引起的高血糖：

如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。

3．生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。

　　4．病理性低血糖

　　胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。

　　对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。

　　严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。

　　注意事项

　　1．葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。

葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。

国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。

新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上，待变旋平衡后方可应用。

　　2．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。

因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。

　　3．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

取草酸钾6g，氟化钠4g。

加水溶解至100ml。

吸取到试管内，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天内不凝固并抑制糖分解。

　　4．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。

　　5．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。

　　评价线性范围至少可达/L，回收率94%～105%，批内CV为%～%。

批间CV为2%左右，日间CV为2%～3%。

葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，73份标本葡萄糖氧化酶法均值为/L，已糖激酶法均值/L，相关系数为，回归方程y=－。

本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。

误差往往发生在反应的第二步。

一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。

然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达10g/L，黄疸标本胆红素浓度达342μmol/L，维生素C小于30mg/L，均不影响测定结果。

氟化钠浓度达2g/L不干扰测定结果。

标本中含尿素浓度达/L，尿酸浓度达/L，肌酐浓度达/L。

半胱氨酸浓度达/L，甘油三酯浓度达/L，胆固醇mmol/L，对测定结果均无显著影响。

　　左旋多巴100mg/L，维生素C5mg/L以上，谷胱甘肽100mg/L时，可引起负误差；半胱氨酸达10mmol/L时，产生相当/L葡萄糖的正误差。

　　篇二：

葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖

　　实验名称：

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖

　　实验原理

　　葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。

醌的产量与葡萄糖量成正比。

醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。

实验准备一、材料

（1）血清

（2）血浆：

以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆二、试剂

（1）试剂R1：

磷酸盐缓冲液100mmol，，苯酚10mmol/L。

（2）试剂R2：

磷酸盐缓冲液100mmol，，葡萄糖氧化酶16000U/L，过氧化物酶1000U/L，4-氨基安替比林/L。

　　（3）葡萄糖校准液：

/L（1mg/ml）（4）生理盐水。

（5）工作试剂（酶酚混合液）：

取R1试剂与R2试剂混合在10ml试管中。

三、器材

（1）试管和试管架

（2）移液枪

　　（3）722型分光光度计（4）酶标仪（5）恒温水浴箱（6）酶标板（7）板条

　　（8）生化培养箱实验步骤

（1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按

　　实验结果

　　葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×参考值：

~/L

　　测得数据为A2A3A4A5　　

　　/2

　　——×﹦/L

　　（+/2实验讨论

　　①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

　　③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因

　　此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。

④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引

　　起误差。

　　⑤葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖的反应15min达不到反应终点，应延长到25min1。

⑥新生儿高胆红素血对葡萄糖氧化酶法测定血糖有负干扰影响,除去胆红素后可以较准确

　　测定血糖2。

参考文献

　　1.王彦明，实用医技杂志，2008（05）

　　2.邹焕荣；何国坚；叶有玩，江西医学检验，2004（03）

　　篇三：

葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖背景知识

　　葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖

　　实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。

过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。

在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。

　　临床意义1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。

　　2.病理性高血糖

（1）糖尿病患者。

（2）内分泌腺功能障碍：

甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。

升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。

（3）颅内压增高：

颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。

（4）脱水引起的高血糖：

如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。

　　3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。

　　4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。

（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。

（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。

（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。

　　注意事项1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。

葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。

目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。

新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。

　　2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。

　　3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

取草酸钾6g，氟化钠4g，加水溶解至100ml。

吸取到试管内，在80摄氏度以下烤干使用，可使2~3ml血液在3~4d内不凝固并抑制糖分解。

　　4.本法用血量甚微，建议使用微量加样器进行加样。

如果使用吸管加样，应直接

　　加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以减小误差的产生。

　　5.严重黄疸.溶血及乳糜烂血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。

　　方法评价本法线性范围至少可达∕L，回收率94%~105%，批内CV为%~%，批间CV为2%左右，日间CV为2%~3%。

葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，相关系数为。