液相色谱质谱联用仪作业指导书.docx
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液相色谱质谱联用仪作业指导书
液相色谱-质谱联用仪
1范围
本作业指导书适用于新安装、使用中和修理后的离子阱和四极杆（包括三重四级）
两种类型LC-MS的校准，四极杆一飞行时间串联等其它类型台式LC-MS的校准可参照此
作业指导书进行。
2引用文献
下列文献所包含的条文，通过在本指导书中的引用而构成本指导书的条文。
本指导书发布时，所示版本均为有效。
所有标准、规范或规程都会被修订，使用本指导书的各方应探讨使用下列文献最新版本的可能性。
JJF1001-1998《通用计量术语及定义》
JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》
JJF1164-2006《台式气相色谱-质谱联用仪校准规范》
3概述
液相色谱-质谱联用仪是以液相色谱为进样分离系统并通过一定的接口与质谱仪耦合到仪器的分析仪器。
样品经过色谱分离后经离子源离子化产生带有一定电荷、质量数的离子，采用不同的质量分析器把电离子按质荷比（m/z）分开,得到依质量顺序排列的
质谱图。
通过对质谱图的分析处理，进行定性、定量分析。
液相色谱-质谱联用仪主要由液相色谱、离子源、质量分析器、检测器、真空系统和计算机等几部分组成。
4计量特性
LC-MS各项技术指标见表1
表1LC-MS主要技术指标
技术指标
要求
质量范围
不低于1000u
质量准确性
±0.6u
分辨力（R）*
w1u
信噪比*
正ESI
10pg利血平，m/z609处S/N>10：
1（峰峰值）
负ESI
20pg氯霉素，m/z321处S/N>10：
1（峰峰值）
正APCI
20pg利血平，m/z609处S/N>10：
1（峰峰值）
整机定量重复性*
RS匡10%
注：
1标*的为必须校准项目
2本技术指标仅供参考，不作为合格性判断依据
5校准/测试条件
5.1实验室环境要求
5.1.1仪器室内不得有强烈的机械振动和电磁干扰，不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性气体或试剂。
5.1.2实验室温度：
20C〜30C。
5.1.3相对湿度：
w70%。
5.2标准物质与试剂
5.2.1利血平-50%乙腈水溶液：
100.0pg/卩L;
5.2.2利血平-50%乙腈水溶液：
10.0pg/卩L;
5.2.3氯霉素-50%乙腈水溶液：
200.0pg/卩L;
5.2.4氯霉素-50%乙腈水溶液：
20.0pg/卩L;
5.2.5碘化铯钠-异丙醇水溶液：
2卩g/yL碘化钠，50ng/卩L碘化铯溶于50%异丙醇水溶液；
5.3标准设备
5.3.1微量注射器：
10yL
6校准/测试项目与校准/测试方法
6.1外观检查
6.1.1仪器应具有下列标识：
名称、型号、制造厂名（或公司名）、出厂编号，并附使用说明书。
6.1.2仪器主机、色谱仪、计算机、真空部件和检测器等完好（符合出厂说明书要求），各部件连接正确，各插件紧密配合，接触良好，仪器启动后无异常噪声。
6.1.3仪器的按键开关、各调节旋纽均能正常工作，无松动现象，指示灯显示正常。
6.1.4仪器运行中使用的高电压、大电流和高温等应在仪器的显著部位贴有警示标志，提
醒操作者注意这些潜在危险。
6.1.5仪器应标明使用电压和频率等。
6.2分辨力
仪器稳定后，选择ESI正离子模式，采用手动调谐，将碘化铯钠溶液直接注入质谱
中，参照附录D均匀选择5个扫描质量，优化仪器至最佳状态，记录各目标离子峰得到半峰宽W/2。
6.3质量范围
参照6.2条件将碘化铯钠溶液通过进样泵直接注入质谱中，选择Scan模式，设定扫
描范围为（20~2000）m/z,观察是否出现质量数1000以上的质谱峰。
6.4质量准确度
参照6.2条件，将碘化铯钠溶液通过进样泵直接注入质谱中，记录133，323,473,623,922,1072等碘化铯钠主要离子的质量数，理论值见附录D,根据公式
（1）计算质量准确度
MMi测量Mi理论
（1）
式中Mi测量一一第i个离子三次测量平均值，u；
Mi理论一一第i个离子理论值，u。
6.5信噪比
6.5.1正ESI源
仪器稳定后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609
至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。
调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50：
50乙腈水溶液为流动相，使用C18或等效色谱柱分离，注入10pg利血平溶液，选择SIM模式，提取m/z609特征离子，根据公式
（2）计算信噪比。
S/NHm/zH噪声
（2）
式中：
Hm/z——提取离子的峰高;
H噪声——基线噪声。
6.5.2负ESI源
仪器稳定后，将200pg/ul的氯霉素溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子321
至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。
调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50：
50乙腈水溶液为流动相，使用G8或等效色谱柱分离，注入20pg氯霉素溶液，选择SIM模式，提取m/z321特征离子，根据公式
（2）计算信噪比。
6.5.3正APCI源
仪器稳定后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609
至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。
调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50：
50乙腈水溶液为流动相，使用G8或等效色谱柱分离，注入20pg利血平溶液，选择SIM模式，提取m/z609特征离子，根据公式
（2）计算信噪比。
6.6测量重复性
参照6.5.1条件，注入200pg/ul的；利血平溶液10ul，选择SIM模式，提取m/z609特征离子，连续测量6次，记录相应峰面积，根据公式（3）计算重复性
6
/x）21
RSD:
i1100%
\61x
式中：
RSD――相对标准偏差，%人一一第i次测量峰面积；x――峰面积的算术平均值。
7校准/测试结果处理与复校周期
7.1按程序文件《CX34-01证书/报告管理程序》要求出具校准/测试报告。
7.2检测部门对原始记录进行整理和归档。
7.3根据校准结果，发校准证书或校准通知书。
在校准结论中明确说明被校准仪器是否合格、存在冋题及建议。
7.4液相色谱-质谱联用仪的校准周期为2年，更换重要部件、维修或对仪器性能怀疑时,
应随时校准
附录A
液相色谱-质谱联用仪信噪比扩展不确定度
A.1概述
A.1.1测量依据
SSY0052-2010《液相色谱-质谱联用仪作业指导书》
A.1.2环境条件
温度（15〜27）C，相对湿度小于75%RH
A.1.3测量标准
液相色谱-质谱联用仪标准物质。
A.1.4被测对象
Agilent6100
A.1.5测量过程
SSY0052-2010《液相色谱-质谱联用仪作业指导书》
A.1.6评定结果的使用
符合上述条件的测量结果，一般可直接使用本不确定度的评定结果
A.2数学模型
式中：
Hm/z:
提取离子（m/z）的峰高
H噪声：
噪声峰高度
A.3不确定度分量的计算
A.3.1信号峰高值测量不确定度u（Hz/m）:
仪器测量峰高时，它与标准物质的浓度、进样量和峰高测量值的不确定度有关，因此信号峰高值测量不确定度应包括三个方面：
信号
峰高测量值的相对不确定度进U（Hl），标准物质的不确定度U（H2）、微量进样器的不确定度u（H3）和仪器重复测量的不确定度。
A.3.1.1信号峰高测量值的相对不确定度进u（HJ:
信号峰高测量值的测量有两种方法：
一是根据工作站中记录的选择离子流图，读取峰高值和基线值，以两点差的绝对值作为峰高的测量值，这种峰高的测量方法的相对不确定度优于0.2%;二是用工作站记录相应
的选择离子流图，再用游标卡尺量取谱图的峰高的高度。
谱图的高度一般为100mm峰高
为70〜90nm，其相对不确定度的分量估计为u（H）0.5%。
A.3.1.2标准物质的相对不确定度u（H2）:
标准物质的相对不确定度是检定质谱计的不确定度的主要来源之一，它直接影响检定结果，标准物质的相对不确定度通常由标准物质证书给出，标准物质证书给出其定值的误差为10mg±2%认为其为矩形分布，所以
u（H2）2%/.31.2%。
A.3.1.3微量进样器校准的相对不确定度u（H3）:
微量注射器的体积刻度是重要的不确定度来源之一，所以，微量注射器必须经校准后才能使用。
规程中规定校准一般称量6次,
相对标准偏差1%（进行检定结果计算时，应当采用校准值）u（W2）1/<604%o
A.3.1.4重复测量相对不确定度u（H』：
现在以一台6310的液相色谱-质谱联用仪为例做重复性测量：
在相同的条件重复进样10次，按仪器本身计算信噪比的软件进行计算，所得的表1中的数据：
表1:
型号为6310的液相色谱-质谱联用仪10次连续测量的数据
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
信噪
比
185
132
185
225
228
219
196
174
231
212
畀（人x）2
由上表可计算出其单次相对标准偏差s1Ii114.8%
x、n1
A.3.1.5由于u（HJ，u（H2），u（H3），u（HJ相对独立，
则u（Hz/m）u（H1）2u（H2）2（H3）2（H4）2.0.5%1.2%0.4%14.8%14.9%
A.3.2基线噪声测量值的不确定度u（N）:
基线噪声测量的不确定度主要来自卡尺检定的
A.4.1数学模型:
式中：
Hm/z:
提取离子（m/z）的峰高
H噪声:
噪声峰高度
A.4.2方差与传播系数
由：
u；（y）[f/Xj]2u2（Xi）
依据
（1）可以推导出：
22222
u（S/N）C1U（Hm/z）C2U（H噪声）
1
H噪声
1
H噪声
由于式中各不确定度分量彼此独立，c1c21
A.4.3表3不确定度一览表
不确定度分量
u（Xi）
标准不确定度来源
标准不确定度分量
值Ciu（Xi）
U（Hz/m）
u（HJ
信号峰高测量值的相对不确定度
0.5%
u（H2）
标准物质的不确定度
1.2%
u（H3）
微量进样器校准的相对不确定度
0.4%
u（H4）
重复测量不确定度
14.8%
u（N）
基线噪声值测量的不确定度
2.0%
A.4.4合成标准不确定度:
u（S/N）.u2（Hz/m）U2（H噪声）.（14.8%）（2.0%）14.9%
A.4.5扩展不确定度：
为了计算的方便，均取k=2
由公式UreikU（S/N）可得：
Urelku（S/N）214.9%29.8%30%
A.5扩展不确定度的评定
为了计算的方便，均取k=2
由公式Urelku（S/N）可得：
Urelku（S/N）214.9%29.8%30%
A.6测量不确定度的报告
该液相色谱-质谱联用仪信噪比的扩展不确定度表示为U=30%k=2
附录B
液相色谱仪-质谱联用仪量值溯源图
附录C
深圳市计量质量检测研究院
校准记录格式（供参考）
客户名称：
仪器名称：
液相色谱一质谱联用仪
型号规格：
出厂编号：
资产编号：
制造厂名：
技术依据：
检定/校准日期：
年月日
有效期/复校周期：
年
检定/校准地点：
环境条件：
c%RH
标准器名称
特征
设备编号
检疋/校准证书号
有效期
使用前后状态
使用前：
□正常/□不正常使用后：
□正常/□不正常
一、外观：
正常口/异常口
二、分辨率：
三、质量范围：
四、质量准确度
理论值
实测值
五、信噪比离子源：
测量样品：
利血平口/氯霉素/□
峰高
基线噪声
信噪比
六、测量重复性：
样品名
浓度
响应值
平均值：
重复性：
检定员：
核验员：
附录D
碘化铯钠（NaCI）离子质量（m/z）
离子（m/z）
理论值（m/z）
23
22.99
133
132.91
173
172.88
323
322.78
473
472.67
623
622.57
722
772.46
922
922.36
1072
1072.15
1222
1222.14
1372
1372.04
1522
1521.93
1672
1671.83
1822
1821.72
1972
1971.61
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