临床免疫学检验.docx

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临床免疫学检验

临床免疫学检验

一、免疫球蛋白检测

•概念：

免疫球蛋白（Ig）是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称。

由浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。

（一）分类

•按重链性质分:

IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、IgG

•于出生后三个月开始合成，3—5岁接近成人水平。

IG是血液中含量最高的Ig，占血清总Ig的75%—80%，是抗感染的主要抗体。

是唯一能通过胎盘的抗体。

IgA：

分为分泌型和血清型，分泌型的合成和分泌部位在肠道、呼吸道、乳腺、唾液腺和泪腺，血清型占总Ig的10—20%。

IgM：

是分子量最大的Ig。

占血清Ig的5-10%。

是个体发育过程中最早出现的抗体，在胚胎发育晚期的胎儿即能产生IgM。

在机体受抗原刺激后，是最先产生的抗体。

IgM是血管内抗感染的主要抗体。

IgE:

是正常人血清中含量最少的Ig。

约0.1—0.9mg/L。

占总血清Ig的0.02%，为亲细胞抗体。

参与Ⅰ型超敏反应,与变态反应、寄生虫病及皮肤过敏有关。

（四）临床意义

⒈免疫球蛋白增高

•

（1）单克隆免疫球蛋白增高（M蛋白血症）

IgG、IgA、IgD或IgE增高。

见于：

多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症.淋巴样异常增生性疾病等。

•

（2）多克隆免疫球蛋白增高

•①感染：

特别是慢性感染如细菌、寄生虫、螺旋体感染，IgG、IgM增高

②自身免疫性疾病：

SLE以IgG、IgA或IgG、IgM增高多见，类风关以IgM增高为主

③慢性肝病：

IgG、IgA、IgM可增高，慢活肝IgG、IgM增高明显

⑶IgD增高：

见于IgD型多发性骨髓瘤、妊娠末期、大量吸烟者

•⑷IgE增高：

见于IgE型多发性骨髓瘤、变态反应性疾病、寄生虫病及皮肤过敏、急慢肝、肾综

⒉免疫球蛋白减少

IgG＜6.0g/L，IgM、IgA＜0.4g/L

（1）先天性：

见于先天性无丙种球蛋白血症、先天无胸腺症

•

（2）获得性：

见于大量蛋白丢失性疾病：

肾综、剥脱性皮炎中毒性骨髓病、白血病、淋巴网状系统肿瘤：

淋巴瘤、霍奇金病

长期使用免疫抑制剂

⑶Ig减少易引起反复感染

•IgG缺乏：

易患化脓性感染

•IgM缺乏：

易患革兰氏性阴败血症

•IgA缺乏：

易患呼吸道感染

二、血清M蛋白检测

⏹M蛋白是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的，具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段。

M蛋白检测的临床意义

⏹多发性骨髓瘤

⏹巨球蛋白血症

⏹重链病：

α型、γ型、μ型

⏹半分子病：

一条重链+一条轻链

⏹恶性淋巴瘤

⏹良性M蛋白血症

二、补体检测

•补体是人或动物血清中的一组具有酶活性的糖蛋白，在机体免疫系统中发挥抗感染和免疫调节的作用，也参与免疫病理反应。

㈠CH50测定

㈠CH50临床意义

•主要反应补体经典激活途径的溶血功能，其结果与C1-C9各组分的量和活性均有关

•增高见于：

急性炎症、组织损伤

•降低见于：

①急、慢性肾小球肾炎

②各种自身免疫病

③感染性疾病

④作为判断肝病严重程度的指标

㈡　C1q测定的临床意义

⏹是补体经典途径激活的始动因素

⏹增加：

见于骨髓炎、类风关、痛风

⏹降低：

见于SLE、肾小球肾炎、肾病综合症、重度营养不良

㈢　C3测定的临床意义

⏹补体中含量最高，是经典途径和旁路途径的关键物质，也是一种急性时相反应蛋白

⏹增高见于：

急性炎症或传染病早期、

急性组织损伤、恶性肿瘤、

移植排异反应

㈢　C3测定的临床意义

⏹降低见于：

⑴补体合成能力降低：

慢性肝病、肝坏死

⑵补体合成原料不足：

营养不良

⑶补体消耗或丢失太多：

急性肾小球肾炎链球菌感染后肾炎、狼仓性肾炎、SLE活动期、化疗后

⑷先天补体缺乏

•㈣C4测定的临床意义

•增高：

见于各种传染病、急性炎症（如急性风湿热、皮肌炎、关节炎等）和组织损伤等

•降低：

见于自身免疫性肝炎、狼仓性肾炎

•SLE、类风关、IgA型肾病等

•在SLE，C4的降低常早于其他补体成分，且缓解时较其他成分回升迟

•㈤B因子测定的临床意义

•主要反应补体旁路途径的溶血功能

•增高：

见于某些自身免疫性疾病、肾综、

•慢性肾炎、恶性肿瘤

•降低：

见于肝病、急性肾小球肾炎、

•自身免疫性溶贫

•三、细胞免疫检测

•

•免疫细胞

•泛指执行机体免疫功能的各种细胞，主要包括T、B和NK细胞等与免疫应答有关的细胞。

•不同的细胞群或亚群各有其不同的表面标志和功能，可反映机体的细胞免疫状态或功能

•

•细胞免疫检测的应用

•自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测

•骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护

•感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测

•某些疾病的发病机制研究

•

•T细胞抗原标记：

CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8

•B细胞抗原标记：

CD10、CD19、CD20、CD21、CD22

•髓系（粒-单系）抗原标记：

CD11b、CD31-36、CD64、CD68、CD13、

CD14、CD15、MPO

•巨核系抗原标记：

CD41a、CD41b、CD42b、CD61

•干细胞抗原标记：

CD34

•祖细胞抗原标记：

CD38

•红细胞抗原标记；CD71、血型抗原A、H

•非谱系抗原标记：

HLA-DR

急性白血病免疫分型

分型基础：

正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现，表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特性。

这些细胞表面和细胞浆内的抗原随着分化成熟过程不断发生改变，称为造血细胞分化抗原。

分化抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。

T淋巴细胞表面标志检测

一、T淋巴细胞表面标志检测

1.E玫瑰花结形成试验:

CD2+

2.T细胞分化抗原测定：

CD3+、CD4+、CD8+

免疫荧光法和流式细胞术

临床意义：

•自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测

•骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护

•感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测

•某些疾病的发病机制研究

CD3+检测的临床意义：

⏹总T淋巴细胞的重要标志

⏹评价免疫缺陷症及白血病、淋巴瘤的分型诊断

⏹自身免疫性疾病如SLE、类风湿关节炎等的免疫调节治疗

⏹器官移植或骨髓移植时免疫监测及指导免疫抑制治疗

CD3+CD4+检测的临床意义：

⏹辅助、诱导T淋巴细胞的标志

⏹机体免疫功能检测

⏹白血病、淋巴瘤的分型诊断

⏹免疫抑制治疗效果评价

⏹病毒感染性疾病时常降低

CD3+CD4+检测的临床意义：

CD4+绝对计数

是HIV（+）者/AIDS诊断和分型指标之一。

HIV（+）者分型：

一期：

>500×106/L;

二期：

（200-499）×106/L；

三期：

<200×106/L

CD3+CD8+检测的临床意义

⏹抑制、杀伤性T淋巴细胞的标志

⏹病毒感染性疾病时常增高

CD4+/CD8+减低:

常见于爱滋病、恶性肿瘤进行期及复发时

CD4+/CD8+增高:

在器官移植时预示可能发生

排斥反应、自身免疫病

•二、B淋巴细胞表面标志检测

•1.B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白测定：

•SmIgM、SmIgD

•免疫荧光法、流式细胞术

•2.B淋巴细胞分化抗原检测：

•CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD40

•

•二、B淋巴细胞表面标志检测

•临床意义：

•1.B淋巴细胞膜表面仅表达SmIgM则为未成熟B淋巴细胞，而同时表达SmIgM、SmIgD则为成熟B淋巴细胞

•2.SmIg+细胞增多：

慢淋、毛细胞性白血病、巨球蛋白血症

•3.SmIg+细胞减低：

体液免疫缺陷如丙种免疫球蛋白缺乏症等

•

•二、B淋巴细胞表面标志检测

•临床意义：

•CD19为全部B淋巴细胞共有的表面标志

•CD19增高见于B淋巴细胞系统的恶性肿瘤

•CD19减低见于体液免疫缺陷病

三、淋巴细胞亚群功能检测

㈠淋巴细胞转化试验：

1.形态学方法：

有丝分裂原：

T淋巴细胞---植物血凝素、

刀豆蛋白A、美洲商陆

B淋巴细胞---美洲商陆、

葡萄球菌A蛋白

三、淋巴细胞亚群功能检测

⏹临床意义：

⏹反映机体的细胞免疫功能水平，

⏹估计疾病的疗效和预后

㈢NK细胞的免疫检测

⒈数量检测——免疫荧光法、流式细胞术CD16+56

⒉功能的检测——

⏹NK细胞活性测定：

酶释法、

放射性核素法、免疫荧光法

⏹抗体依赖性细胞介导的细胞毒（ADCC）测定：

㈢NK细胞的免疫检测

临床意义

1.NK细胞活性增高：

病毒感染早期、器官移植患者

2.NK细胞活性减低：

恶性肿瘤、AIDS、联合免疫缺陷病

3.抗肿瘤疗效观察和预后评价

4.免疫调节功能：

释放IFN-γ、TNF-β等，增强抗感染和免疫监视能力

第三节感染免疫检测

一、血清抗链球菌溶血素“O”试验（P434）

⏹链球菌溶血素“O”是A群溶血性链球菌产生的溶血外毒素，可刺激机体产生特异的抗链球菌溶血素“O”（ASO）

一、血清抗链球菌溶血素“O”试验

⏹临床意义

1.链球菌感染1周后ASO开始升高，4-6周达高峰，以后逐渐下降，在体内可持续存在数月甚至数年

2. 增高见于：

风湿性疾病、急性肾小球肾炎、扁桃体炎

3正常人血清中可存在ASO

二、伤寒和副伤寒沙门菌免疫检测

1.肥达反应（WR）：

利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测患者血清中有无相应抗体的一种凝集试验。

参考值:

直接凝集法

伤寒“H”＜1：

160；“O”＜1：

80。

副伤寒甲、乙、丙都＜1：

80。

肥达反应的临床意义

⏹WR阳性一般出现在伤寒发病后一周，阳性率10%；第二周上升为60-70%；第四周可达90%以上。

⏹单份血清抗体效价“O”＞1：

80及“H”＞于1：

160者有诊断意义；

⏹若动态观察，WR持续超过参考值或较原效价升高4倍以上者更有价值。

⏹“O”不高，“H”升高见于预防接种后或非特异回忆反应

⏹“O”升高，“H”不高见于感染早期或其他沙门菌感染

2.伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定

参考值:

ELISA法正常人为阴性或滴度＜1：

20

临床意义：

发病后一周即可出现升高，有早期诊

　　　　断价值，若其滴度＞1：

20对诊断伤寒带

　　　　菌者也有意义。

3．伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定

参考值：

胶乳凝集法为阴性

临床意义：

阳性对确诊沙门菌感染更有重要意义

三、梅毒螺旋体抗体检测（P438）

⏹初筛试验（非特异性反应素）：

快速血浆反应素试验（RPR）

不加热血清反应素试验（USR）

美国性病研究实验室实验（VDRL）

⏹确诊试验（特异性抗体）：

梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）

荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）

⏹临床意义：

1.USR、RPR法：

感染梅毒螺旋体后1-2周检出率为76％，二期梅毒为95-100%，晚期梅毒为70-95%，隐性感染期为70-80%，SLE、疟疾、结核、瘤型麻风病等可出现阳性反应。

可作定量，用于疗效观察。

2.筛选试验阳性的情况下必须做确认试验，阳性可肯定梅毒的诊断。

确诊试验灵敏度高，特异性强，不受药物治疗的影响，特异性抗体可持续数年甚至终身。

不能用于疗效观察。

四、TORCH试验

⏹TO：

刚地弓型虫

⏹R：

风疹病毒

⏹C：

巨细胞病毒

⏹H：

单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型

⏹这组病毒常引起围产期感染，导致流产、早产、死胎和各种异常，目前已作为妇产科产前常规检查项目

五、C反应蛋白（CRP）（P439）

⏹能与肺炎链球菌C多糖发生反应的急性时相反应蛋白

⏹细菌感染，尤其G-杆菌感染，CRP明显增高；病毒感染不增高或仅轻度增高

⏹风湿热的疗效观察：

急性期或活动期CRP增高可达200mg/L静止期恢复正常。

三、C反应蛋白（CRP）（P439）

⏹判断组织损伤的敏感指标：

器质性损伤CRP增高，功能性损伤CRP正常。

⏹器官移植后疗效观察指标：

排异反应时CRP增高

⏹超敏CRP对急性冠脉综合症的诊断和危险性评估有意义

第四节自身免疫检测

⏹自身免疫耐受：

在正常情况下，机体的免疫系统对自身抗原表现为不应答

⏹自身免疫：

当某些原因消弱或破坏正常的自身耐受时，免疫系统即会对自身组织或成分产生免疫应答

⏹自身免疫病：

指由自身免疫应答而产生的疾病

⏹自身抗体：

指针对自身组织或成分产生的抗体

㈠类风湿因子（RF）测定

⏹类风湿因子是由变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性疾病患者的血清或关节液内。

它有IgM型，也有IgG、IgA、IgD和IgE型。

⏹检测方法：

胶乳凝集法、免疫比浊法、

RIA、ELISA法

㈠类风湿因子（RF）测定

⏹临床意义

1.类风关（RA）时，阳性率可达79.6%，高滴度RF支持对早期RA的诊断，RF滴度与临床表现正相关

2.SLE、多发性硬化、干燥综合征时可见阳性

3.部分老年人可见RF阳性

㈡抗核抗体检测

⏹概念：

抗核抗体（ANA）指抗各种核成分[脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、和可提取的核抗原（ENA）等]自身抗体的总称。

ANA的性质主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD，无器官和种族的特异性，ANA主要存在于血清中，也可以存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。

⏹抗核抗体（ANA）检测可作为自身免疫病的筛选试验

㈡抗核抗体检测

㈡抗DNA抗体检测

⏹方法:

间接免疫荧光法、ELISA法和RIA法

⏹临床意义：

•抗dsDNA抗体:

为SLE特征性标志抗体,

特异性95-100%,敏感度30-50%,

抗体滴度与疾病活动度相关（阳性率70-90%）

•抗ssDNA抗体:

阳性见于SLE、药物性狼仓

㈢抗可提取性核抗原（ENA）

多肽抗体谱测定

⏹ 方法：

免疫印迹法

㈢抗可提取性核抗原（ENA）多肽抗体谱测定

⏹临床意义

•抗Sm抗体：

主要见于SLE

•抗nRNP抗体：

主要见于混合性结缔组织病

•抗SSA、抗SSB抗体：

主要见于干燥综合症

•抗Scl-70抗体：

主要见于进行性系统性硬化症

•抗组蛋白抗体：

主要见于药物性狼仓、SLE

三、抗组织细胞抗体检测

㈠、抗肾小球基底膜抗体（抗GBM抗体）

是抗基底膜抗体型肾小球肾炎特异性抗体，包括免疫复合物型肾小球肾炎、急进型肾小球肾炎等

㈡抗乙酰胆碱受体抗体测定（AchRA）：

是一种针对运动肌细胞上乙酰胆碱受体的自身抗体，阳性主要见于重症肌无力

㈢抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）

⏹ANCA是血管炎患者的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异指标

⏹ANCA分胞质型（cANCA）和核周型（pANCA）两型

⏹cANCA阳性主要见于韦格纳肉芽肿

⏹pANCA主要与多发性微动脉炎相关

㈣抗心磷脂抗体（ACA）

⏹ACA是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体

⏹SLE患者中枢神经系统血栓形成与阳性ACA显著相关，血清及CSF中ACA检测有助神经精神性狼仓患者的临床诊断

⏹高水平ACA是急性脑血管病的预后不良信号

⏹70%未经治疗的ACA阳性患者可发生自发性流产和宫内死胎，尤其IgM型ACA可作为自发性流产的前瞻性指标

本章要求：

1.能够概述免疫球蛋白、补体（C3、C4、C1q、B因子）、分化抗原（CD3、CD4、CD8）的概念，检测方法及临床意义。

2.了解T细胞、B细胞数量和功能的检测方法及NK细胞活性检测的临床意义。

3.掌握自身免疫的概念（包括自身免疫耐受、自身免疫病的概念），掌握类风湿因子、抗核抗体的概念及检测的临床意义。

4.掌握ASO、肥达氏反应检测的临床意义。

5.掌握TORCH实验包含的检测项目及临床意义。

6.掌握梅毒检测的方法及临床意义。

7.掌握C-反应蛋白检测的临床意义。

9.了解抗ENA、抗dsDNA、抗GBM、ANCA、ACA检测的临床意义。