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1、临床免疫学检验 临床免疫学检验一、免疫球蛋白检测 概念：免疫球蛋白（Ig）是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称。由浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。（一）分类 按重链性质分:IgG、IgA、IgM、IgD 、 IgE、IgG 于出生后三个月开始合成， 35岁接近成人水平。IG是血液中含量最高的Ig，占血清总Ig的75%80%，是抗感染的主要抗体。是唯一能通过胎盘的抗体。IgA：分为分泌型和血清型，分泌型的合成和分泌部位在肠道、呼吸道、乳腺、唾液腺和泪腺，血清型占总Ig的1020%。IgM：是分子量最大的Ig。占血清Ig的5-10%。是个体发育过程中最早出

2、现的抗体，在胚胎发育晚期的胎儿即能产生IgM。在机体受抗原刺激后，是最先产生的抗体。IgM是血管内抗感染的主要抗体。 IgE:是正常人血清中含量最少的Ig。约0.10.9mg/L。占总血清Ig的0.02%，为亲细胞抗体。参与型超敏反应,与变态反应、寄生虫病及皮肤过敏有关。（四）临床意义免疫球蛋白增高 （1）单克隆免疫球蛋白增高（M蛋白血症） IgG、IgA 、IgD 或IgE增高。见于：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症.淋巴样异常增生性疾病等。 （2）多克隆免疫球蛋白增高 感染：特别是慢性感染如细菌、寄生虫、螺旋体感染，IgG、IgM增高 自身免疫性疾病：SLE以IgG、IgA或IgG、 IgM增高

3、多见，类风关以IgM增高为主 慢性肝病：IgG、 IgA 、IgM可增高，慢活肝IgG、IgM增高明显IgD增高：见于IgD型多发性骨髓瘤、妊娠末期、大量吸烟者 IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、变态反应性疾病、寄生虫病及皮肤过敏、急慢肝、肾综免疫球蛋白减少 IgG6.0g/L，IgM、IgA0.4g/L （1）先天性：见于先天性无丙种球蛋白血症、先天无胸腺症 （2）获得性： 见于 大量蛋白丢失性疾病：肾综、剥脱性皮炎中毒性骨髓病、白血病、淋巴网状系统肿瘤：淋巴瘤、霍奇金病 长期使用免疫抑制剂Ig减少易引起反复感染 IgG缺乏：易患化脓性感染 IgM 缺乏：易患革兰氏性阴败血症 IgA缺乏

4、：易患呼吸道感染二、血清M蛋白检测 M蛋白是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的，具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段。M蛋白检测的临床意义 多发性骨髓瘤 巨球蛋白血症 重链病：型、型、型 半分子病：一条重链+一条轻链 恶性淋巴瘤 良性M蛋白血症二、补体检测 补体是人或动物血清中的一组具有酶活性的糖蛋白，在机体免疫系统中发挥抗感染和免疫调节的作用，也参与免疫病理反应。 CH50测定 CH50临床意义 主要反应补体经典激活途径的溶血功能，其结果与C1-C9各组分的量和活性均有关 增高见于：急性炎症、组织损伤 降低见于： 急、慢性肾小球肾炎 各种自身免疫病 感染性疾病 作为判断肝病

5、严重程度的指标C1q测定的临床意义 是补体经典途径激活的始动因素 增加：见于骨髓炎、类风关、痛风 降低：见于SLE、肾小球肾炎、肾病综合症、重度营养不良C3测定的临床意义 补体中含量最高，是经典途径和旁路途径的关键物质，也是一种急性时相反应蛋白 增高见于：急性炎症或传染病早期、 急性组织损伤、恶性肿瘤、 移植排异反应C3测定的临床意义 降低见于： 补体合成能力降低：慢性肝病、肝坏死 补体合成原料不足：营养不良 补体消耗或丢失太多：急性肾小球肾炎链球菌感染后肾炎、狼仓性肾炎、SLE活动期、化疗后 先天补体缺乏 C4测定的临床意义 增高：见于各种传染病、急性炎症（如急性风湿热、皮肌炎、关节炎等）和

6、组织损伤等 降低：见于自身免疫性肝炎、狼仓性肾炎 SLE、类风关、IgA型肾病等 在SLE，C4的降低常早于其他补体成分，且缓解时较其他成分回升迟 B因子测定的临床意义 主要反应补体旁路途径的溶血功能 增高：见于某些自身免疫性疾病、肾综、 慢性肾炎、恶性肿瘤 降低：见于肝病、急性肾小球肾炎、 自身免疫性溶贫 三、细胞免疫检测 免疫细胞 泛指执行机体免疫功能的各种细胞，主要包括T、B和NK细胞等与免疫应答有关的细胞。 不同的细胞群或亚群各有其不同的表面标志和功能，可反映机体的细胞免疫状态或功能 细胞免疫检测的应用 自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测 骨髓移植和器官移植

7、过程中免疫功能监护 感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测 某些疾病的发病机制研究 T细胞抗原标记： CD2、CD3、CD4、CD5 、CD7、 CD8 B细胞抗原标记： CD10、CD19、CD20、CD21、CD22 髓系（粒-单系）抗原标记： CD11b、CD31-36、CD64、CD68、CD13、 CD14、CD15、MPO 巨核系抗原标记： CD41a、CD41b、CD42b、CD61 干细胞抗原标记：CD34 祖细胞抗原标记：CD38 红细胞抗原标记；CD71、血型抗原A、H 非谱系抗原标记：HLA-DR 急性白血病免疫分型 分型基础：正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功

8、能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现，表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特性。这些细胞表面和细胞浆内的抗原随着分化成熟过程不断发生改变，称为造血细胞分化抗原。分化抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。T淋巴细胞表面标志检测一、T淋巴细胞表面标志检测 1. E玫瑰花结形成试验:CD2+ 2.T细胞分化抗原测定： CD3+、CD4+、CD8+ 免疫荧光法和流式细胞术临床意义： 自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测 骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护 感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测 某些疾

9、病的发病机制研究CD3+检测的临床意义： 总T淋巴细胞的重要标志 评价免疫缺陷症及白血病、淋巴瘤的分型诊断 自身免疫性疾病如SLE、类风湿关节炎等的免疫调节治疗 器官移植或骨髓移植时免疫监测及指导免疫抑制治疗CD3+CD4+检测的临床意义： 辅助、诱导T淋巴细胞的标志 机体免疫功能检测 白血病、淋巴瘤的分型诊断 免疫抑制治疗效果评价 病毒感染性疾病时常降低CD3+CD4+检测的临床意义：CD4+绝对计数 是HIV（+）者/AIDS诊断和分型指标之一。 HIV（+）者分型： 一期：500106/L; 二期：（200-499） 106/L； 三期： 200106/L CD3+CD8+检测的临床意义

10、 抑制、杀伤性T淋巴细胞的标志 病毒感染性疾病时常增高CD4+/CD8+减低:常见于爱滋病、恶性肿瘤进行期及复发时 CD4+/CD8+增高:在器官移植时预示可能发生 排斥反应、自身免疫病 二、B淋巴细胞表面标志检测 1.B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白测定： SmIgM、 SmIgD 免疫荧光法、流式细胞术 2.B淋巴细胞分化抗原检测： CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD40 二、B淋巴细胞表面标志检测 临床意义： 1.B淋巴细胞膜表面仅表达SmIgM则为未成熟B淋巴细胞，而同时表达SmIgM、 SmIgD则为成熟B淋巴细胞 2.SmIg+细胞增多：慢淋、毛细胞性白血病、巨球蛋白

11、血症 3.SmIg+细胞减低：体液免疫缺陷如丙种免疫球蛋白缺乏症等 二、B淋巴细胞表面标志检测 临床意义： CD19为全部B淋巴细胞共有的表面标志 CD19增高见于B淋巴细胞系统的恶性肿瘤 CD19减低见于体液免疫缺陷病三、淋巴细胞亚群功能检测 淋巴细胞转化试验： 1. 形态学方法： 有丝分裂原： T淋巴细胞-植物血凝素、 刀豆蛋白A、美洲商陆 B淋巴细胞-美洲商陆、 葡萄球菌A蛋白 三、淋巴细胞亚群功能检测 临床意义： 反映机体的细胞免疫功能水平， 估计疾病的疗效和预后NK细胞的免疫检测数量检测免疫荧光法、流式细胞术 CD16+56功能的检测 NK细胞活性测定：酶释法、 放射性核素法、免疫荧

12、光法 抗体依赖性细胞介导的细胞毒（ADCC）测定：NK细胞的免疫检测临床意义 1. NK细胞活性增高：病毒感染早期、器官移植患者 2. NK细胞活性减低：恶性肿瘤、AIDS、联合免疫缺陷病 3.抗肿瘤疗效观察和预后评价 4.免疫调节功能：释放IFN-、TNF- 等，增强抗感染和免疫监视能力第三节 感染免疫检测一、血清抗链球菌溶血素“O”试验（P434） 链球菌溶血素“O”是 A群溶血性链球菌产生的溶血外毒素，可刺激机体产生特异的抗链球菌溶血素“O”（ASO）一、血清抗链球菌溶血素“O”试验 临床意义1. 链球菌感染1周后ASO开始升高，4-6周达高峰，以后逐渐下降，在体内可持续存在数月甚至数年

13、2.增高见于：风湿性疾病、急性肾小球肾炎、扁桃体炎3正常人血清中可存在ASO二、伤寒和副伤寒沙门菌免疫检测1.肥达反应（WR）：利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测患者血清中有无相应抗体的一种凝集试验。参考值 :直接凝集法 伤寒 “H”1：160；“O”1：80。 副伤寒 甲、乙 、丙都1：80。 肥达反应的临床意义 WR阳性一般出现在伤寒发病后一周，阳性率10%；第二周上升为60-70%；第四周可达90%以上。 单份血清抗体效价“O”1：80及“H”于1：160者有诊断意义； 若动态观察，WR持续超过参考值或较原效价升高4倍以上者更有价值。 “O”不高，“H”升高见于预防接种后或非特异回忆

14、反应 “O”升高，“H” 不高见于感染早期或其他沙门菌感染2.伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定 参考值: ELISA法正常人为阴性或滴度1：20 临床意义：发病后一周即可出现升高，有早期诊断价值，若其滴度1：20对诊断伤寒带菌者也有意义。3伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定 参考值 ： 胶乳凝集法为阴性 临床意义：阳性对确诊沙门菌感染更有重要意义三、梅毒螺旋体抗体检测（P438） 初筛试验（非特异性反应素）： 快速血浆反应素试验（RPR） 不加热血清反应素试验（USR） 美国性病研究实验室实验（VDRL） 确诊试验（特异性抗体）： 梅毒螺旋体血凝试验（TPHA） 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-

15、ABS） 临床意义： 1.USR、RPR法：感染梅毒螺旋体后1-2周检出率为76，二期梅毒为95-100%，晚期梅毒为70-95%，隐性感染期为70-80%， SLE、疟疾、结核、瘤型麻风病等可出现阳性反应。可作定量，用于疗效观察。 2.筛选试验阳性的情况下必须做确认试验，阳性可肯定梅毒的诊断。确诊试验灵敏度高，特异性强，不受药物治疗的影响，特异性抗体可持续数年甚至终身。不能用于疗效观察。 四、TORCH试验 TO：刚地弓型虫 R：风疹病毒 C：巨细胞病毒 H：单纯疱疹病毒型和型 这组病毒常引起围产期感染，导致流产、早产、死胎和各种异常，目前已作为妇产科产前常规检查项目五、C反应蛋白（CRP）

16、（P439） 能与肺炎链球菌C多糖发生反应的急性时相反应蛋白 细菌感染，尤其G-杆菌感染， CRP明显增高；病毒感染不增高或仅轻度增高 风湿热的疗效观察：急性期或活动期CRP增高可达200mg/L静止期恢复正常。三、C反应蛋白（CRP）（P439） 判断组织损伤的敏感指标：器质性损伤CRP增高，功能性损伤CRP正常。 器官移植后疗效观察指标：排异反应时CRP增高 超敏CRP对急性冠脉综合症的诊断和危险性评估有意义第四节 自身免疫检测 自身免疫耐受：在正常情况下，机体的免疫系统对自身抗原表现为不应答 自身免疫：当某些原因消弱或破坏正常的自身耐受时，免疫系统即会对自身组织或成分产生免疫应答 自身免

17、疫病： 指由自身免疫应答而产生的疾病 自身抗体： 指针对自身组织或成分产生的抗体 类风湿因子（RF）测定 类风湿因子是由变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性疾病患者的血清或关节液内。它有IgM型，也有IgG、IgA、 IgD和IgE型。 检测方法：胶乳凝集法、免疫比浊法、 RIA、ELISA法 类风湿因子（RF）测定 临床意义 1.类风关（RA）时，阳性率可达79.6%，高滴度RF支持对早期RA的诊断，RF滴度与临床表现正相关 2.SLE、多发性硬化、干燥综合征时可见阳性 3.部分老年人可见RF阳性抗核抗体检测 概念： 抗核抗体（ANA）指抗各种核成分脱氧核糖核蛋白（DNP

18、）、DNA、和可提取的核抗原（ENA）等自身抗体的总称。ANA的性质主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD，无器官和种族的特异性， ANA主要存在于血清中，也可以存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。 抗核抗体（ANA）检测可作为自身免疫病的筛选试验抗核抗体检测抗DNA抗体检测 方法: 间接免疫荧光法、ELISA法和RIA法 临床意义： 抗dsDNA抗体:为SLE特征性标志抗体, 特异性95-100%,敏感度30-50%, 抗体滴度与疾病活动度相关（阳性率70-90%） 抗ssDNA抗体:阳性见于SLE、药物性狼仓抗可提取性核抗原（ENA） 多肽抗体谱测定 方法：免疫印迹法抗可提取性核抗原（

19、ENA）多肽抗体谱测定 临床意义 抗Sm抗体：主要见于SLE 抗nRNP抗体：主要见于混合性结缔组织病 抗SSA、抗SSB抗体：主要见于干燥综合症 抗Scl-70抗体：主要见于进行性系统性硬化症 抗组蛋白抗体：主要见于药物性狼仓、SLE三、抗组织细胞抗体检测、抗肾小球基底膜抗体（抗GBM抗体） 是抗基底膜抗体型肾小球肾炎特异性抗体，包括免疫复合物型肾小球肾炎、急进型肾小球肾炎等抗乙酰胆碱受体抗体测定（AchRA）： 是一种针对运动肌细胞上乙酰胆碱受体的自身抗体，阳性主要见于重症肌无力抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） ANCA是血管炎患者的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异指标 ANCA分胞质型（

20、cANCA）和核周型（pANCA）两型 cANCA阳性主要见于韦格纳肉芽肿 pANCA主要与多发性微动脉炎相关抗心磷脂抗体（ACA） ACA是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体 SLE患者中枢神经系统血栓形成与阳性ACA显著相关，血清及CSF中ACA检测有助神经精神性狼仓患者的临床诊断 高水平ACA是急性脑血管病的预后不良信号 70%未经治疗的ACA阳性患者可发生自发性流产和宫内死胎，尤其IgM型ACA可作为自发性流产的前瞻性指标本章要求：1. 能够概述免疫球蛋白、补体（C3、C4、C1q、B因子）、分化抗原（CD3、CD4、CD8）的概念，检测方法及临床意义。2. 了解T细胞、B细胞数量和功能的检测方法及NK细胞活性检测的临床意义。3. 掌握自身免疫的概念（包括自身免疫耐受、自身免疫病的概念），掌握类风湿因子、抗核抗体的概念及检测的临床意义。4. 掌握ASO、肥达氏反应检测的临床意义。5. 掌握TORCH实验包含的检测项目及临床意义。6. 掌握梅毒检测的方法及临床意义。7. 掌握C-反应蛋白检测的临床意义。9. 了解抗ENA、抗dsDNA、抗GBM、ANCA、ACA检测的临床意义。