清洁验证之分析方法上中英文版PDA TR 49内容节选6.docx

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清洁验证之分析方法上中英文版PDATR49内容节选6

清洁验证之分析方法-上（中英文版）（PDATR49内容节选6）

6.0AnalyticalMethods分析方法

Itisessentialtoacleaningvalidationprogramthattheappropriateanalyticalmethodsareutilized.

一个清洁验证程序使用适当的分析方法是非常必要的。

Analyticalmethodsmustbeappropriateinthattheycanadequatelydetecttheresidue（s）ofconcern.分析方法必须适当，能充分检测到相关残留物。

Itisalsoimportanttounderstandwhatcanbeconcludedfromtheanalyticalresult（e.g.,wastheproductnotremovedorwasthecleaningagentnotremoved?

）.

对能从分析结果中推断出什么的理解也是非常重要的（比如：

产品没有被去除或清洗剂没有被去除？

）。

Theresultsoftestingwilldetermineifthecleaningvalidationcycleisacceptableorifitneedstoberedeveloped.

检测结果将决定清洁验证周期是否接受或者是否需要重新开发。

Thus,itisimportanttohaveconfidenceintheresults.

因此，对结果的信任是非常重要的。

Thissectiondiscusseshowtoselecttheappropriateassaymethods,detailedinformationontheapplicabilityanduseofnonspecificassaysandmicrobialtestmethods,andassaymethodvalidation.

本部分讨论怎样选择合适的分析方法及其适用性的详细信息，非特定分析和微生物测试方法的使用，和分析方法验证。

本部分套乱怎样选择合适的含量分析方法，实用性的详细信息，非特定含量方法和微生物测试方法以及含量方法验证。

6.1SpecificAnalyticalMethods

6.1特定分析方法

Specificanalyticalmethodsarethosewhichmeasureacertainresidueinthepresenceofexpectedinterferences.

特定分析方法是指用于测量存在预期干扰时某个残留的方法。

Inacleaningprocessforbiotechnologyproductswherethespecificanalyteistheactiveprotein,suchinterferencesmayincludedegradationproductsandrelatedsubstances,excipients,cleaningagentsandcleaningagentby-products.

在生物技术产品的清洗过程中，特定分析物是活性蛋白，这样干扰可能包括降解产品和相关物质，辅料，清洗剂和产品清洗剂。

ExamplesofspecificmethodsincludeHPLC,ELISA,SDSPAGE,andPCR.

特定方法的例子包括HPLC,ELISA,SDSPAGE,和PCREach

ofthesemethodsrequirestheuseofanappropriatereferencestandard.

这些方法每个都需要使用一个适当参考标准。

Incontrast,nonspecificanalyticalmethodsmeasureageneralproperty,suchasconductivityorTOC,whichcouldbeduetoavarietyofanalytesorsources.

相对而言，非特定分析方法测量通用属性，比如：

电导率或者TOC，因为分析物或者来源的多样性。

Selectionofananalyticalmethodwilldependonthenatureoftheresidueasitexistsafterthecleaningprocess.

一个分析方法的选择将取决于清洁过后残留物的性质。

Onlyifaprotein（orotherorganicactive）isnotdegradedduringthecleaningprocess（survivinghightemperaturesandpHextremesinanaqueousenvironment,forexample）doesitmakesensetouseaspecificanalyticalmethodforthatactive.

只有当一种蛋白质（或者其他有机活性物质）在清洁过程中不能被降解（例如：

在高温和极端PH的水环境下残存），使用那种物质的特定分析方法才有意义。

Theadvantageofusingaspecificanalyticalmethodinthissituationisthatitgivesaprecisemeasureofthemajorresidueofconcern–theactiveitself.

在这种情况下使用特定分析方法的优势是它可以给出主要相关残留--活性物本身的精确测量。

Ifaspecificanalyticalmethodforanactiveproteinwereutilizedfollowingacleaningprocesswhichhasbeendemonstratedtodenature（degrade）thatactiveprotein,itislikelythatresiduesoftheactiveproteinwouldbenon-detectable（i.e.,notmeasurable）bythatspecificanalyticalmethod.

如果一个活性蛋白质的特定分析方法在紧接着的清洁过程中被使用，这个清洁过程用来证明降解（变性）这个活性蛋白质。

这个活性蛋白残留通过这个特定分析方法将很可能检测不到（不能被检测）。

Residuesofthatproteinwouldbevariousdegradedfragments.

那个蛋白质的残留可能讲解成多种片段。

Ifthenativeproteinwereactuallydetectedusingaspecificmethodforthatprotein,itislikelythattherehadbeenaseriousproblemwiththecleaningprocess,suchasacloggedspraydevicecausingalackofcoverageofthatportionoftheequipmentsurface.

如果天然的蛋白质真的用特定方法被检测到，那么清洁过程很有可能有一系列的问题，比如堵塞喷淋设备引起的设备表面喷淋覆盖不全面。

Insuchacase,failurewouldalsomostlikelybedetectedbyanonspecificmethodand/orbyvisualexamination.

在这种情况下，失败也可以通过非特定方法或目视检察被检测到。

Consequently,ifaspecificassaymethodisused,anonspecificassaymethodisalsorequired,unlessstudiesprovethattheproductisnotdegradedbythecleaningprocess.

因此，如果一个特定的含量分析方法被使用，一个非特定的分析方法也是需要的，除非研究证明清洗过程中产品没有被分解。

Inbiotechnologycleaningvalidation,specificanalyticaltechniquessuchasHPLCaremorelikelytobeusedfordetergents,becausethesurfactantsorotherfunctionalmaterialsinthedetergentsarenotlikelytodegradeinthecleaningprocess.

在生物技术清洁验证中，特定分析技术比如HPLC更倾向用于清洗剂的检测，因为表面活性剂或者清洁剂中的功能材料在清洁过程中不可能分解。

However,itshouldbenotedthatnonspecificmethodscanalsobeusedfordetergentsandothercleaningagents.

无论怎样，必须注意非特定方法也可以用于洗涤剂或者其他清洁剂

6.2ImpactofInactivation/DegradationoftheActive

6.2活性物质的降解/灭活的影响

Productinactivationmeansthattheactiveproteinismodifiedinsomewaysuchthatitisnolongeractiveandmaynolongerbemeasurablebyspecificanalyticalmethodsforthatnativeprotein.

产品灭活意味着活性蛋白被某些方式改变，这样这些蛋白不再有活性和不再被这种天然蛋白质的特定分析方法测量到。

Thismodificationusuallyinvolvesdegradationoftheactiveproteinintosmallerfragments,butmayalsoinvolveaprocessinwhichlargermoleculesareformed.

这个改变通常包括活性蛋白降解成小片段，但也可以包括蛋白大分子的形成过程。

Akeyissueforprocessequipmentcleaninginbiotechnologymanufacturingisthedegradationordeactivationoftheactiveproteinduringthecleaningprocess.

在生物技术产品生产中，工艺设备清洁的一个关键问题是活性蛋白在清洁过程中的降解或者钝化。

Thisisaresultofcleaningprocessesinbiotechnologyutilizinghot,aqueous,alkalineandacidiccleaningsolutions.

这是生物技术产品的清洗过程使用热，水，碱和酸的清洗溶剂的结果。

Undersuchconditions,itiswellrecognizedthatproteinactiveswilldegrade.

在这种条件下，将要降解的蛋白质活性物是容易被识别的。

Thisdegradationaffectsseveralissuesinthecleaningandcleaningvalidationprocess.

这个降解物在清洁和清洁验证过程中的影响是多方面的。

Becauseofthedegradation,theresiduesoftheactiveprotein（whichareactuallynowresiduesofthedegradedactiveprotein）aremorereadilyrinsedawayduringtherinsingstepofthecleaningprocess.

因为降解，活性蛋白的残留（实际上是活性蛋白降解物的残留）很容易在清洁过程中的淋洗这步时被淋洗掉。

Thisisbecausethedegradedfragmentstypicallyhavealowermolecularweightandarepotentiallymorepolar,bothconditionsleadingtogreaterwatersolubility.

这是因为降解的片段通常分子量小和极性更大，两种条件都导致更好的水溶解性。

Asecondconsequenceofthedegradationisthatitnolongerisscientificallyjustifiedtohaveananalyticalmethodwhichisspecificforthenativeprotein.

降解的第二个结果是使用一个特定的天然蛋白质分析方法不再是科学合理的。

Forthisreason,anonspecificmethodsuchasTOCorTotalProteinistypicallyusedtomeasureresiduesofthedegradedactive（aswellasotherorganicmolecules）inacleaningvalidationprotocol.基于这个原因，在清洁验证方案中，一个非特定方法（如：

TOC和总蛋白）通常被用于测量降解活性物质（其他有机分子也一样）的残留。

Athirdconsequenceisthatlimitsinbulkbiotechnologymanufacturingaretypicallynotappropriatelyestablishedbasedona“fractionofadose”calculationofthenativeprotein,sincetheresiduesaredegradedfragments.

还有一个结果是生物原料生产中的限度通常不能基于天然蛋白“剂量分数”的计算建立，因为残留是降解片段。

Sinceresiduesbeingsampledareresiduesofthedegradedprotein,itmayalsomakemorescientificsensetoperformsamplingrecoverystudiesbasedonrecoveryofthedegradedfragments.

因为残留取样是降解蛋白的残留，所以执行基于降解片段回收率的取样回收研究是更加科学有意义的。

However,assuminganincreaseinsolubilityfordegradedproteins,samplingrecoverystudiesonthenativeproteinwilltypicallybeaworstcaseascomparedtorecoveryofdegradedfragments.

假如降解蛋白的溶解性增加，天然蛋白的取样回收研究与降解片段的回收相比，其通常作为最差情况。

Whileitisassumedinalmostallcasesthattheactiveproteinsorotherlargeorganicmoleculesproducedinbiotechnologymanufacturingarereadilydegradedinhot,aqueousalkalineconditions,itisdesirabletodemonstratethiswithalaboratorystudy.

几乎所有情况下，活性蛋白或者大型有机分子在生物生产中，在热，水，碱条件下非常容易降解，这只是个假设，因此需要在实验室中证明。

Insuchasimple“beaker”study,thebulkactiveproteinisexposedtotheconditionsofthecleaningprocess,includingcleaningagentconcentration,temperatureandtime.

在这样一个简单的“烧杯”研究，活性蛋白原料暴露在清洗过程的条件下，包括清洗剂浓度，温度和时间。

Attheendofthatexposuretime,thepHisneutralized,andthetemperatureisreduced.

在暴露时间的最后，PH是中性的，温度是降低的。

Theresultantsolutionisthenanalyzedfortheactiveproteinbythespecificanalyticalprocedure（suchasELISA,HPLCorabioactivityassay）.

最终溶液被特定分析程序分析其活性蛋白质（例如：

ELISA,HPLC或者生物活性含量）

Insuchaprocedure,theratioofproteintocleaningsolutionshouldrepresentthesameratiopresentduringcleaning,oraworst-caseratio（aworst-caseisahigherratioofproteintocleaningsolution）.

在这个过程中，清洁溶液的蛋白质比例应等于清洁过程中蛋白质的比例，或者最差情况蛋白质的比例（最差情况是一个更高蛋白比例的清洁溶液）。

Theassaymethodologyforsuchstudiesmustbeappropriateandvalid.

这个研究的含量方法学必须是合适的和经验证的。

Careneedstobeexercisedinperformingsuchastudytoensurethatthechemicalsinthecleaningsolutiondonotinterferewiththeanalyticalprocedure.

为了确保清洁溶液中化学成分不被分析程序干扰，在进行这个研究过程中应特别注意。

Thiscanbeaddressedbyhavingadequatecontrols,suchasaddingtheactivetoasolutionoftheneutralizedcleaningsolutionatambienttemperature.

这可以用充分控制来解决，如：

向日常温度的中性清洗溶液加入活性物质。

Ifchemicalsinthecleaningsolutioninterferewiththespecificanalyticalprocedure,anotheroptionistoremovethembydiafiltration.

如果清洗溶液的化学成分被干扰特定分析程序，另一个选择是通过透析过滤去除它们。

Ifitisjustthesurfactantsinthecleaningagentthatinterfere,anotheroptionistoperformthedegradationstudywithjusttheequivalentamountofalkalipresentinthecleaningsolution.

如果它只是清洗剂中的表面活性剂的干扰，另一个选择是用与清洗溶液中等量的碱进行降解研究。

Notethatinmanycases,cleaninginabiotechnologyfacilityutilizesalkalinecleaningagentsfollowedbyanacidiccleaningsolution.

注意在许多情况下，生物技术设施的清洁碱清洁剂在使用酸清洁溶液之后使用。

Currentevidencesuggeststhatitisthealkalineportionthatismosteffectiveindegradingactiveproteins.

现有的证据证明含碱的部分对降解活性蛋白非常有效。

Companiesmaychoosetoperformadegradationstudyonlywiththealkalineagentandnotpursuedegradationstudieswiththeacidicsolutionunlessthealkalinecleaningagentaloneisinadequatefordegradation.

公司可以选择只使用含碱试剂进行降解研究，不追求使用酸溶液进行降解研究除非单独使用含碱清洁剂对降解不充分。

6.3NonspecificAnalyticalMethods

6.3非特定分析方法

6.3.1TotalOrganicCarbon（TOC）

6.3.1总有机碳

Mostofthecompoundsusedinbiotechnologyprocessesareoforganicnature.

在生物技术过程中使用的大部分成分是有机物。

TOCcandetectorganiccarbonwithagoodsensitivityinthesub-ppmrange;

TOC在亚于PPM范围内可以非常灵敏的检测有机碳。

howeverthissensitivitymaystillnotbeadequate