APT第二步实验阳离子纯化0125.docx
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APT第二步实验阳离子纯化0125
APT-第二步实验-阳离子纯化
1、MMC
时间：
20150114
层析柱规格
16*20
介质名称
MMCDiamond
层析介质量
30.8ml
样品名称
DEAE（6HP）201501135峰
上样量
约32mg
样品处理
用Hcl调PH至6.0
上样体积
45ml
程序如下：
Time（min）
B﹪
Flow（ml/min）
Fracton（min/管）
0
0
2
2
45
0
2
2
46
5
2
2
170
80
2
2
BufferA：
0.02mol/LPH6.0Tris-Hcl+0.1mol/LNacl
BufferB：
0.02mol/LPH6.0Tris-Hcl+1mol/LNacl
图谱如下：
效价检测结果如下：
样品名称
10ug聚集率%
2ug聚集率%
1ug聚集率%
粗毒
30ug/18.53
100
/
/
空白
84.56
/
/
DEAE20150113
上样液，0.506mg/ml
33.03/73.77
/
/
DEAE/MMC20150114
流穿，0.43mg/ml
70.09
/
/
DEAE/MMC20150114
38-50t，0.063mg/ml
76.07
/
/
DEAE/MMC20150114
58-64t，0.081mg/ml
73.46
/
/
DEAE/MMC20150114
65-71t，0.080mg/ml
77.4
/
/
结果显示：
收集峰与流穿峰均无效价。
时间：
20150115
层析柱规格
16*20
介质名称
MMCDiamond
层析介质量
28.6ml
样品名称
DEAE（6HP）201501136峰
上样量
约21mg
样品处理
用HAC调PH至4.5
上样体积
40ml
程序如下：
Time（min）
B﹪
Flow（ml/min）
Fracton（min/管）
0
0
1.5
3
60
0
1.5
3
61
5
1.5
3
190
80
1.5
3
BufferA：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC+0.1mol/LNacl
BufferB：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC+1mol/LNacl
MMC层析
20150115，MMC样品
0.483mg/ml
-4.94
絮团状物出现
20150115，MMC样品
10-32t，0.165mg/ml
84.19
20150115，MMC样品
38-53t，0.131mg/ml
86.62
20150115，MMC样品
55-70t，0.138mg/ml
时间：
20150116
样品名称
DEAE（6HP）201501136峰
图谱如下：
MMC层析
20150116，MMC上样液
0.626mg/ml
1.63
絮团状物出现
20150116，MMC原样
0.616mg/ml
-2.91
20150116，MMC-8-14t
0.186mg/ml
97.38
20150116，MMC-15-19t
0.161mg/ml
77.57
20150116，MMC-20-25t
0.164mg/ml
87.5
20150116，MMC-26-32t
0.140mg/ml
100
20150116，MMC-35-41t
0.146mg/ml
92.56
2、CM-FF
时间：
20150115
层析柱规格
16*20
介质名称
CMBestaroseFF
层析介质量
24ml
样品名称
DEAE（6HP）201501134-5峰
上样量
31.8mg
样品处理
用G-25柱交换HAC使PH至4.5
上样体积
55ml
程序如下：
Time（min）
B﹪
Flow（ml/min）
Fracton（min/管）
0
0
1.5
3
60
0
1.5
3
61
5
1.5
3
190
80
1.5
3
BufferA：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC
BufferB：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC+1mol/LNacl
图谱如下：
CM层析（DEAE-4,5峰上样）
20150115，CM上样液
D-G25,0.356mg/ml
2.33；4.01
絮团状物出现
20150115，CM流穿
8-26t,0.129mg/ml
-26.97
20150115，CM
31-33t,0.104mg/ml
78.8
20150115，CM
34-36t,0.230mg/ml
48.62
20150115，CM
37-42t,0.145mg/ml
-7.28
絮团状物出现
20150115，CM
43-53t,0.252mg/ml
0.62
20150115，CM
54-58t,0.225mg/ml
92.16
空白
84.42
对照，20120409,0.102mg/ml
5.50%/2ug
时间：
20150117
样品名称
DEAE（6HP）201501135峰
上样量
37.8mg
样品处理
用HAC调PH至4.5
20150117，CM层析
20150117，CM原液，峰5
0.,639mg/ml
71.75
过G-25后上样液
0.417mg/ml
80.18
FT
0.126mg/ml
95.27
20150117，CM-31-36t
0.228mg/ml
-15.92
絮团状物出现
20150117，CM-37-40t
0.129mg/ml
3.97
20150117，CM-41-42t
0.133mg/ml
0
20150117，CM-43-46t
0.296mg/ml
10.38
57.53%/2ug
20150117，CM-47-52t
0.189mg/ml
43.06
20150117，CM-53-59t
0.648mg/ml
62.61
20150117，CM-64-67t
0.109mg/ml
5.26
90.20/2ug
20150117，CM-47-52t，复测
0.084mg/ml
100
2.0/2ug
20150117，CM-43-46t，复测
0.054mg/ml
11.05/大团
4.9%/2ug，大团状物出现
3、SP-FF
时间：
20150116
层析柱规格
16*20
介质名称
SPBestaroseFF
层析介质量
26.6ml
样品名称
DEAE（6HP）201501136峰
上样量
28.7mg
样品处理
用G-25柱交换HAC使PH至4.5（实际3.7）
上样体积
40ml
程序如下：
Time（min）
B﹪
Flow（ml/min）
Fracton（min/管）
0
0
1.5
3
60
0
1.5
3
61
5
1.5
3
190
80
1.5
3
BufferA：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC
BufferB：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC+1mol/LNacl
图谱如下：
样品名称
10ug聚集率%
备注
DEAE20150116
峰6,0.665mg/ml
-3.56
絮团状物出现
DEAE20150116
峰6脱盐,0.473mg/ml
-3.12
DEAE20150116
SP上样液，0.502mg/ml
-4.42
SP流穿
8-12t，0.175mg/ml
0.28
SP-31t
0.157mg/ml
0
SP-28-32t
0.153mg/ml
32.71
SP-34t
0.198mg/ml
3.09
絮团状物出现
SP-33-38t
0.158mg/ml
1.29
SP-45t
0.819mg/ml
66.88
SP-峰3,41-50t
0.553mg/ml
80.57
SP-56t
0.314mg/ml
81.82
SP-54-58t
0.224mg/ml
81.81
时间：
20150119
层析柱规格
16*20
介质名称
CMBestaroseFF
层析介质量
24ml
样品名称
DEAE（6HP）201501134-5峰与5峰1：
1混合（各30ml）
上样量
38.76mg蛋白
样品处理
用G-25柱交换HAC使PH至4.5
上样体积
91ml
程序如下：
Time（min）
B﹪
Flow（ml/min）
Fracton（min/管）
0
0
1.5
3
90
0
1.5
3
61
5
1.5
3
220
80
1.5
3
BufferA：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC
BufferB：
0.02mol/LPH4.5NaAC-HAC+1mol/LNacl
图谱如下：
20150119，CM层析
样品
蛋白浓度
10ug聚集率
2ug聚集率
20150119CM原样
0.707mg/ml
11.76
絮团状物出
过G-25后上样液
0.406mg/ml
75.53
FT
0.0.181mg/ml
87.06
44-45T
0.226
-7.13
絮团状物出
46-48T
0.173
-0.97
絮团状物出
49-50T（主峰1前沿）
0.153
47.76
51-54T（主峰1）
0.398
-1.39
73.52
55-60T（主峰2）
0.467
51.32
64-67T
0.167
对比空白
71.88
CM-3-46-48T
CM-3-51-54T
CM-3-55-60T主峰1
CM-3-64-67T主峰2
CM-3-原样
Maker对比
CM-3-流穿
CM-3-37-43T
CM-3-44-45T
CM-3-G25脱盐
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