名词解释1.docx
《名词解释1.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《名词解释1.docx(26页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
![名词解释1.docx](https://file1.bdocx.com/fileroot1/2023-2/8/07c859b2-cc13-4144-9cd6-b6ee8164e313/07c859b2-cc13-4144-9cd6-b6ee8164e3131.gif)
名词解释1
名词解释:
酶活力单位:
在实验室规定的条件下,每分钟催化lumol底物变化所需要的酶量为一个酶活力国际单位(用“IU”表示,简写为U)。
酶的比活力:
是指在特定的条件下,单位质量(mg)蛋白质或RNA所具有的酶活单位数。
固定化酶:
固定在载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶
固定化活细胞:
固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞称为固定化细胞
固定化原生质体:
固定在载体上并在一定的空间范围内进行新陈代谢的原生质体。
膜分离技术:
借助一定孔径的高分子薄膜,将不同大小、形状、性质的颗粒或分子进行分离的技术。
酶促破碎法:
通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用,使细胞外层结构受到破坏,从而达到细胞破碎的方法。
萃取分离:
利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同而使溶质得到纯化或浓缩的方法。
酶分子修饰:
通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变,从而改变酶的某些特性和功能的技术过程。
大分子结合修饰:
采用水溶性大分子与酶的侧链基团共价结合,使酶分子的空间构象发生改变,从而改变酶的催化特性的方法。
肽链有限水解修饰:
在肽链的限定位点进行水解,使酶的空间构象发生某些精细的改变,从而改变酶的催化特性的方法。
氨基酸置换修饰:
将酶分子肽链上的某一个氨基酸置换成另一个氨基酸,从而改变酶的催化特性的修饰方法。
原生质体融合育种:
指通过人为的方法,使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合,借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程。
基因工程育种:
用体外重组DNA技术去获得新的重组基因。
组成酶:
细胞固有的酶类。
诱导酶:
是细胞为适应外来底物或其结构类似物而临时合成的一类酶。
分解代谢物阻遏:
指细胞内同时有两种分解底物(碳源或氮源)存在时,利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶合成的现象
反馈阻遏:
酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物使该酶的生物合成受到阻遏的现象
反馈抑制:
是最终产物抑制作用,在合成过程中,有些微生物合成途径的终点产物对该途径酶的活性调节,所引起的抑制作用。
发酵动力学:
研究发酵过程中细胞生长速率、产物生成速率、基质消耗速率以及环境因素对这些速率的影响的学科。
细胞定向进化:
是在细胞水平上进行定向进化的过程,以各种细胞为进化对象,目的是改良细胞的各种特征,主要包括微生物细胞的定向进化、动物细胞的定向进化、植物细胞的定向进化等。
酶反应器:
用于酶进行催化反应的容器及其附属设备。
固定化酶膜反应器:
由膜状或板状固定化酶或固定化微生物组装的反应器。
易错PCR技术:
在PCR技术的基础上,通过改变反应条件,增加碱基配对错误的出现频率,就成为易错PCR技术。
DNA重排技术:
又称为DNA改组技术,是从正突变基因文库中分离得到的同源DNA,用酶切割成随机片断,经过不加引物的多次PCR循环,使DNA的碱基序列重新排布而引起基因突变的技术过程。
基因家族重排技术:
又称为基因家族改组技术,是从基因家族的若干同源基因出发,用酶切割成随机片断,经过不加引物的多次PCR循环,使DNA的碱基序列发生重新排布而引起基因突变的技术过程
双水相萃取:
利用溶质在两个互不相溶的水相中的溶解度不同而达到分离。
超临界流体萃取:
是利用欲分离物质与杂质在超临界流体中的溶解度不同而达到分离的一种萃取技术。
酶分子:
是具有完整的化学结构和空间结构的生物大分子。
金属离子置换修饰:
把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子,使酶的催化特性发生改变的修饰方法.
酶定向进化:
是模拟自然进化过程(随机突变和自然选择),在体外进行酶基因的人工随机突变,建立突变基因文库,在人工控制条件的特殊环境下,定向选择得到具有优良催化特征的酶的突变体的技术过程。
第一章 绪论
1、何谓酶工程,试述其主要内容和任务。
答:
酶的生产、改性与应用的技术过程称为酶工程。
酶的生产:
微生物发酵产酶、动植物培养产酶、酶的提取和分离纯化
酶的改性:
酶分子修饰、酶固定化、酶非水相催化和酶的定向进化
酶的应用:
通过酶的催化作用获得人们所需的酶,并通过各种方法使酶的催化特性得以改进,充分发挥其催化功能。
酶工程的内容:
微生物细胞发酵产酶,动植物细胞培养产酶,酶的提取与分离纯化,酶分子的修饰,酶、细胞、原生质体固定化,酶非水相催化,酶定向进化,酶反应器和酶的应用等。
酶工程的任务:
经过预先设计,通过人工操作获得人们所需的酶,并通过各种方法使酶的催化特性得以改进,充分发挥其催化功能。
2、酶有哪些显著的催化特性?
专一性强、催化效率高和作用条件温和。
3、影响酶催化作用的主要因素。
底物浓度、酶浓度、温度、pH、抑制剂、激活剂
4、如何测定固定化酶的比活力?
固定化酶常用的活力测定方法有哪些?
在固定化酶中,一般采用每克(g)干固定化酶所具有的酶活力单位数表示。
固定化酶常用的活力测定方法:
振荡测定法、酶柱测定法、连续测定法
第二章酶的生物合成与发酵生产
1、提高酶的产量的措施。
(一)遗传控制
诱变育种
(1)使诱导型变为组成型——选育组成型突变株
(2)使阻遏型变为去阻遏型
选育营养缺陷型突变株
解除反馈阻遏
选育结构类似物抗性突变株
解除分解代谢物阻遏——选育抗分解代谢阻遏突变株
基因工程育种
改变细胞调节基因,使菌种由诱导型变为组成型。
增加结构基因的拷贝数,增加细胞专一性酶的生产。
(二)条件控制
(1)添加诱导物
酶的作用底物、作用底物的前体、反应产物、酶的底物类似物或底物修饰物P50
(2)降低阻遏物浓度
除去终产物
产物阻遏
添加阻止产物形成的抑制剂
避免使用葡萄糖
分解代谢物阻遏避免培养基过于丰富
添加一定量的cAMP
(3)添加表面活性剂
离子型对细胞有毒害作用
表面活性剂Tween-80
非离子型增加细胞通透性
TritonX-100
(4)添加产酶促进剂
2、酶生物合成的模式及每种模式的特征。
1.同步合成型
特征:
生物合成伴随着细胞的生长而开始;在细胞进入旺盛生长期时,酶大量合成;当细胞生长进入平衡期后,酶的合成随着停止。
2.延续合成型
特征:
酶的合成在细胞的生长阶段开始,在细胞生长进入平衡期后酶还可以延续合成一段时间。
3.中期合成型
特征:
酶在细胞生长一段时间后才开始,而在细胞生长进入平衡期以后,酶的生物合成也随之停止。
4.滞后合成型
特征:
酶在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始合成并大量积累。
3、影响酶生物合成模式的主要因素
1)mRNA的稳定性
高:
可在细胞停止生长后继续合成酶
差:
随着细胞停止生长而终止酶的合成
2)培养基中阻遏物的存在
不受阻遏:
随着细胞的生长而开始酶的合成。
受阻遏:
细胞生长一段时间或平衡期后,酶才开
4、优良产酶微生物菌种应具备的条件。
酶产量高
容易培养和管理(生长速率高、营养要求低)
产酶稳定性好
利于酶的分离提纯
安全可靠,无毒性(不是致病菌)
第三章固定化酶
1、酶固定化方法有哪几种?
各自的特点及适用范围
(1)方法:
热处理法、吸附法、包埋法、共价结合法、交联法
(2)特点
(3)适用范围:
①热处理法:
该法只适应于那些热稳定性较好的酶的固定化。
②物理吸附法:
物理吸附法的优点是操作简单,条件温和,对细胞活性影响小,酶活力损失小等,但细胞易受环境影响而脱落,操作稳定性差,另外,吸附的细胞数量少。
③包埋法:
优点:
不与酶蛋白氨基酸残基反应,很少改变酶的高级结构,酶活回收率高。
缺点:
只适合作用于小分子底物和产物的酶。
④共价结合法:
结合牢固,不易脱落,可连续使用较长的时间
载体活化操作复杂,对酶的活性有影响。
⑤交联法:
交联法制备的固定化酶或固定化菌体结合牢固,可以长时间使用。
交联法也用于含酶菌体或菌体碎片的固定化。
2、酶固定化后性质会发生什么变化?
原因是什么?
酶固定化后稳定性提高中,包括哪几方面的稳定性?
(1)酶的活性:
通常低于天然酶(有例外)。
(2)酶的稳定性
酶的耐热性、对变性剂、抑制剂、蛋白酶的抵抗力增加,固定化可以增强贮存稳定性和操作稳定性。
可能的原因:
①固定化增加了酶活性构象的牢固程度,可防止酶分子伸展变形;
②抑制酶的自身降解。
③固定化部分阻挡了外界不利因素对酶的侵袭。
包括:
(一)酶的最适温度
最适温度与酶稳定性有关。
多数酶固定化后热稳定性上升,最适温度也上升(有例外)。
(二)酶的最适pH
带负电荷载体:
最适pH向碱性偏移。
带正电荷载体:
最适pH向酸性偏移
(三)酶的动力学特征
固定化酶的表观米氏常数Km随载体的带电性能变化。
固定化载体与底物电荷相反,固定化酶的表观Km值降低。
固定化载体与底物电荷相同,固定化酶的表观Km值显著增加。
(四)酶的作用专一性
与自然酶基本相同。
但大分子底物难于接近酶分子,导致酶的专一性发生改变。
3、细胞固定化的方法有哪些?
细胞种类多种多样,大小和特征各不相同,故此细胞固定化的方法也有多种。
归纳起来,主要可分为吸附法和包埋法两大类方法。
4、简述固定化原生质体的制备方法与特点
原生质体制备好后,把离心收集到的原生质体重新悬浮在含有渗透压稳定剂的缓冲液中,配成一定浓度的原生质体悬浮液。
然后采用包埋法制成固定化原生质体。
特点:
①解除了细胞壁扩散障碍,可增加细胞膜的通透性,有利于氧气和营养物质的传递和吸收,也有利于胞内物质的分泌,可显著提高产率。
②由于有载体的保护作用,具有较好的操作稳定性和保存稳定性,可反复使用或连续使用较长时间,利于连续化生产。
③易于和发酵产物分开,有利于产物的分离纯化,提高产品质量。
④发酵的培养基中需要添加稳定剂,以保持原生质体的稳定性。
这些渗透压稳定剂在发酵结束后,可采用层析或膜分离技术等方法与产物分离。
固定化原生质由于没有细胞壁,细胞结构不完整,失去增殖能力,但由于细胞膜的结构没有受其影响,保持了细胞原有的新陈代谢特性
第四章酶的提取与分离纯化
1、细胞破碎的目的、方法。
目的:
大多数酶都存在于细胞内部,为了获得细胞内的酶,首先要收集细胞并进行细胞破碎,使细胞的外层结构破坏,然后进行酶的提取与分离纯化。
方法:
机械法、物理法、化学法、酶促破碎法
2、选择细胞破碎方法的依据。
(1)细胞的处理量:
大规模用机械法,小规模用非机械法。
(2)细胞壁的强度与结构
(3)目标产物对破碎条件的影响。
机械法考虑剪切力,酶法考虑对目标产物是否具有降解作用。
(4)破碎程度:
高压匀浆法,细胞碎片细小,固液分离困难。
(5)提取分离的难易
3、酶抽提的目标及方法。
(1)提取目标:
a.将目的酶最大限度地溶解出来。
b.保持生物活性。
(2)提取方法:
①盐溶液提取:
常用稀盐(常用NaCl)溶液(盐溶),对酶稳定性好、溶解度大,最常用。
②酸溶液提取
③碱溶液提取
④有机溶剂提取:
乙醇、丙酮和丁醇
(3)提取原则
a.相似相溶。
b.远离等电点的pH值,溶解度增加。
4、三种离心方法(差速离心、密度梯度离心和等密度梯度离心)的特点。
(1)差速离心特点:
用于分离大小和密度差异较大的颗粒。
(2)密度梯度离心特点:
:
区带内的液相介质密度小于样品物质颗粒的密度。
适宜分离密度相近而大小不同的固相物质。
(3)等密度梯度离心特点:
介质的密度梯度范围包括所有待分离物质的密度。
适于分离沉降系数相近,但密度不同的物质。
5、酶的分离纯化过程中常用沉淀法的种类及原理。
分离方法
分离原理
中性盐沉淀(盐析法)
利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性,通过在酶液中添加一定浓度的中性盐,使酶或杂质从溶液中析出沉淀,从而使酶与杂质分离
等电点沉淀法
利用两性电解质在等电点时溶解度最低,以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性,通过调节溶液的pH值,使酶或杂质沉淀析出,从而使酶与杂质分离
有机溶剂沉淀法
利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同,通过添加一定量的某种有机溶剂,使酶或杂质沉淀析出,从而使酶与杂质分离
复合沉淀法
在酶液中加入某些物质,使它与酶形成复合物而沉淀下来,从而使酶与杂质分离
选择性沉淀法(热变性和酸碱变性)
选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀,而不影响所需的酶,从而使酶与杂质分离
6、膜分离的原理及应用。
原理:
膜分离过程中,薄膜的作用是选择性地让小于其孔径的物质颗粒或分子通过,而把大于其孔径的颗粒截留。
应用:
电场膜分离:
脱盐,海水淡化,纯水制备,从发酵液中分离柠檬酸、谷氨酸及凝胶电洗脱。
在生物化工中,膜分离技术主要用于生物产品的分离、浓缩、分级与纯化。
具体应用可以分为以下几个方面:
(1)从药用植物中萃取生物活性分子,生物碱萃取和分离;
(2)来自不同微生物的类脂脂类,或用于类脂脂类回收,或从配糖和蛋白质中去除类脂脂类;
(3)从多种植物中萃取抗癌物质,特别是从红豆杉树皮和枝叶中获得紫杉醇防治癌症;
(4)维生素,主要是维生素E的萃取;
(5)对各种活性物质(天然的或合成的)进行提纯,除去不需要分子(比如从蔬菜提取物中除掉杀虫剂)或“渣物”以获得提纯产品;
(6)对各种天然抗菌或抗氧化萃取物的加工,如罗勒、串红、百里香、蒜、洋葱、春黄菊、辣椒粉、甘草和茴香子等。
7、比较吸附层析、疏水层析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析,高效液相色谱的概念及原理上的不同点。
吸附层析:
是利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离的层析方法。
离子交换层析:
是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不同而达到分离目的的一种层析分离方法。
凝胶层析:
又称为凝胶过滤、分子排阻层析、分子筛层析等,是指以各种凝胶为固定相,利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术。
亲和层析:
是利用生物分子与配基之间所具有的可逆的亲和力,使生物分子分离纯化的层析技术。
高效液相色谱:
是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同,进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。
9、比较连续与非连续、变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳区别。
连续电泳:
采用相同孔径的凝胶和相同的缓冲系统,只有分离胶;
不连续电泳:
采用不同孔径的凝胶和不同缓冲体系,有分离胶和浓缩胶。
连续PAGE:
电荷效应、分子筛效应
不连续PAGE:
电荷效应、分子筛效应、浓缩效应
①变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:
加了SDS
变性聚丙烯酰胺电泳buffer里面含尿素等变性剂pcr产物dna双链会解离成为单链②非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:
不加SDS
非变性电泳不会解链dna以双链形式电泳
10、蛋白质浓度测定方法及酶活力测定方法。
(1)蛋白质浓度测定:
1.紫外吸收法
2.双缩脲法
3.酚试剂(Folin-酚)测定法
4.染料结合法(考马斯亮蓝染色法)
(2)酶活力测定:
①化学分析法(比色法)
②分光光度法
③量气法
④滴定法(pH值测量法)
11、比活力、提纯倍数、回收率的含义及用途。
(1)比活力:
每毫克蛋白(酶蛋白)所含的酶活力单位数。
酶的比活力(纯度)=活力单位数/毫克蛋白
比活力越高,酶纯度也越好。
表示酶制剂纯度的一个指标。
(2)提纯倍数:
表示提纯过程中纯度提高的倍数。
纯化倍数=提纯后比活力/提纯前比活力
表示提纯过程中纯度提高的倍数。
提纯倍数越大,表示该方法纯化效果越好。
总活力=酶活力单位数酶液总体积
即样品中全部酶活力。
(3)回收率:
表示提纯过程中酶损失程度的大小。
回收率=提纯后酶总活力/提纯前酶总活力×100%
表示提纯过程中酶损失程度的大小。
回收率越高,损失越小。
判断一个分离纯化方法的优劣,常用总活力的回收率和比活力的提纯倍数两个指标。
回收率:
反映酶的损失情况。
提纯倍数:
表示方法的有效程度。
一个好的纯化步骤是回收率较高,提纯倍数也较大。
12、电泳的基本原理是什么?
在一定pH条件下(用buffer),不同大小、形状及带电颗粒在电场中的移动速度不同(用迁移率表示),各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。
13、凝胶过滤层析有哪四个方面的应用。
1)脱盐
2)生物大分子物质的分离纯化
3)分子量的测定
4)溶液浓缩
14、影响凝胶过滤分辨率的因素有哪些?
分配系数的含义及作用。
凝胶对溶质的排阻程度可用分配系数Kd表示:
Ve-Vo
Kd=————
Vi
Vo——外水体积,层析柱内凝胶颗粒之间空隙的体积(ml)
Vi——内水体积,层析柱内凝胶颗粒内部各微孔体积的总和(ml)
Ve——某组分的洗脱体积,从加进层析柱到流出液中该组分出现高峰时的洗脱液体积(ml)
因素:
操作压与流速,固定相与流动相的性质
含义:
指一定温度下,处于平衡状态时,组分在固定相中的浓度和在流动相中的浓度之比,以K表示。
分配系数反映了溶质在两相中的迁移能力及分离效能,是描述物质在两相中行为的重要物理化学特征参数,不同的物质有不同的分配系数,移动速度不同,从而达到分离
分配系数Kd的意义:
1)可定量地衡量各组分的流出顺序。
2)判断分离效果,Kd差异大,分离效果好,Kd差异小,分离效果差。
15、酶的分离纯化中,纯化方法的排序.
先选用粗放、快速、有利于缩小样品体积的方法。
精确、费时、需样品少的方法,宜后选用。
16、酶结晶的主要方法有哪些?
1、盐析结晶法;
2、有机溶剂结晶法;
3、等电点结晶法
4、透析平衡结晶法
5、温度差结晶法
6、金属离子复合结晶法
第五章酶分子修饰
1、酶活性中心的特点。
(1)活性部位只占酶分子很小的一部分(1-2%)。
(2)活性部位是一个三维实体。
(3)活性中心位于酶分子表面的疏水性裂缝中。
(4)活性中心构象不是固定不变的(诱导契合)。
(5)酶与底物通过盐键、氢键、范德华力和疏水作用等次级键结合。
2、研究酶活性中心的方法。
(1)物理学方法:
用X射线衍射法直接检测底物或其类似物与酶形成的中间复合物(包括酶和底物)的相对位置。
(2)化学修饰法:
根据所用修饰试剂不同,分为:
1)非专一性化学修饰
2)专一性化学修饰(基团专一性修饰)
3)亲和标记(位点专一性修饰)
(3)蛋白质工程:
将酶相应的cDNA定点突变,突变的cDNA只表达一个或几个氨基酸被置换的酶蛋白,测定其活性可知被置换的氨基酸是否为活力所必需。
3、哪些蛋白质侧链基团可以被修饰?
20种不同氨基酸的侧链基团中只有极性氨基酸的侧链易被修饰,它们一般具有亲核性。
侧链基团:
组成蛋白质氨基酸残基上的功能团。
主要有:
氨基、羧基、胍基、巯基、酚基、咪唑基。
4、酶分子的概念和作用
酶分子是具有完整的化学结构和空间结构的生物大分子。
作用:
①通过酶分子修饰,可以使酶分子结构发生某些合理的改变,就有可能提高酶的催化效率、增强酶的稳定性、降低或消除酶的抗原性、改变酶的底物专一性等。
②通过酶分子修饰,研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间的构象的影响,可以进一步探讨其结构与催化特性之间的关系。
5、酶分子修饰的方法有哪些
对酶分子的修饰方法分为化学法、生物法和物理法。
化学法:
金属离子置换法、大分子修饰法、肽链有限水解法、蛋白侧链基团的小分子修饰法等。
生物法:
通过基因工程的手段改变蛋白质,即基于核酸水平对蛋白质进行改造,利用基因操作技术对DNA或mRNA进行改造和修饰以期获得化学结构更为合理的蛋白质。
物理修饰法:
不改变酶的组成和基团,酶分子的共价键不发生变化。
6、何谓金属离子置换修饰?
简述其主要修饰过程和作用。
概念:
把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子,使酶的催化特性发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。
过程:
作用:
1.阐明金属离子对酶催化作用的影响
2.提高酶的催化效率
3.增强酶的稳定性
4.改变酶的动力学特征
7、酶分子化学修饰和酶的固定化在目的方法上的异同点。
相同点:
侧链基团修饰中的分子内交联修饰实际就是酶的固定化中的交联法固定化酶。
不同点:
1)方法不同
酶分子化学修饰:
金属离子置换法、大分子修饰法、肽链有限水解法、蛋白侧链基团的小分子修饰法等。
酶的固定化:
吸附法,包埋法,结合法,交联法,热处理法。
2)酶的固定化可反复使用,而酶的化学修饰不可以。
3)酶的固定化易与产物分离,而酶的化学修饰不可以。
4)酶的化学修饰可以改变酶的动力学特征,而酶的固定化不可以。
第六章酶的定向进化
1、何谓酶的定向进化?
有何特点?
答:
(1)简称酶定向进化,是模拟自然进化过程(随机突变和自然选择),在体外进行酶基因的人工随机突变,建立突变基因文库,在人工控制条件的特殊环境下,定向选择得到具有优良催化特征的酶的突变体的技术过程。
(2)特点:
1适应面广
2目的性强
3效果显著
2、酶基因随机突变的三种方法?
体外随机突变的方法:
易错PCR技术、DNA重排技术、基因家族重排技术
随机突变方法
特点
易错PCR技术
从酶的单一基因出发,在特定条件下进行PCR扩增,使碱基配对出现错误而引起基因突变
DNA重排技术
从两条以上的正突变基因出发,经过酶切,不加引物的PCR扩增,使碱基序列重新排布而引起基因突变
基因家族重排技术
从基因家族的若干同源基因出发,经过酶切和不加引物的PCR扩增,使碱基序列重新排布而引起基因突变
3、易错PCR技术的概念及其主要过程。
概念:
在PCR技术的基础上,通过改变反应条件,增加碱基配对错误的出现频率,就成为易错PCR技术。
过程:
可以通过提高镁离子浓度、添加一定浓度的锰离子、改变4种底物(dAMP、dTMP、dCMP、dGMP)的浓度比等反应条件,使DNA聚合酶在催化基因扩增时,增加碱基配对错误的出现频率,而引起基因突变。
4、DNA重排技术的概念及其主要过程
(1)概念:
又称为DNA改组技术,是从正突变基因文库中分离得到的同源DNA,用酶切割成随机片断,经过不加引物的多次PCR循环,使DNA的碱基序列重新排布而引起基因突变的技术过程。
(2)过程:
5、基因家族重排技术及其主要过程。
(1)概念:
又称为基因家族改组技术,是从基因家族的若干同源基因出发,用酶(DNaseⅠ)切割成随机片断,经过不加引物的多次PCR循环,使DNA的碱基序列发生重新排布而引起基因突变的技术过程。
(2)过程:
6、现代生物工程的要求
(1)能具备长期稳定性和活性
(2)能适用于水及非水相环境
(3)能接受不同的底物甚至是自然界不存在的合成底物
(4)能够在特殊环境中合成和拆分制作新药物或药物的原材料
7、DNA家族重排技术与DNA重排技术的异同点
相同点:
DNA家族重排技术与DNA重排技术的过程大致相同,都要经过基因的随机切割、无引物PCR等步骤以获得突变基因,然后经过构建突变基因文库、采用高通量筛选技术筛选获得正突变基因。
不同点:
DNA家族重排技术从基因家族的若干同源基因出发进行DNA序列的重新排布,而后者则从采用易错PCR等技术所获得的两个以上的正突变基因出发进行DNA序列的重新排布。
8、突变基因的定向选择基本过程
9、构建基因文库的质量要求
1文库的包容性
2文库的完整性
10、构建突变基因文库的主要过程
载体的选择
基因重组
形成基因文库
11、酶定向进化的应用
一、提高酶的催化效率
二、增加酶的稳定性