气相色谱方法验证.docx
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气相色谱方法验证
方案
第1版
顶空气相色谱法测定原料药中
溶剂A和溶剂B含量的验证
＊＊＊＊药业有限公司
＊＊＊＊有限公司
方法验证
名称：
顶空气相色谱法测定原料药
中溶剂A和溶剂B的含量
方案号：
版本号：
第1版
共21页：
第1页
生效日期：
编写人：
日期：
审阅人：
日期：
批准人：
日期：
QA经理
最初方案批准：
总经理：
日期：
质量检验部经理：
日期：
质量保证部经理：
日期：
最终方案批准：
总经理：
日期：
质量检验部经理：
日期：
质量保证部经理：
日期：
＊＊＊＊有限公司
方法验证
名称：
顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B的含量
方案号：
版本号：
第1版
共21页：
第2页
名称页数
1．目的·································································3
2．范围·································································3
3．仪器与试剂及色谱条件·················································3
4．验证实验内容·························································4
5．最终报告·····························································20
＊＊＊＊有限公司
方法验证
名称：
顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B的含量
方案号：
MVP-017
版本号：
第1版
共21页：
第3页
一、目的
1.验证顶空气相色谱法能否准确、精密的测定一定浓度范围内的原料药中溶剂A和溶剂B的含量。
2.验证顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B含量是否具有良好的选择性。
3.验证方法在环境、条件发生一定变化时，能否有一定的耐受性。
二、范围
适用于＊＊＊＊药业有限公司原料药中溶剂A和溶剂B含量的验证，包括：
空白试验、精密度、定量限、线性范围、准确度、耐受性等。
三、仪器与试剂及色谱条件
仪器与试剂
GC—HP6890N（FID）
Column：
DB-1301（30m×0.32mmI.D.×1μm）
Oven：
90℃
Inlet：
150℃
Detector:
200℃
ColumnPressure:
4.8psi
Columnflowrate:
0.8ml/min
Splitrate:
1:
25
SamplerCondition:
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顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B的含量
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第4页
Agilent7694Head-spaceSampler
Equilibrationtemperature:
80℃
Equilibrationtime:
45min
Transfer-linetemperature:
105℃
Carriergas:
25ml/min
Pressurisationtime:
0.5min
Injectiontime:
0.20min
移液管：
25ml，10ml，2ml吸量管：
2ml胶头滴管分析天平顶空瓶（22ml），容量瓶：
50ml
微量注射器：
25μl
试剂：
DMF（AR）、溶剂B（AR）、溶剂A（AR）、原料药（批号）
无残溶的原料药
四、验证实验内容
1.空白试验
（1）DMF
用称液管移取2mlDMF于22ml顶空瓶中，加盖，作色谱处理。
可接受标准：
在溶剂B和溶剂A出峰位置处无干扰峰
验证结果：
结论：
操作者：
核对者：
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（2）空白
取无残留溶媒（在水相结晶，不用溶媒处理）的普青_____g于22ml顶空瓶中，用移液管加入2mlDMF，加盖，摇匀，作色谱分析。
可接受标准：
在溶剂B和溶剂A出峰位置处无干扰峰。
验证结果：
结论：
操作者：
核对者：
2.精密度
2.1系统适应性
溶液配制
贮备液：
向50ml容量瓶中精确加入溶剂B0.05g，溶剂A0.5g，用DMF定容。
标准溶液A：
称取贮备液1.2800g于50ml容量瓶中，用DMF溶液定容。
精密称1.0g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml标准溶液A,加盖作色谱处理，各重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
可接受标准：
RSD≤5％
验证结果：
1.贮备液配制：
称取溶剂Bg,溶剂Ag，用DMF定容至50ml。
2.标准溶液A:
称取贮备液g于50ml容量瓶中,用DMF溶液定容.
3.称取无残留的原料药,,,,于22ml顶空瓶中，加入2ml标准溶液A,加盖作色谱处理。
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标准溶液A色谱数据表
瓶号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1.
2.
3.
4.
平均
RSD
结论：
操作者:
核对者:
3.线性范围：
3.1线性标准溶液配制：
贮备液a:
用移液管移取10ml贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
1＃标准液：
用吸量管移取1.25ml贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成1＃贮备
液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含500ppm溶剂A及50ppm溶剂B）。
2＃标准液：
用移液管移取25ml1＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成2＃贮备
液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含250ppm溶剂A及25ppm溶剂B）。
3＃标准液：
用移液管移取25ml2＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成3＃贮备
液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含125ppm溶剂A及12.5ppm溶剂B）。
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4＃标准液：
用移液管移取25ml3＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成4＃贮备
液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含62.5ppm溶剂A及6.25ppm溶剂B）。
5＃标准液：
用移液管移取25ml4＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成5＃贮备
液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含31.3ppm溶剂A及3.13ppm溶剂B）。
分别取1＃、2＃、3＃、4＃、5＃线性标准液，加盖作色谱处理。
按照线性标准液1＃～5＃的浓度与其对应的溶剂B及溶剂A的峰面积，作线性回归得到溶剂B和溶剂A的工作曲线。
可接受标准：
γ≥0.99
线性范围数据表
序号
溶剂A浓度
溶剂B
浓度
溶剂A峰
面积
溶剂B峰面积
1＃
2＃
3＃
4＃
5＃
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溶剂A线性回归结果：
a＝b＝r＝
工作曲线：
y＝
溶剂B线性回归结果：
a＝b＝r＝
工作曲线：
y＝
结论：
操作者：
核对者：
4.定量限
3#贮备液逐级稀释，作色谱分析，按照色谱峰的信噪比为1：
10时的浓度作为溶剂A和溶剂B的定量限。
结论：
溶剂B的定量限：
溶剂A的定量限：
操作者：
核对者：
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5.准确度
5.1系统适用性
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，各重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
可接受标准：
RSD≤5％
瓶号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1.
2.
3.
4.
平均
RSD
结论：
5.2准确度
称取1.0g普鲁卡因青毒素产品，测出其溶剂B和溶剂A的残留量，然后加入一定量的标准溶液，加入三次,,计算其回收率，可接受标准：
回收率应在90％～110％之间。
验证结果：
5.2.1溶剂B回收率
称取原料药产品g于22ml顶空瓶中，加入2mlDMF溶液作色谱
处理，根据工作曲线计算出该批产品中的溶剂B和溶剂A的含量。
称量
溶剂B峰面积
溶剂A峰面积
溶剂B含量
溶剂A含量
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称取原料药产品1.0g于22ml顶空瓶中，加入2mlDMF及10μl,20μl,25μl的贮备液a
，加盖作色谱处理，根据工作曲线计算溶剂B和溶剂A的含量。
称样量（g）
贮备液a（μl）
溶剂B峰面积
溶剂B含量
丁醇峰面积
丁醇含量
溶剂B回收率：
溶剂A回收率：
结论:
操作者：
核对者：
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6.中间精密度
对同一样品进行三次平行测定，连续测定三天（三天均用同一个标准品和检品），由不同人测定。
可接受标准：
当天测定结果的RSD溶剂B≤20％；溶剂A≤15％
大与天之间的测定结果RSD：
溶剂B≤30％；溶剂A≤20％
6.1系统适用性（第一天）
溶液配制：
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
C:
分别称原料药批g,g,g于22ml顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A和溶剂B含量.
可接受标准：
RSD≤5％
标准号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
RSD
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名称
溶剂B峰面积
溶剂B浓度
溶剂A峰面积
溶剂A浓度
样1
样2
样3
RSD
结论：
操作人：
核对者：
6.2系统适用性（第二天）
溶液配制：
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
C:
分别称原料药批g,g,g于22ml顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A和溶剂B含量.
可接受标准：
RSD≤5％
标准号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
RSD
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名称
溶剂B峰面积
溶剂B浓度
溶剂A峰面积
溶剂A浓度
样1
样2
样3
RSD
结论：
操作人：
核对人：
6.3系统适用性（第三天）
溶液配制：
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
C:
分别称原料药批g,g,g于22ml顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A和溶剂B含量.
可接受标准：
RSD≤5％
标准号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
RSD
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名称
溶剂B峰面积
溶剂B浓度
溶剂A峰面积
溶剂A浓度
样1
样2
样3
RSD
结论：
操作人：
核对人：
三天验证结果统计
时间
溶剂A含量（％）
溶剂B含量（％）
第一天
第二天
第三天
RSD
结论：
操作人：
核对人：
7.耐受性
对比如下条件的测量结果：
a不同柱温的耐受性
b不同流速的耐受性
可接受标准：
RSD≤5％
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7.1使用不同柱温的耐受性
7.1.1第一种柱温T=88℃
系统精密度
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
序号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
平均
RSD
结论：
操作人：
核对人：
7.1.2第二种柱温T＝90℃
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系统精密度
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
序号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
平均
RSD
结论：
操作人：
核对人：
7.1.3第三种柱温T＝92℃
系统精密度
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
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序号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
平均
RSD
结论：
操作人：
核对人：
7.1.4对比分析
7.1.5结论：
7.2不同流速的耐受性
7.2.1第一种流速0.7ml/min
系统精密度
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
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系统精密度
序号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
平均
RSD
结论：
操作人：
核对人：
7.2.2第二种流速0.8ml/min
系统精密度
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
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序号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
平均
RSD
结论：
操作人：
核对人：
7.2.3第三种流速0.9ml/min
系统精密度
a：
称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：
取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
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第20页
系统精密度
序号
溶剂A峰面积
溶剂B峰面积
1
2
3
4
平均
RSD
结论：
操作人：
核对人：
7.2.4对比分析：
7.2.5结论：
五.最终报告
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