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1、上海交大医学院细胞生物学技术考试重点样本一、 显微镜技术1、分辨率( resolution) : 用于表示人眼和仪器 , 能够辨别两点之间最小距离的标志 , 是衡量显微镜性能的重要指标。人眼的分辨率由人眼的生理结构决定。光镜由光波波长和物镜数值孔径决定。电镜由电子束半波长决定。分辨率极限：人眼(0.1mm);光镜(0.2卩m); 电镜( 0.2nm) 。显微镜技术优化核心是提高分辨率 , 体现在两个方面 ： ( 1) 光源的采用 ( 2) 样品制备和信号呈现方法使信噪比提高。2、 显微镜分类 ：(1)光学显微镜 ： 普通光学显微镜 ; 荧光显微镜 ( 激光扫描共聚焦显微镜、 超 高分辨率荧光显

2、微镜、 活细胞荧光工作站 ) ; 相差显微镜 ： 观察活细胞 ; 微分 干涉相差显微镜 ( DIC) ： 活细胞三维立体投影影像(2)电子显微镜 ： 透射电子显微镜 ( TEM) ; 扫描电子显微镜 ( SEM) ; 分析电 子显微镜 ; 高压电子显微镜 ; 冷冻电子显微镜(3 )扫描探针显微镜 ： 原子力显微镜3、 普通光学显微镜主要三部分 ： 聚光镜、 物镜、 目镜; 光源： 可见光 样品制备 5步： 固定( 甲醛) ; 脱水( 乙醇) ; 包埋( 石蜡) ; 冰冻切片( 1-10 卩m);苏木精伊红染色(HE染色)4、 荧光显微镜光源 ： 高压汞灯、 弧光灯荧光的来源 ： ( 1) 细胞

3、和组织自发荧光 ( 2) 外源导入荧光蛋白 ： 动态检测、 活 体检测、 长时间检测、 容易融合 ( 3) 荧光染料 ： 吖啶橙染色 DNA( 绿 ) 、 RNA( 橙) ( 4) 荧光标记抗体 ： 荧光染料与抗体共价结合 ( 5) 荧光探针 ： 金属 离子探针、细胞内pH值、细胞内活性氧、线粒体跨膜电位。5、 荧光素 ( Fluorphore) ： 吸收能量后具有发光现象的物质 , 一般为吸收短波 长的能量后发散出长波长的光 , 并随照射停止而消失。 荧光素发射光减弱 ( 光漂 白) 或消失 ( 淬灭) 。6、 激光扫描共聚焦显微镜 ( LSCM)： 以激光作为激发光源 , 采用光源针孔与检

4、 测针孔共聚焦技术，对样本进行断层扫描，以获得高分辨率光学切片的荧光显 微镜系统。7、简述激光扫描共聚焦显微镜的原理(光源点，物点，像点，三点共轭)以激光作为激发光源；结构上采用双针孔装置，形成物像共聚焦的独特设 计；激光经过聚光镜焦平面上针孔形成点光源，再经物镜在焦平面对样品逐点 扫描。样品上每个照射点经反射镜在像焦平面的探测针孔处成像，被光电倍增管 探测器接收，转为数字信号传输至计算机，最终在屏幕上聚合成清晰的整个焦 平面共聚焦图像。&激光扫描共聚焦显微镜的功能：(1)薄层断层扫描(光学切片)(2)多通道同时扫描：激光共聚焦显微镜能够多激光多通道同时扫描(3)ZOOM成像：在不变换镜头的情

5、况下，对某幅图片的局部放大，并进行精细 逐点扫描成像，获得高分辨率图像。(4) 多维度扫描：Z轴扫描(垂直)或T扫描(时间)(5)荧光定量分析9、 激光扫描共聚焦显微镜技术在医学及生物学研究中的应用(1) 静态：分子定位、 定量分析、 分子间相互作用(2) 动态：分子或细胞活动的动态变化：蛋白质的移位；蛋白质相互作用的研 究(FRET)；分子运动的测量(FRAP);离子浓度变化趋势的检测10、 简述激光扫描共焦显微镜与荧光显微镜的差别。 LSCM勺优缺点。类别LSCM荧光显微镜光源激光(紫外光、可见光、近 红外)短波长光源(多为紫外光)照明方式点照明、逐点扫描落射式样本信号焦平面的样本信号，几

6、乎无 次级荧光干扰可有多个平面的样本信号 ，伴随相邻部位干扰图像采集系统荧光信号被PMT探测器接收 实时观测，数字化图像，能够照相机的原理进行图像处理和定量分析LSCM勺优缺点：LSCM优点:(1) 高水平分辨率：0.18卩m( 2)高垂直分辨率：沿Z轴逐层扫描(3)高灵敏度，信噪比良好(4)能定时、定位、定性、定量缺点：(1)分辨率极限：0.15卩m( 2)观测厚度：50-100卩m( 3)逐点扫描,成像速度慢(4)伪彩色11、LSCM和电子显微镜的区别激光共聚焦显微镜电子显微镜工作原理光波的透射电子的透射成像效果微米级(荧光标记)纳米级研究目的观祭分布、表示量观察细微结构12、 超高分辨率

7、荧光显微镜的原理：”突破”衍射极限，提高分辨率(50nm)(1)基于点扩展函数调制：点扩展函数变小(2)基于随机单分子定位：不会有两个靠的很近的点同时亮起来13、 电子显微镜：以电子束为光源，电磁场为透镜，利用电子信号成像，具有 高分辨率和放大倍数的显微镜，用于研究组织和细胞的超微结构。14、 电子束：又称电子射线，电子束带负电荷，具有光的波动性、 可折射性， 电镜利用电子束作为”光源”成像。15、 透射电子：当样品厚度小于100nm时，部分电子可穿透样品，将穿透样品 的电子叫做透射电子，利用透射电子信息成像的称为透射电镜。16、 二次电子：在入射电子的轰击下，样品表面5-50 nm深度激发出

8、来的电子 称为二次电子，利用二次电子信息成像的称为扫描电镜。17、 TEM成像和工作原理：(1)电子束投射在样品上，部分电子直接穿透样品产生透射电子(2)带有样品信息的透射电子经成像系统放大，投射到荧光屏上(3)透射电子多，荧光屏亮；反之荧光屏暗，荧光屏的亮暗程度与样品微细结 构一一对应，产生具有一定反差的黑白影像18、 超薄切片：将环氧树脂包埋的组织块切成100nm以下的薄切片称为超薄切 片 , 超薄切片经电子染色后在 TEM 下观察组织细胞内部的超微结构。19、 血管灌注固定 : 血管灌注固定是经过血管灌注适量的固定剂 , 在动物体内 把活细胞在原位及时固定。 血管灌注固定速度快 , 固定

9、均匀 , 可减少离体或死亡 后缺氧引起自发性的变化影响 , 特别是对脑、 心肌、 肾脏等对缺氧比较敏感的 组织尤为重要。20、 TEM 的样品制备（ 1） 超薄切片技术 （ 9 步） : 取材（ 1 分钟内将新鲜标本放入固定液 ） ; 预固定 （ 新鲜配制 2.5%戊二醛 ） ; 后固定 （ 1%锇酸 ） ; 脱水（ 乙醇和丙酮 ） ; 浸透; 包 埋聚合（ 环氧树脂） ; 修块; 切片（ 半薄切片: 500nm; 超薄切片: 50-100nm） ; 染色（ 甲苯胺蓝 ） 。（ 2） 负染色技术 : 经过重金属盐在样品四周堆积 , 加强样品外周的电子密度 , 衬托样品的形态和大小。 （ 染色液

10、 : 磷钨酸、 醋酸双氧铀 ）（ 3） 免疫电镜技术 : 是将免疫学方法与电子显微镜技术相结合 , 利用抗原与抗 体特异结合的特性 , 在超微结构水平定位特异大分子的技术。A、 包埋前法：先免疫标记，后包埋，制备超薄切片；包埋后法：先包埋，制备 超薄切片 , 后免疫标记 ; 冷冻超薄切片法 : 将标本直接切成超薄切片 , 进行免 疫反应 , 电镜观察。B、 推荐固定液：34 %多聚甲醛 + 0. 1 %0.5 %戊二醛；C、 要求： 免疫组化结果一定要 好； 固定液配制要 新鲜； 尽快处理标本。21 、 在样本制备过程中为什么要进行半薄切片定位 ?（ 1） 选取超薄切片的部位 , 超薄切片的面

11、积一般要小于 0.5mm2, 要经过半薄 切片来选取有意义的部位。（ 2） 对同一部位进行光、 电镜对比观察 , 在较大范围内了解组织结构、 病变 部位和病理性质 , 有利于更确切的认识超薄切片中的结构及其相互关系。22、 要了解细胞内部的超微结构变化 , 选择哪种类型的电镜 , 为保证生物样品 良好的超微结构 , 在样本取材及固定时应注意什么 ?了解细胞内部的超微结构变化应选择透射电子显微镜 （ TEM）为保证良好的超微结构 , 在样本取材及固定时应注意做到快、 小、 轻、 冷。 ( 1) 快 : 在 1 分钟内固定组织 , 尽可能保持其活体状态 , 因为瞬间的拖延都会 导致细胞超微结构的变

12、化。(2)小：组织块必须切成1mm的小块,组织块过大其中央得不到及时固定会发 生细胞自溶现象。( 3) 轻： 不要牵拉、 锯、 挤压组织。要用锐利的刀片 , 避免细胞受到损伤。(4)冷：低温操作,4 C保存,降低酶的活性,避免组织发生自溶。23、 在透射电镜样本取材时 , 样本不可大于 1mm3, 并在 1 分钟以内完成固定。 请问如果组织块过大会出现什么后果 ? 没有及时固定的组织电镜下会出现何种 改变?由于电镜固定液戊二醛对组织的穿透能力较弱 , 如果组织块过大会造成组 织中心得不到及时固定 , 在电镜下没有得到及时固定组织细胞的细胞器会发生 变性, 特别是对缺血乏氧十分敏感的线粒体会出现

13、肿胀和空泡变性等改变。24、 如何描述一张电镜图片。( 1) 细胞整体 ： 大小、 形状、 细胞膜和突起以及细胞间的连接( 2) 细胞核 ： 大小、 形状、 核仁、 染色质等(3) 细胞质：各种细胞器的数量、 分布、形状等(Mit、RER、Ri、Ly、Gol)25、 TEM 在医学领域的应用( 1) 细胞器、 组织器官的超微结构( 2) 原核细胞、 病毒的超微结构( 3) 超微病理变化 ( 病理诊断 )( 4) 细胞成分定位( 5) 生物材料复合体26、 扫描电镜的样品制备过程 ( 6 步 ) ：取材 ( 充分暴露并保护观察面 ： 5x5mm); 清洗( 用生理盐水仔细漂洗观察面 ) ; 固定

14、( 2.5%戊二醛和 1%锇酸固定) ; 脱水( 丙酮逐级脱水 , 醋酸异戊酯置换 ) ; 干燥： ( 临界点干燥) ; 镀膜( 离子溅射镀膜或真空镀膜 )27、 扫描电子显微镜在生物医学领域的应用：(1) 血细胞、 细菌、培养细胞的整体形态、 表面突起和细胞间相互关系(2)消化道，呼吸道,血管等空腔组织的表面结构(3)植物、昆虫等(4)生物材料复合体28、 扫描电镜用于观察组织表面结构，因此取材时必须要充分暴露组织表面结 构，请问常见的方法和注意事项有哪些？在样品取材时必须保护好并充分暴露观察面，避免损伤要观察的部位，易卷曲 的样品，如气管、胃、肠粘膜可固定在滤纸上展平，要将表面的血液、 粘

15、液用 生理盐水或缓冲液仔细漂洗干净，对于粘稠附着物还能够使用酶消化法。29、 请从成像信号、样品制备、图象特点和应用几方面对TEM和SEM做以 比较。类别TMESEM分辨率0.1 nm0.6 nm放大100万倍80万倍成像信号透射电子信号利用二次电子信号成像样品制备制成超薄切片等，制备过程 复杂方法较简单，标本可大而厚图像特点二维结构，平面图像三维结构图像，立体感强应用观察组织细胞内部的超微结 构观察样品表面及其断面立体 形貌二、细胞化学技术1、 原位观察化学成分，提供的信息：(1)推测化学成分(大分子)的可能性(2)观察生理、病理状态下大分子动态变化(3)指示大分子所在的特异细胞，观察细胞在

16、组织的分布2、 细胞化学技术：在保持细胞结构完整的条件下，借助细胞中的化学反应在细 胞原位确定化学成分的分布及这些成分在细胞活动中的动态变化的技术 ，用以阐明细胞化学成分、结构和功能的关系。包括酶细胞化学技术、免疫细胞化学 技术、放射自显影技术和原位杂交等。3、 细胞化学技术特点：(1)原位(保持组织细胞的天然结构)(2)细胞化学反应及可见性(3) 细胞化学反应的观察：显微镜、流式4、 细胞化学技术主要包括：(1)酶细胞化学技术：1.酶+底物反应；2.显色反应。显示酶在细胞内的分布及 酶活性强弱。(2)免疫细胞化学技术：1.抗原+抗体反应;2.显色反应(3)放射自显影：1.放射性同位素衰变和射

17、线的释放反应；2.感光(4)原位杂交技术等：1.核酸杂交反应；2.显色反应5、 细胞化学技术通用流程：(1)组织细胞固定(保持原位)(2)石蜡包埋或冷冻(3)切片(利于反应，利于观察)(4)化学反应(5)显色反应6 免疫组织化学、 免疫细胞化学技术(IHC):把组织细胞中的特异分子作为抗原，利用抗原抗体特异性结合的特点，用显微镜下可见的标记物直接或间接 标记抗体或抗原抗体复合物，使之在显微镜下可见，从而间接地显示抗原，达 到在细胞或细胞器水平定位特异分子的目的。特异蛋白质定位：1. 大分子的组织和细胞水平定位 2.细胞内大分子的固定 亚细胞定位3.细胞内大分子的转运或移位4.细胞内定位固定的大

18、分子的动态 变化5.细胞内大分子的共定位7、免疫细胞化学技术原理一、抗原：凡能刺激机体产生抗体并能与抗体特异结合的物质称为抗原，酶、 受体、抗体二、 抗体：结合抗原、结合抗种属抗体：识别一抗的种属特异性，并能够因此 结合一抗,称为二抗三、 免疫反应的特异性四、 免疫细胞化学反应：（1） 直接法；（2） 间接法优点：避免标记造成对抗体与抗原结合的影响；信号增强；标记物多。五、 标记物的显色反应（光镜和电镜）：（1）免疫荧光；（2）免疫酶；（3）免 疫胶体金颗粒8、 免疫荧光技术（IF）：免疫荧光技术将荧光素作为标记物使组织细胞中形成的 抗原抗体复合物在荧光显微镜下可见，从而显示抗原物质的定位。（

19、培养细胞、 动物组织）9、 免疫荧光技术优点：（1） 双重或多重标记，同时比较不同分子的位置及量的关系。（2） 双重或多重标记，同时染色细胞器和感兴趣分子，可显示分子的亚细胞定 位信息。（3） 根据荧光素的强度，进行半定量分析。10、 免疫酶技术：是将酶作为标记物使组织细胞中形成的抗原抗体复合物得到标记，再经过酶细胞化学反应产生显微镜下可见的显色物质 ，间接显示抗原物质的定位。普通光学显微镜即可观察。（动物组织、多种类型细胞）常见标记 酶： 辣根过氧化物酶（HRP）;碱性磷酸酶（AKP）11、 亲和物质：具有多价能力的物质，与另一种亲和物质有高度亲和力，又能 与抗体、蛋白质及各种标记物（特别是

20、酶）结合。12、 生物素系统标记酶和抗体：（1） LSAB法：标记链球菌亲和素-生物素技术1特异性抗体（一抗）先与组织细胞中的抗原结合2生物素化抗体（二抗）再与一抗结合3链球菌亲和素联接的过氧化物酶与生物素化抗体结合（2） ABC法：亲和素-生物素-酶复合物技术亲和素与生物素偶联的过氧化物酶组合成亲和素-生物素-酶复合物1特异性抗体（一抗）先与组织细胞中的抗原结合2生物素化抗体（二抗）再与一抗结合3复合物与生物素化抗体结合13、 免疫亲和技术优点：（1） 观察定位信息时，可观察感兴趣分子在细胞中的相对定位，也可观察分子 在组织中的细胞特异性；（在组织样品中应用较多）（2） 同时观察阳性信号和阴

21、性信号；（3） 反应后标本材料可长期保存。14、 免疫胶体金技术：以电镜下可见的胶体金作为抗体标记物，间接显示组织 细胞中特异分子的技术。（培养细胞）15、 原位杂交技术（ISH）: 利用核苷酸碱基配对原理,用含有特异序列、 经 过标记的核酸单链即探针，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核 酸发生杂交，经过检测标记探针，从而在细胞原位显示特异的 DNA或RNA分 子。变性：双链DNA分子在一些因素作用下两条链解离的过程称为变性复性：变性的两条互补DNA单链在适当条件下重新缔合成双链的过程称为复性 杂交探针：经过标记的核酸单链，其序列已知，或序列未知但已知其针对何靶 分子。主要有cDNA

22、 RNA和寡核苷酸三种。靶分子：指所要探测的核酸分子或核苷酸序列严格度：在某些条件下，探针能够与含不相配碱基的核酸序列结合而形成不稳 定的杂交体。决定探针是否与含不相配碱基的核酸序列结合的条件称为严格度。 高严格度条件下，碱基完全互补的双链才可形成杂交体。低严格度条件下，碱基对不完全互补的双链也能 形成杂交体。16、 原位杂交技术中如何应用了其它几种细胞化学技术 ? 为什么说原位杂交技 术是分子生物学和细胞化学技术的结合 ?标记的核酸探针与组织细胞中靶核酸分子按碱基配正确原则结合形成杂交体 , 这是分子生物学技术检测杂交体的存在可选用放射自显影或免疫细胞化学技术 , 如探针标记的是 同位素 ,

23、 则选用放射自显影技术 ; 如用地高辛标记核酸探针 , 使用碱性磷酸酶 联结的小鼠抗地高辛抗体与探针结合 , 这里应用的是免疫细胞化学技术 为了使酶可见 , 再加入其底物四唑氮蓝和吲哚酚 , 最终形成蓝紫色物质 , 这 就是酶细胞化学技术,最终产生的蓝紫色物质一酶的定位T探针一靶核酸17、 原位杂交技术常常组合了其它组织化学技术。简述如果你使用其中一种组 合你需要准备。(1)选择地高辛标记的特异性 cDNA探针一用AKP标记的小鼠抗地高辛抗体 与杂交体结合一在孵育液中加入 AKP的反应与捕捉底物对NCIP/NBT-得到蓝 紫色的沉淀。( 2) 使用光学显微镜观察蓝紫色沉淀即可间接定位杂交体 ,

24、 验证靶核苷酸的存 在。18、如果你的研究课题分别涉及到在培养细胞或组织切片上定位蛋白质的要求你如何考虑对技术的选择。( 1) 组织和细胞水平定位 : IHC+ 光镜( 酶标) / 荧光显微镜 ( 荧光标) / 共聚焦( 荧光标 ) ( 2) 亚细胞定位 : IHC+ 电镜( 胶体金标) 荧光+共聚焦( 3) 细胞内大分子的转运或移位 translocation 实验处理 +综合 1/2/5( 4) 细胞内定位固定的大分子含量的动态变化 dynamics 实验处理 +综合1/2/5免疫荧光 +confocal 共定位( 5) 细胞内大分子的共定位 co-localization (转染+重组t

25、ag+免疫荧光；或转染+重组GFP);也能够用连续切片 也可用大小金标 +电镜19、 简述如何应用细胞生物学技术初步阐明一个新的蛋白质的定位和功能。( 1) 定位如上题( 2) 弄清了定位、 动态及共定位之后 , 需要了解功能还能够了解生成 :DNA 水平：Southern blot DNA chip; qPCRmRNA水平:northern blot q-rtPCR ( 不过 这些仿佛都是分生的内容)( 3) 功能： 作为酶的功能、 作为递质的功能、 作为转录因子的功能 找出了相互作用的蛋白 , 再从这 associate 着手确定新蛋白的功能。 : 比如新蛋 白是否影响已知蛋白的生成和降解

26、 , 是否影响已知蛋白行使功能降解 / 转运。 Plus 寻找互相作用方式的分生方法cDNA 文库+酵母双杂交 , 蛋白质体外结合实验 ( pull-down assay) +质谱分析 ,CoIP首先按蛋白质组学的方法做蛋白指纹图谱比对数据库寻找类似结构域 , 对它的 功能进行合理的预测 ; 然后根据预测的结果设计实验 设计实验大致能够由”过 表示会怎样”敲除会怎样”两个角度出发 , 从宏观上观察细胞的形状、 功能改 变, 从微观上定性定量上下游分子量的改变 , 最后在活体环境中验证。20、 定量检测一批光镜切片上含有某种蛋白质的细胞的数目 首先对切片上的全部细胞进行针对目的蛋白的荧光探针特异

27、性标记 ( 荧光 染料 , 荧光标记抗体 , 外源导入荧光蛋白 ) , 同时对细胞行核复染。 再以荧光显 微镜或激光扫描共聚焦显微镜观察。三、 离心技术1、 离心技术 (Centrifuge): 利用溶液中颗粒密度、 大小等特性 , 用旋转产生的离心力使不同特性颗粒从溶液中分离并沉降 , 从而达到分离、 浓缩、 提纯和 鉴定的目的 , 称为离心技术。2、 决定离心行为的主要因素 : ( 1) 颗粒的属性 : 颗粒大小、 密度等特性 ( 2) 溶液和设备 : 离心机、 离心介质 ; ”三要素” : 颗粒的沉降系数、 相对离心 力( RCF) 、 离心时间3、 沉降系数 : 颗粒在单位离心力的作用

28、下的移动速度。 决定沉降速度的因素 : 颗粒大小 ; 颗粒密度 ; 溶液介质密度和粘度4、相对离心力 : 离心分离时 , 作用在悬浮颗粒上的力与其地球重力 ( 平时质量 ) 的比值。5、 离心的适用范围 : ( 1) 分离细胞或其它的悬浮颗粒 ; ( 2) 从组织或细胞匀 浆中分离细胞器 ; ( 3) 分离病毒和大分子 , 包括 DNA、 RNA、 蛋白质和脂类。6、 差速离心法 : 经过一系列递增速度的离心 , 将不同 大小颗粒分离。 先在低速 离心条件下把大的颗粒沉降到管底 , 其它颗粒留在上清液中 ; 然后以较高的速 度离心 , 把较大的颗粒沉淀于管底。这样依次把不同大小的颗粒逐级分离。

29、 用途 : 分离大小相差悬殊的细胞和细胞结构成分 特点: 介质密度均一 ; 速度由低向高 , 逐级离心 ; 操作简单 ; 分离纯度不高。7、 密度梯度离心法理想的溶液介质 ( 蔗糖) : 形成的溶液密度范围大 ; 粘度低; 对细胞成分损伤 小 ; 离心分离后容易去除 ; 浓度容易测定 ; 便宜。( 1) 移动区带离心法原理 : 用梯度蔗糖或甘油作为介质 , 将要分离的样品放在介质表面 , 形成一个 狭带 , 然后超速离心 , 使不同大小的颗粒以不同的速度向管底方向移动 , 形成 一系列区带 , 从管底小孔中分次收集各种颗粒成分。用途: 分离有 大小和密度 差异的细胞或细胞器。特点 : 介质为密

30、度梯度溶液 , 且密度较低 , 介质的最大密度应小于被分离生物 颗粒的最小密度 ( rp r m ); 必须注意离心时间 (t), 不能使所有颗粒都沉到管 底。( 2) 等密度离心法原理 : 离心时采用包括各种颗粒密度范围的梯度介质 , 被分离颗粒达到与其相 同的密度介质时不再移动 , 形成一系列区带 , 然后从管底收集。用途: 分离密度不等的颗粒 , 适用于病毒、 DNA、 RNA、 蛋白质等。 特点: 介质密度较高 , 陡度大 , 介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度（rp rm ）。所需的力场一般比速率沉降法大 10100倍,往往需要高速或超速 离心。8、细胞结构成分的分离：（1）

31、细胞沉淀（2） 细胞破碎（渗透压、 超声波、 机械力研磨或剪切、 重复冻融）（3） 细胞结构成分的分离-离心技术（差速分离、 梯度纯化）（4） 分离细胞器的鉴定和评价（形态：显微镜；生化分析：细胞器标志酶）四、细胞培养1、 细胞培养：从生物体内取出组织或细胞，在体外模拟体内生理环境，在无 菌、适当温度和一定营养条件下，对这些组织或细胞进行孵育培养，使之生存 和生长，并保持一定的结构和功能的技术。2、 简述培养细胞和体内细胞的异同。培养细胞体内细胞无神经体液调节 无其它类型细胞影响机体神经体液调节 多种类型细胞相互影响细胞的许多外来信号被切断基因表示受到外来信号调节1.特疋分化基因表示减弱或停止2增殖活动维持（由特殊到一般）增殖过程中不断发生着分化（由一般到特殊）与体内细胞结构和功能的差异高度特化的结构和功能特征：失去原有形态，分化特性减弱，形态和 功冃匕趋于单 ； 疋代数后衰老死亡，或发生转化，获不死性而成为能无限传代；对营 养要求