第五章常用饲料原料的掺假识别.docx

1、第五章常用饲料原料的掺假识别第五章 常用饲料原料的掺假识别植物性原料的掺假识别一、 豆粕的掺假识别豆粕主要掺假有：玉米粉、玉米胚芽粕、豆饼。识别方法如下：（一） 掺玉米粉的检查取碘0.3g、碘化钾1g溶于100ml水中，然后用吸管滴1滴水在载玻片上，用玻璃棒头沾取过20号筛的豆粕，放在载玻片上的水中展开，然后滴入1滴碘-碘化钾溶液，再显微镜下观察。纯豆粕的标准样品，可清楚的看到大小不同的棕色颗粒，含玉米粉的载玻片上，含有似棉花状的蓝色颗粒，随玉米粉含量的增加，蓝色颗粒增加，棕色颗粒减小。 标准样品的制备：取通过20号筛的纯豆粕0.95g、0.96 g、0.97 g、0.98 g、0.99 g，

2、依次通过20号筛的玉米面0.05 g、0.04 g、0.03 g、0.02 g、0.01 g各自混匀，五种标准品分别含5%、4%、3%、2%、1%玉米的豆粕，按照上述步骤制成五个标准样片，以便半定量比较观察用。（二）掺玉米胚芽粕的检查豆粕中掺玉米胚芽粕可借助于显微镜进行检查。镜下观察豆粕可见豆粕皮，且豆粕皮外表面光滑，有光泽，并可见明显凹痕和针状小孔，内表面为白色多孔海绵状组织，并可观察到种脐，豆粕颗粒形状不规则，一般硬而脆，不透明，奶油色或黄褐色而玉米胚芽粕镜下观察具油腻感，黄棕色，同时可见玉米皮特征，玉米皮镜下薄并且半透明。所以，二者在镜下很容易区别。（三）掺豆饼碎的检查 豆粕中掺豆饼碎也

3、可以借助于显微镜进行镜检。因豆粕与豆饼碎加工工艺不同，镜下状态不规则，一般硬而脆，子叶颗粒无光泽，不透明，奶油色或黄褐色，豆粕碎子叶因挤压成团，这种颗粒状团快质地粗糙，颜色外深内浅。二者感官也可以大致区分，豆粕一般为碎片状，而豆粕碎成团快，颜色比豆粕深/ 二、豆粕碎的掺假识别 豆粕碎掺假，目前仅限于玉米粉，具体检查方法可以见豆粕中掺玉米粉的检查。 三、菜子粕的掺假识别 菜子粕掺假主要掺杂一些低廉的原料，而且较重，如泥土、沙石等，具体检查方法如下： （一）感官检查 正常的菜子粕为黄色或浅褐色，具有浓厚的油香味，这种幽香味较特殊，其他原料不具备。同时菜子粕有一定的油光性，用手抓时，有蔬讼感觉。而搀

4、假菜子粕油香味淡，颜色也暗淡，无油光性，用手抓时，感觉较沉。（二） 盐酸检查正常的菜籽粕加入适量的10%盐酸，没有气泡产生，面掺假的菜籽粕加入10%的盐酸，则有大量气泡产生。（三） 粗蛋白质的检查 正常的菜籽粕其蛋白含量一般都在33%以上，而掺假的菜籽粕其粗蛋白含量较低。（四） 四氯化碳检查 四氯化碳的比重为1.59，菜籽粕的比重比四氯化碳小，所以菜籽粕可以飘浮在四氯化碳表面。其方法是：取一梨形分液漏斗或小烧杯，加入5-10g菜籽粕，加入100ml四氯化碳，用玻璃棒搅拌一下，静置10-20分钟，菜籽粕应飘浮在四氯化碳表面，而矿砂、泥土等由于比重大，故下沉底部。将下沉的沉淀物分离开，放入已知重量

5、的称量瓶中，然后将称量瓶连同下层物放入110烘箱中烘15分钟，取出置于干燥器中冷却、称重，算出粗略的土砂含量。正常的菜籽粕其土砂含量在1%以下，而掺假的菜籽粕其土砂含量高达5-15%以上。（五） 灰分检查正常的菜籽粕的粗灰分含量应14%，而掺假的菜籽粕其灰分含量高达20%以上。四、麦麸的掺假识别 麦麸主要掺杂一些石粉、贝粉、砂土、花生皮及稻糠等，识别方法如下：（一） 显微镜法将待检样品均匀放在玻片上，在15倍的实体显微镜一观察，如果视野里看小麦麸两面发白发亮，动多个视野都可看到，则认为掺有石粉。若视野中看到有长而硬没有白面的皮，有井字条纹，则认为有稻壳究掺入。掺入贝粉、沙土、花生皮均可通过显微

6、镜观察，可依据前述这几种原料的显微特征。（二） 水浸法 此法对掺有贝粉、砂土、花年壳者较明显。方法是：取5-10g麸皮于小烧杯中，加入10ml的水搅拌，静置10分钟，将烧杯倾斜，若掺假则看到底面有贝粉、砂土，上面浮有花生壳。（三） 盐酸法 取试样少量于小烧杯中，加入10%的盐酸，若出现发泡，则说明掺有贝粉、石粉。（四） 成分分析法 麦麸粗蛋白一般在13%17%之间，粗灰分在6%以下，粗纤维低于10%，可依据此标准进行验证。五、 玉米蛋白粉的搀假识别（一）玉米蛋白粉搀假主要是尿素，掺尿素的检验方法如下：称取10g样品于烧杯中，加入100ml蒸馏水，搅拌、过滤，取滤液1ml于点滴板上，加入23滴尿

7、素酶溶液，约经5分钟，如点滴板上呈深红色，则说明样品中掺有尿素。尿素溶液的配制 称取0.2g尿素酶溶解于100ml95%乙醇中。 甲基红指示剂的配制 称取甲基红0.1g，溶解于100ml乙醇溶液中。（二）在无尿素酶药品时，则可采用下列方法检测。取两份1.5g样品于两只试管中，其中一只加入少许黄豆粉、两管加蒸馏水5ml，振荡，置6070 恒温水浴箱水浴3分钟，滴67滴甲基红指示剂，若加黄豆粉的试管中出现较深紫红色，则说明玉米蛋白粉掺有尿素。六、酵母粉的搀假识别酵母粉掺假主要有非发酵产物、羽毛粉、血粉、皮革粉、无机氮、尿素等。识别方法如下：（一） 非发酵产物的检查取1g样品溶于99ml蒸馏水中，多

8、次振荡，以血球记数板在显微镜下记数检验，结果与标准相符为纯发酵产物，否则为非发酵产物。（二） 掺羽毛粉、血粉、皮革粉的检查1.掺羽毛粉 用肉眼观察产品中有闪光亮点，在显微镜下观察可见羽毛管和羽毛轴，并且可见像松香样的半透明颗粒，如果掺入未水解完全的羽毛粉，可见外廓羽毛的羽轴大多有锯齿边。2.掺血粉的检查掺入血粉颜色偏黑，镜下进一步观察可见有黑色似沥青状的颗粒，边缘锐利，或者可见血红色晶亮的小珠，这二者均为掺入血粉，只是血粉的加工方法不同，镜下特征不一样。3.掺皮革粉的检查 掺入皮革粉显微镜下观察，可见绿色（含铬）、深褐色及专红色块状物或丝状物，像锯末似的，不像水解羽毛粉那样透明。 此外掺羽毛粉

9、、血粉、皮革粉还可用物理法和化学法进行检查，请参照本章第二节动物原料中鱼粉掺假检查部分。（三）掺无机氮及尿素的检查掺无机氮（NH4）2SO4、NH4CL及尿素，目的在于补充产品中的氮量，以提高蛋白质含量。检验方法如下：1掺无机氮检查取样品5-10 g,溶于50ml蒸馏水中，滴加AgNO3溶液数滴，如有白色沉淀生成则产品中有氯离子存在，可能掺有NH4CL。如滴加BaCL2溶液，有白色沉淀生成，则产品中有硫酸根存在，可能掺有(NH4)2SO4。2掺尿素的检查可参见本章节中玉米蛋白粉掺尿素的检查。（四）柠檬黄染色一般固体发酵生产的产品中，因残留大量的培养基，所以原料的选用不仅影响产品质量，同时也决定

10、产品的颜色。随着豆粕、鱼粉等蛋白原料的短缺，为了降低成本，许多厂家选用了棉籽粕、菜籽粕等到原料，但又要掩盖其较深（偏黑）的颜色，于是采取了两种方法，一是微粉碎；二是高剂量柠檬黄染色（在原料灭菌时加入），以使产品呈金黄色。检查方法：取样品10g左右，溶于50ml水中，多次振荡，1小时后观察上清液颜色，如颜色深则加染色剂。七、啤酒酵母的掺假识别啤酒酵母一般掺有豆粕、麦根、淀粉等，识别方法如下：（一） 水溶法无掺假之啤酒酵母可溶于水，取一个100ml烧杯，称取样品约5g，注入50ml蒸馏水，如果皆溶于水中，可判定为无掺假，否则为掺假。（二） 掺淀粉检查用碘-碘化钾法检查。方法是：取样品2-3 g置于

11、烧杯中，加入2-3倍水后加热1分钟，冷却后滴加碘碘化钾溶液（取碘化钾5g, 溶于100ml水中，再加碘2g），若样品中掺有淀粉，则颜色变蓝，随掺入淀粉的增加，颜色由蓝变紫。（三） 掺豆粕的检查可用显微镜法，检查有无豆粕的掺入。如果镜下可见豆粕皮和豆粕颗粒特征，证明掺有豆粕。豆粕皮下外表光渭，有光泽，并可见明显凹陷和针状小孔，内表面为白色多孔海绵状组织，并可观察到种脐。豆粕颗粒形状不规则，一般硬而脆，不透明，奶油色或黄褐色。（四） 掺有麦根的检查可用显微镜检查法，如有麦根，可在镜下发现有大麦皮，大麦皮下为黄褐色，并有凸起的脉。 动物性原料的掺假识别一、 鱼粉的掺假识别鱼粉中常掺有菜籽粕、棉籽粕、

12、羽毛粉、血粉、皮革粉、花生粕、芝麻粕、大豆粕、虾粉、蟹壳粉、贝壳粉、肉骨粉、尿素等，具体检查方法如下：（一） 感官检查法1. 视觉优质鱼粉颜色一致，呈红棕色、黄褐色或黄棕色等。细度均匀。劣质鱼粉为浅黄色、青白色或黑褐色，细度和均匀度较差。掺假鱼粉为黄白色或红黄色，细度和均匀度差。掺入风化土鱼粉色泽偏黄。2. 嗅觉优质鱼粉是咸腥味；劣质鱼粉为腥臭或腐臭味；掺假鱼粉有淡腥味、油脂味或氨味等异味。掺有棉籽粕和菜籽粕的鱼粉，有棉籽粕和菜籽粕味，掺有尿素的鱼粉，略具氨味，掺入油渣的鱼粉有油脂味。3. 触觉优质鱼粉手捻质地柔软呈鱼松状，无砂粒感；劣质鱼粉和掺假鱼粉捻有砂粒感，手感较硬，质地粗糙磨手。如结快

13、发粘，说明已酸败，强捻散后呈灰白色说明已发霉。（二） 显微镜检查 鱼粉为黄褐色或黄棕色等轻质物，按鱼肉、鱼骨和鱼鳞的特征可以鉴别。鱼肉镜下表面粗糙，具有纤维结构，类似肉粉，只是颜色浅。鱼骨为半透明至不透明的银色体，一些鱼骨块呈琥珀色，其空隙呈深色的流线型波状线段，似鞭状葡萄枝，从根部沿着整个边缘向外伸出。鱼鳞为平坦或弯曲的透明物，有同心圆，以深色和浅色交替排布。鱼鳞表面有轻微的十字架。鱼鳞表面碎裂，形成乳白色的玻璃珠。 烧焦鱼粉 鱼粉长期堆放，通过空气而自行燃烧，呈褐色。从镜下看不到油星，且颗粒碎小。鱼骨由半透明的银色体变为褐黄色的半透明体。鱼肉粗糙，纤维结构看不清楚或根本看不到。鱼粉掺假的显

14、微镜检查：1 掺菜籽粕鱼粉中掺菜籽粕镜下可见菜籽粕的种皮特征，种皮为深棕色并且薄，外表面有蜂窝状网孔，表面有汹涌内表面有柔软的半透明白色薄片附着。菜籽粕的种皮和籽仁碎片不连在一起，籽仁呈淡黄色，形状不规则，无光泽，质脆。2 掺棉籽饼粕鱼粉中掺棉籽饼粕镜下可见棉絮纤维附着在外壳上及饼粕颗粒上，棉絮纤维为白色丝状物，中空、扁平、卷曲、半透明、有光泽，棉籽壳碎片为棕色或红棕色，厚且硬，沿其边沿方面有淡褐色和深褐色的不同色层，并带有阶梯似的表面。棉籽仁碎片为黄色或黄褐色，含有许多圆形扁平的黑色或红褐色油腺体或棉酚色腺体。棉籽壳和棉籽仁是连在一起的。3掺稻壳粉鱼粉中参稻壳粉镜下可见具有光泽的表面，有井字

15、条纹，并可见到茸毛。4掺花生饼粕鱼粉中掺花生饼粕镜下可见花生种皮、外壳存在，种皮为红色、粉红色、浅紫色或棕黄色。外壳破碎呈极不规则的片状，分层，内层呈白色海绵状，有长条短纤维交织，外壳表面有突筋呈网状，外壳皮厚不均，有韧性。5掺芝麻饼粕鱼粉中掺芝麻饼粕镜下可见芝麻特征，芝麻种皮带有微小圆形突起，芝麻皮薄，黑色、褐色或黄褐色，因品种而异。6掺大豆粉鱼粉中掺大豆粉镜下可见豆皮、黄色或典褐色块状物。豆皮有凹形斑点，稍有卷曲，并可见种脐。白色海绵淀粉像水珠浮在块状物表面。7掺麦麸鱼粉中掺麦麸镜下可见淡黄色或棕色片状麸皮。麸皮外表面有细皱纹，内表面粘附有许多不透明的白色淀粉粒。8掺皮革粉鱼粉中掺皮革粉镜

16、下可见绿色、深褐色及砖红色的块状物或丝状物，像锯末似的，没有水解羽毛粉那样透明。9水解羽毛粉鱼粉中掺水解羽毛粉镜下可见半透明像松香一样的碎颗粒，有些反光。同时可见羽毛管和羽毛轴，似空心面。也可看见生羽毛。10掺虾肉粉鱼粉中掺有虾肉粉镜下可见虾须、虾眼、虾壳和虾肉等。虾壳类似卷曲云母薄片形状，半透明。少量的虾肉与虾壳连在一起。虾眼为黑色球形颗粒，较硬，为虾肉粉中较易辨认的特征。虾须在镜下观察为以断片存在，长圆管状，带有螺旋形平行线。虾腿为断片宽管状，半透明，带毛或不带毛。11掺蟹壳粉鱼粉中掺蟹壳粉镜下可见蟹壳的特征。蟹壳为小的不规则的几丁质壳的形状，壳外层多为橘红色，多孔，并有蜂窝状的圆形凹斑或

17、小盖状物。12掺贝壳粉鱼粉中掺有贝壳粉镜下可见贝壳粉的特征。贝壳粉颗粒很硬，表面两面光滑，颜色依贝壳种类不同而有较大的差异，有的为白色或灰色，也有的为粉红色。有些颗粒外表面具有同心的或平行的线纹或者带暗淡交错的线束，有些碎片边缘呈现锯齿状。13、掺海带粉 鱼粉中掺海带粉镜下可见其海带粉的特征，海带粉镜下呈浅灰色并杂有淡黄色，与国产鱼粉的颜色相近，颗粒不等，粒度大的呈片状，形状极不规则。14、掺血粉鱼粉中掺血粉，镜下可见血粉的特征。血粉在镜下颗粒形状各异，有的边缘锐利，有的边缘粗糙不整齐。颜色有紫黑色似沥青状，或者颜色为血红色晶亮的小球。15、掺肉骨粉 鱼粉中掺肉骨粉，镜下可见肉骨粉的特征。肉骨

18、粉镜下为浅黄色至深褐色，含脂肪高的色泽深，颗粒有油腻感，表面粗糙，并可见肌肉纤维。肌纤维较细，担相互联接。骨质为较硬的白色、灰色或宗黄色的快状颗粒，不透明或半透明，带斑点，边缘圆钝。次外还可见毛发、蹄角等附着物，经常可见混有血粉的特征。（三）物理检验 1、鱼粉中掺有黻皮、花生皮、稻壳粉的检验 取3g鱼粉样品，置于100ml玻璃烧瓶中，加入5倍水，充分搅拌后，静置1015分钟，麸皮、花生壳粉、稻壳粉因此比重轻，浮在水面上。 2、鱼粉中掺沙子的检验 取3g鱼粉样品，置于100ml的玻璃烧瓶中，加5倍水，充分搅拌后，静置1015分钟，鱼粉、砂子均沉于底部，再轻轻搅拌，鱼粉即浮动起来，随水流；转动而旋

19、转，而砂子比重大，稍旋转即沉于杯底，此刻可观察到砂子的存在。 3、鱼粉中植物性蛋白质的检验 取适量鱼粉用火燃烧，如发出与纯毛发燃烧后相同的气味，则为鱼粉，而具有炒谷物的香味，则说明其中混杂了植物蛋白质。 4、鱼粉中掺羽毛粉的检验 将10g样品放入四氯化碳与石油醚的混合液（100：41.5，d=1.326g/cm3)中搅拌静置，上浮物多为羽毛粉（或海蜇废弃物）。 5、测容量法 粒度为1.5mm的纯鱼粉，容量约为550-600g/l,如果重量偏大或偏小，均不是纯鱼粉。 （四）化学检验 1、鱼粉中掺杂锯末（木质素）的检验方法1 将少量鱼粉置于培养皿中，加入浓度为95%的乙醇浸泡样品，再滴入几滴浓盐酸

20、，若出现深红色，加水后深红色物质浮在水面，则说明鱼粉中掺有锯末物质。 方法2 称取鱼粉12g，置于试管中，再加入10%的间苯三酚10ml，再滴入数滴浓盐酸，观察样品的样品的颜色变化，如其中有红色颗粒产生，则为木质素，即说明鱼粉中掺有锯末类物质。 2、鱼粉中掺有淀粉类物质的检验 可用碘蓝反应来鉴定。其方法是：取试样23g置于烧杯中，加入23倍水后，加热1分钟，冷却后滴加碘碘化钾溶液（取碘化钾5g，溶于100ml水中，再加碘2g），若鱼粉中掺有淀粉类物质，则颜色变蓝，随掺入淀粉的增加，颜色由蓝色变紫。 3、鱼粉中掺入碳酸钙、石粉、贝壳、蛋壳粉的检验 可以用盐酸对碳酸钙的反应产生二氧化碳气体来判断。

21、其方法是：取试样10g，放在烧瓶中，加入2ml盐酸，立即产生大量气泡，即为掺入了上述物质。 4、鱼粉中掺入纤维类物质的检验如果怀疑鱼粉中掺入纤维类物质，可采用下述检方法：取试样25g，分别用1.25%硫酸和1.25%氢氧化钠溶液煮沸过滤，干燥后称重。纯鱼粉含纤维量极少，通常不超过1.0%。5、鱼粉中皮革粉的检验方法1 取少许鱼粉样品于培养皿中，加入几滴钼酸铵溶液（以溶液浸没鱼粉为宜），静置510分钟，如不发生颜色变化则为皮革粉，如呈现绿色则为鱼粉。钼酸铵溶液的配制 称取5g钼酸铵，溶解于100ml蒸馏水中，再加入35ml的浓硝酸即可。方法2 取2g鱼粉样品，置于坩埚中，经高温灰化，冷却后用水浸

22、润，加入2N硫酸10ml，使之呈酸性。滴加数滴二苯基卡巴腙溶液，如有紫色红色物质产生，则有多铬存在，即说明鱼粉中有皮革粉。2N硫酸的配制 量取55ml浓硫酸，倾入有200ml左右的蒸馏水的烧杯中，再转入1000ml容量瓶中，稀释定容即可。二苯基卡巴腙溶液的酸制 称取0.2 g二苯基卡巴腙，溶解于100ml90%的乙醇中。本测定方法的原理 基于皮鞣制过程中，采用铬制剂，通过灰化后，有一部分转变为六价铬，在强酸溶液中，六价铬与三苯基卡巴腙反应，生成紫色的水溶性二硫代卡巴腙化合物。6、鱼粉掺有羽毛粉的检验称取约1 g试样于2个500ml三角烧杯中，一个加入1.25%硫酸溶液100ml，另一个加入5%

23、氢氧化钠溶液100ml，煮沸30分钟后静置，吸取上清夜，将掺渣放在50100倍显微镜下观察。 如果试样中有羽毛粉，用1.25%硫酸处理掺渣在显微镜下呈现一种特殊的形状，而5%倾氧化钠溶液处理后的残渣则没有种特殊形状。7、鱼粉中掺入血粉的检验被检鱼粉12g于试管中，加入5ml蒸馏水，搅拌，静置数分钟后。另取一支试管，先加连苯胺粉末少许，然后加入2ml冰醋酸，震荡溶解，再加入12ml过氧化氢溶液，将被检鱼粉的滤液徐徐注入其中，如两液接触面出现绿色或蓝色的环或点，表明鱼粉中含有血粉，反之，鱼粉中不含血粉。本方法如不用滤纸，而用被检鱼粉直接徐徐注入溶液面上，在液面上及液面以下可见绿色或蓝色的柱或环，表

24、明有血粉掺入，否则没有血粉掺入。 所需试剂 冰醋酸 、连苯胺粉末、3%过氧化氢溶液（现用现配）。 本方法原理 鱼粉中铁质有类似过氧化酶的作用，可分解过氧化氢，放出新生态氧，使连苯胺氧化为连苯胺蓝，而呈绿色或蓝色。 8、鱼粉中掺尿素的检验 方法1 称取10克样品于烧杯中，加入100ml蒸馏水中，搅拌，过滤，取滤液1ml于点滴板上，加23滴甲基红指示剂，再滴加23滴尿素酶溶液，经约5分钟，如点滴板上呈深红色，则说明样品中掺有尿素。 尿素酶溶液的配制 称取0.2g尿素酶，溶解于100ml95%的乙醇中。 甲基红指示剂的配制 称取甲基红0.1g，溶解与95%的乙醇中。方法2 无尿素酶药品时，则可用此方

25、法检验。取两份1.5g鱼粉于两支试管中，其中一支加入少许黄豆粉，两管各加入蒸馏水5ml振荡，置60-70恒温水浴中3分钟，滴6-7滴甲基红指示剂，若加黄豆粉的试管中出现较深紫红色，则说明鱼粉中有尿素。 方法3 称取10g鱼粉样品，置于150ml三角瓶中，加入50ml的蒸馏水，加塞用力振荡2-3分钟，静置，过滤，取滤液5ml，于20 ml的试管中，将试管放酒精灯上加热灼烧，当溶液蒸干时，可嗅到强烈的氨臭味。同时把湿润的PH试纸放在管口处，试纸立即变成红色，此时pH值高达近14。如有纯鱼粉则无强烈的氨嗅味，置于管口处的pH试纸稍有碱性反应，显微蓝色，离开管口处则慢慢退去。 9 、鱼粉中掺入双缩脲的

26、检验 称取鱼粉试样2g，加20ml蒸馏水，充分搅拌，静置10分钟，干燥滤纸过滤，取滤液4ml于试管中，加6mol/l 氢氧化钠溶液1ml,再加入1.5%CaSO4溶液1ml,摇匀，立即观察，溶液呈蓝色者鱼粉为没有掺入双缩脲，若呈紫红色，则鱼粉中掺有双缩脲，红色越深，掺入双缩脲的比例越大。 10 、依据常规检验结果鉴别鱼粉掺假 通过测定粗蛋白、纯蛋白、粗纤维、粗脂肪、粗灰分及淀粉等项指标，可以准确识别鱼粉成分的真伪。掺有尿素的鱼粉，因为含有大量的非蛋白氮，所以测定粗蛋白值很高，而真蛋白值却很低，掺入植物蛋白原料后，真蛋白虽然很高，但脂肪和淀粉含量相对增加；掺入植物秸秆粉后，纤维含量增高；掺入风化

27、土，灰分境增加。 11、纯/粗蛋白比值鉴别鱼粉掺假 甲醛尿素聚合物是常见的非蛋白氮掺入物，由于尿素以聚合物的形式存在，故用测定游离尿素的方法无法检出。目前多根据纯/粗蛋白比值来推断是否掺有这类高氮化合物。一般认为用纯/粗蛋白的比值80%即没有掺入高氮聚合物。 纯/粗蛋白的测定方法 （1）纯蛋白的测定原理 蛋白质与重金属盐类在碱性条件下，由于盐析作用而沉淀下来，而非蛋白氮则易溶于水，故可用热水将水溶性含氮化合物洗去，用凯氏定氮法测定沉淀物，即可得出纯蛋白的含量。若得出的纯/粗蛋白的比率小于80%，则可判断为鱼粉中掺这类非蛋氮化合物。 （试剂） 6%硫酸铜溶液 称取30.0gCuSO4 ，加水溶解

28、，并稀释至500ml。 1.25%氢氧化钠溶液 称取6.25g氢氧化钠，加水溶解，并稀释至500ml。 0.05mol/L 盐酸标准溶液。 （3）仪器 半微量定氮仪 （4）测定步骤 精确称取鱼粉样品1g左右，置于250ml烧杯，加入100ml水（指去离子水，下同），于电炉上加热煮沸，加入25ml6%CuSO4 溶液，再在搅拌下，缓缓加入25ml1.25%NaOH溶液，摇匀。从电炉上取下，室温放置2小时，用11cm中速定性滤纸倾注法过滤。并用少量水多次洗涤烧杯和沉淀物，直至洗出液无SO42-离子。于80干燥箱烘至略潮，小心卷起滤纸成棒状，连沉淀物一起移入250ml凯氏烧瓶中，加入浓硫酸20ml，

29、3.5 gK2SO4和0.5gCUSO4，摇匀。置电炉上小心消化至澄清透明，继续加热半小时，取下冷却，小心加入50ml水，放冷，移入100ml容量瓶中，用少量水多次洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶，再补水至刻度。蒸馏、滴定同粗蛋白。 （4）粗蛋白测定同国标法。 （5）计算 纯/粗蛋白%=100%付一 鱼粉中掺尿素的定量测定 方法一 1.试剂 对二甲氨基苯甲醛（PMAB）溶液 称取3.2g，PMAB，用200ml乙醇溶解，再加入20ml盐酸，该溶液在1个月内稳定。 醋酸锌溶液 称取22.0g醋酸锌溶于水，加3ml醋酸，再用水稀释至100ml 。 亚铁氰化钾溶液 称取0.6g亚铁氰化钾溶于水并稀释至100

30、ml。 活性炭。 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取3.403g无水磷酸二氢钾和4.355g无水磷酸氢二钾分别溶于约100ml水中，合并两面三刀溶液并稀稀释至1000ml，作为储备液。分别吸取1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml、储备液于50ml容量瓶中，用磷酸缓冲液定容，则尿素工作液浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、120ug/ml、160ug/ml、200ug/ml、240ug/ml。 2仪器 分析天平；振荡机；分光光度计；恒温水浴；具塞试管；三角瓶。3.测定步骤 （1）工作曲线的绘制 吸取各浓度尿素工作液5ml置于试管中（空白管为5ml磷酸缓冲液

31、），各加入对二甲氨基苯甲醛溶液5ml，轻轻摇匀后置于25水浴中10分钟，在420nm处读取各溶液吸光值。以尿素浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制工作曲线或作回归方程。 （2）样品的测定 称取2g试样（精确至1mg）置于300ml三角瓶中，加2g活性炭，190ml水，50ml醋酸锌溶液和5ml亚铁氰化钾溶液，震荡提取30分钟，待完全沉淀后过滤。取5ml滤液于试管中，加入5ml二甲氨基苯甲醛溶液，充分振荡后置于25水浴中10分钟，此时于420nm波长下读取吸光度值。对照液为5ml磷酸缓冲液，加入5ml对二甲氨基苯甲醛溶液，充分振摇后置于25水浴中10分钟，此时于420nm波长下读取吸光度值。对照液为5ml磷酸缓冲液，加5ml对二甲基甲醛溶液，按照试样溶液的同样方法操作。4计算 D0.2 尿素（%）= 100%。 W式中：D从工作曲线上计算出待测溶液浓度（g/ml）； W试样重量，g。方法二1 原理尿素在酸性条件下与二乙酰肟和硫代氨基脲共煮，二乙酰肟分解成二乙酰与尿素形成二嗪衍生物的复合物。该复合物颜色的深浅与尿素的含量成正比，在540nm波长处测定其吸光度，与标准比较定量。2 试剂酸性试剂 吸取44ml浓硫酸，66ml浓磷酸加于盛有600m