流式细胞仪检测细胞周期操作步骤学习资料.docx

1、流式细胞仪检测细胞周期操作步骤学习资料流式细胞仪检测细胞周期操作步骤取对数生长期的A549细胞，按1106 cells/ mL以1mL接种于100mm培养皿内24h后，进行所需的处理（比如加药,照射）特定时间后终止培养，进行下一步的实验收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入15ml离心管中1000rpm离心5min（短时低速离心）弃上清，用1.5ml预冷PBS，1000rpm离心5min后去除PBS和细胞悬液内的细胞碎片加入1.5ml预冷PBS,在涡旋状态下加入3.5ml无水乙醇，混匀后，于4固定30min,或-20长期保存。1000r/min,离心5min将乙醇吸除，加PB

2、S清洗混匀1000r/min,5min再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去吸除离心管内PBS，加入200ul PBS和2ul的RNA酶（0.25mg/ml）(37下孵育30min)加入0.5ml的50ug/ml的PI溶液室温下避光染色30min 将离心管内的细胞过滤(300um尼龙网膜)至含有PBS的EP管中（PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP管提前一天网上预约开机（先开仪器后开软件）流式细胞仪的结构一般分为5部分：流动室及液流驱动系统； 激光光源及光束成形系统； 光学系统； 信号检测、存贮、显示、分析系统； 细胞分选系统。检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm激发光源）荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞DNA分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例）在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出结果分析Modfit软件分析图片拷贝：直接Ctrl+C