新版GMP培养基适用性检查验证方案.docx

1、新版GMP培养基适用性检查验证方案培养基适用性检查验证方案文件编号： VMP-VV-501-00起草人：审核人：批准人：批准日期： 年 月 日验证立项申请表申请部门质量部申请日期年月日验证对象培养基要求完成日期年月日验证原因微生物验证验证类别微生物验证为了确认所采用细菌、 霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。申请部门负责人签名： 日期：质量部意见签名： 日期：验证方案编号 VMP-VV-501-00验证报告编号 VMP-VV-501REP-00负责人意见签名： 日期：部门 姓名 职务验证小组成员备注：验证方案审批

2、表审批负责人签名日期备注程序部门起草审核批准 负责人备注1.概述通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。2.验证目的及范围为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。3.验证风险评估对于本次验证的执行进行了如下的风险分析：严重程度可能性可检测风险优先级

3、RPN=S PDSPD1低1低1高RPN 7低可以接受，无需采取措施2中2中2中16 RPN 8一定程度上接受，但应按风险优先级中采取措施尽可能降低3高3高3低RPN 16 或严高不能接受，尽快采取措施降低重程度 44关键4极高4极低步骤/单可能原因 /RR危害SP现行控制DP需采取措施SPDP元程序失败NN验证部分项目方案培训不严格执行经批准确认按照批准的方案到位，方案的培训出现偏差或漂32的验证报告进行318培训， 培训者均熟练掌1122执行者不熟移培训，并考核合格握所培训内容。悉方案内容未遵循培养制定培养基适用确认培养基适用性检基适用性检性检查检查操作检 验 过查检查操作规程已制查检查操

4、作规程，并对规程及未达到设定标318定并批准， 确认人员已1122程 操 作规程，未严格23不当准，验证失败。设立的验证方法培训； 确认操作规程适遵循方案规培训，按规程及方用性。定方法。案要求进行操作。4.验证前准备验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件 1。将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。仪器与器具：恒温培养箱、生化培养箱、高压蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培养皿、无菌移液管。5.验证内容测试环境条件要求所有检查在环境洁净度 C 级下的局部 A 级洁净度的单向流空气区域内

5、隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。计数培养基验证用菌种及培养基：来源：食品药品检验所菌落计数用菌种菌种名称内控编号大肠埃希菌 (Escherichia coli) CMCC（ B） 44 102E-金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus) CMCC（B）26 003S-枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) CMCC（ B） 63 501B-白色念珠菌 (Candida albicans) CMCC (F) 98 001 C-黑曲霉 (Aspergillus niger)CMCC(F) 98 003A-注：编号由菌种首字母 - 传代代

6、数 - 配制日期组成。培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌，在实验前加温熔化备用。培养基名称培养基批号配制日期有效期至营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基营养琼脂对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml 营养肉汤培养基中，3035培养 18 24 小时，取此培养液 1ml，加无菌氯化钠溶液至10ml，采用 10 倍递增稀释法，稀释至 10-6 10-7 ，使菌数约为 50100cfu/ml ，做活菌计数备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml 改良马丁培养基中， 2

7、3 28培养 2448 小时，取此培养液 1ml，加无菌氯化钠溶液至 10ml，采用 10 倍递增稀释法，稀释至 10-6 10-7 ，使菌数约为 50 100cfu/ml ，做活菌计数备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上， 2328培养 5 7 天的用 35ml含%（ml/ml ）聚山梨酯 80 的%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤丝的无菌毛细吸管）至无菌试管中，取 1ml 加含 %（ ml/ml ）聚山梨酯 80 的%无菌氯化钠溶液至 10ml，采用 10 倍递增稀释法，稀释至 10-4 10-6 , 制成每1ml 含孢子

8、数 50100cfu 的孢子悬液备用。验证方法：试验组：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各 1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，混匀，凝固，置 3035培养 48小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各 1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，混匀，凝固，置 2328培养 72小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件 2。对照组：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各 1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，混匀，凝固，置 30

9、35培养48 小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各 1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，混匀，凝固，置 2328培养 72 小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件 2。菌回收率计算：试验组的菌回收率（ %）=（试验组平均菌落数 / 对照组平均菌落数） 100%判定标准：菌回收率均应不低于 70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。结论：对计数培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。控制菌培养基适用性检查：验证用菌种：来源：食品药品检验所验证用菌种菌种名称内控编号大肠埃希菌 (Escherichia coli) CMC

10、C（ B） 44 102E-金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus) CMCC（B）26003S-培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定的方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌。在实验前加温熔化备用。培养基名称 培养基批号 配制日期胆盐乳糖培养基MUG培养基有效期至乳糖胆盐发酵培养基胆盐乳糖对照培养基MUG对照培养基乳糖胆盐发酵对照培养基菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至10ml 营养肉汤培养基中， 3035培养 1824 小时，取此培养液 1ml 加无菌氯化钠溶液至10ml，采用 10 倍递增稀释法，稀释至 10-4 10-6

11、 ，使细菌数约为5001000cfu/ml 。验证方法：促生长能力培养基：取大肠埃希菌各，分别涂布于胆盐乳糖培养基、 MUG培养基和乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上， 在 3035培养 18 小时，观察菌落情况。测定结果见附件 3。抑制能力培养基：取金黄色葡萄球菌各，分别涂布于胆盐乳糖培养基和乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上，在 30 35培养 18 小时，观察菌落情况。测定结果见附件 3。指示能力培养基：取大肠埃希菌各，分别涂布于乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上，在3035培养 18 小时，观察菌落情况。测定结果见附件 3。判定标准：促生长能力培养基：试验培养基与对照培养基生长的菌落大

12、小、形态特征应一致。抑制能力培养基：试验菌均不得生长。指示能力培养基：试验培养基与对照培养基生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应一致。结论：对控制菌培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。6.变更和偏差处理：验证过程中如果出现偏差和变更，应立即通知验小组对偏差和变更进行详细记录，分析偏差产生的根本原因并提出解决方法。所有偏差和变更得到有效处理后，验证方可进入下一步骤。偏差处理单和变更单经过批准后其原件必须附在验证报告中。见附件 4。7.验证结果评定及结论：质量部负责收集各项验证试验结果，起草验证报告，报验证委员会。验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书，确认

13、培养基适用性检查情况。见附件 5。8.拟定再验证周期：验证小组根据验证情况，拟定再验证周期，报验证领导小组审批。9.会审及批准会 审：批 准：附件 1培训人员记录表部 门 培训人员签名 签到日期培训师签名 日 期附件 2结果试验菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌结果试验菌白色念珠菌黑曲霉验证结果评定营养琼脂计数培养基营养琼脂 营养琼脂对照回收率 菌落观察情况菌落数 菌落数1 12 2平均 平均1 12 2平均 平均1 12 2平均 平均玫瑰红钠琼脂 玫瑰红钠琼脂对照回收率 菌落观察情况菌落数 菌落数1 12 2平均 平均1 12 2平均 平均操作人 日期复核人 日期附件 3项目结果胆盐乳糖

14、培养基胆盐乳糖对照培养基MUG培养基MUG对照培养基乳糖胆盐发酵培养基乳糖胆盐发酵对照培养基验证结果评定控制菌检查用培养基促生长能力 抑制能力 指示能力操作人 日期复核人 日期附件 4偏差处理与变更记录验证项目名称 验证项目编号偏差说明：可能的原因：偏差分类：重大 小理由：采取措施：（如需要另附文件）结果：（如需要另附文件）建议（如需要另附文件） 接受偏差 不接受偏差理由：（如需要另附文件）批准人： 日期：附件 5验证证书根据药品生产质量管理规范 （ 2010 年版）要求，对验证。经本公司有关部门进行验证审查，结果符合验证要求，批准使用。特发此证。验证项目名称：验证方案编码：验证完成日期：有 效 期：1培养基适用性检查应在当前验证条件下使用， 使用条件发生变更，应报验证领导小组审核，必要时重新验证。2培养基适用性检查应按批准的标准检验和验证。批准人：年 月 日