新版GMP培养基适用性检查验证方案.docx
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新版GMP培养基适用性检查验证方案
培养基适用性检查
验证方案
文件编号：
VMP-VV-501-00
起草人：
审核人：
批准人：
批准日期：
年月日
验证立项申请表
申请部门
质量部
申请日期
年
月
日
验证对象
培养基
要求完成日期
年
月
日
验证原因
微生物验证
验证类别
微生物验证
为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度
检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
申请部门负责人签名：
日期：
质量部意见
签名：
日期：
验证方案编号VMP-VV-501-00
验证报告编号VMP-VV-501REP-00
负责人意见
签名：
日期：
部门姓名职务
验证小组成员
备注：
验证方案审批表
审批
负责人签名
日期
备注
程序
部门
起草
审核
批准负责人
备注
1.概述
通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根
据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证
标准。
若符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方
法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
2.验证目的及范围
为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检
查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
3.验证风险评估
对于本次验证的执行进行了如下的风险分析：
严重程度
可能性
可检测
风险优先级
RPN=S×P×D
S
P
D
1
低
1
低
1
高
RPN≤7
低
可以接受，无需采取措施
2
中
2
中
2
中
16≥RPN≥8
一定程度上接受，但应按风险优先级
中
采取措施尽可能降低
3
高
3
高
3
低
RPN＞16或严
高
不能接受，尽快采取措施降低
重程度＝4
4
关键
4极高
4
极低
步骤/单
可能原因/
R
R
危害
S
P
现行控制
D
P
需采取措施
S
P
D
P
元
程序失败
N
N
验证部分项目
方案培训不
严格执行经批准
确认按照批准的方案
到位，方案的
培训
出现偏差或漂
3
2
的验证报告进行3
18
培训，培训者均熟练掌
1
1
2
2
执行者不熟
移
培训，并考核合格
握所培训内容。
悉方案内容
未遵循培养
制定培养基适用
确认培养基适用性检
基适用性检
性检查检查操作
检验过
查检查操作规程已制
查检查操作
规程，并对规程及
未达到设定标
3
18
定并批准，确认人员已
1
1
2
2
程操作
规程，未严格
2
3
不当
准，验证失败。
设立的验证方法
培训；确认操作规程适
遵循方案规
培训，按规程及方
用性。
定方法。
案要求进行操作。
4.验证前准备
验证人员培训：
验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
仪器与器具：
恒温培养箱、生化培养箱、高压蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培养皿、无菌移液管。
5.验证内容
测试环境条件要求
所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。
计数培养基
验证用菌种及培养基：
来源：
食品药品检验所
菌落计数用菌种
菌种名称
内控编号
大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC
（B）44102]
E-
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus）[CMCC（B）26003]
S-
枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）[CMCC
（B）63501]
B-
白色念珠菌（Candidaalbicans）[CMCC（F）98001]
C-
黑曲霉（Aspergillusniger）[CMCC（F）98003]
A-
注：
编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。
培养基及其制备方法：
取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三
角烧瓶中，然后加塞灭菌，在实验前加温熔化备用。
培养基名称
培养基批号
配制日期
有效期至
营养琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
营养琼脂对照培养基
玫瑰红钠琼脂对照培养基
菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至
10ml营养肉汤培养基中，
30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml，加％无菌氯化钠溶液至
10ml，采用10倍递增
稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。
接种白色念珠菌的新鲜培养物至
10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时，取此
培养液1ml，加％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌
数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天的用3～5ml
含%（ml/ml）聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，吸出孢子悬液（用管口
带有薄的无菌棉花或纱布能过滤丝的无菌毛细吸管）至无菌试管中，取1ml加含%（ml/ml）
聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6,制成每
1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。
验证方法：
试验组：
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml，分别注入无菌平皿中，立
刻倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48
小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾
注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72
小时，计数、观察菌落情况。
测定结果见附件2。
对照组：
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml，分别注入无菌平皿中，立
刻倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养
48小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各1ml，分别注入无菌平皿中，立刻
倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培
养72小时，计数、观察菌落情况。
测定结果见附件2。
菌回收率计算：
试验组的菌回收率（%）=（试验组平均菌落数/对照组平均菌落数）×100%
判定标准：
菌回收率均应不低于70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
结论：
对计数培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。
控制菌培养基适用性检查：
验证用菌种：
来源：
食品药品检验所
验证用菌种
菌种名称
内控编号
大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC
（B）44102]
E-
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus）[CMCC（B）26
003]
S-
培养基及其制备方法：
取市售的脱水培养基，分别按照规定的方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌。
在实验前加温熔化备用。
培养基名称培养基批号配制日期
胆盐乳糖培养基
MUG培养基
有效期至
乳糖胆盐发酵培养基
胆盐乳糖对照培养基
MUG对照培养基
乳糖胆盐发酵对照培
养基
菌液制备：
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至
10ml营养肉汤培养基中，30～
35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加％无菌氯化钠溶液至
10ml，采用10倍递增稀释法，
稀释至10-4～10-6，使细菌数约为
500～1000cfu/ml。
验证方法：
促生长能力培养基：
取大肠埃希菌各，分别涂布于胆盐乳糖培养基、MUG培养基和乳糖胆盐
发酵培养基及其对照培养基上，在30～35℃培养18小时，观察菌落情况。
测定结果见附件3。
抑制能力培养基：
取金黄色葡萄球菌各，分别涂布于胆盐乳糖培养基和乳糖胆盐发酵培养基
及其对照培养基上，在30～35℃培养18小时，观察菌落情况。
测定结果见附件3。
指示能力培养基：
取大肠埃希菌各，分别涂布于乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上，在
30～35℃培养18小时，观察菌落情况。
测定结果见附件3。
判定标准：
促生长能力培养基：
试验培养基与对照培养基生长的菌落大小、形态特征应一致。
抑制能力培养基：
试验菌均不得生长。
指示能力培养基：
试验培养基与对照培养基生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应一致。
结论：
对控制菌培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。
6.变更和偏差处理：
验证过程中如果出现偏差和变更，应立即通知验小组对偏差和变更进行详细记录，分析
偏差产生的根本原因并提出解决方法。
所有偏差和变更得到有效处理后，验证方可进入下一
步骤。
偏差处理单和变更单经过批准后其原件必须附在验证报告中。
见附件4。
7.验证结果评定及结论：
质量部负责收集各项验证试验结果，起草验证报告，报验证委员会。
验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书，确认培养基适用性检查情况。
见附件5。
8.拟定再验证周期：
验证小组根据验证情况，拟定再验证周期，报验证领导小组审批。
9.会审及批准
会审：
批准：
附件1
培训人员记录表
部门培训人员签名签到日期
培训师签名日期
附件2
结果
试验菌
大肠埃希
菌
金黄色葡
萄球菌
枯草芽孢
杆菌
结果
试验菌
白色念珠
菌
黑曲霉
验证结果
评定
营养琼脂计数培养基
营养琼脂营养琼脂对照
回收率菌落观察情况
菌落数菌落数
11
22
平均平均
11
22
平均平均
11
22
平均平均
玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂对照
回收率菌落观察情况
菌落数菌落数
11
22
平均平均
11
22
平均平均
操作人日期
复核人日期
附件3
项目
结果
胆盐乳糖培养
基
胆盐乳糖对照
培养基
MUG培养基
MUG对照培养
基
乳糖胆盐发酵
培养基
乳糖胆盐发酵
对照培养基
验证结果评定
控制菌检查用培养基
促生长能力抑制能力指示能力
——
——
——
操作人日期
复核人日期
附件4
偏差处理与变更记录
验证项目名称验证项目编号
偏差说明：
可能的原因：
偏差分类：
□重大□小
理由：
采取措施：
（如需要另附文件）
结果：
（如需要另附文件）
建议（如需要另附文件）
□接受偏差
□不接受偏差
理由：
（如需要另附文件）
批准人：
日期：
附件5
验证证书
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
根据《药品生产质量管理规范》（2010年版）要求，对
验证。
经本公司有关部门进行验证审查，结果符合验证要求，批准使用。
特发此证。
验证项目名称：
验证方案编码：
验证完成日期：
有效期：
1．培养基适用性检查应在当前验证条件下使用，使用条件发生变更，
应报验证领导小组审核，必要时重新验证。
2．培养基适用性检查应按批准的标准检验和验证。
批准人：
年月日
升级会员 