第十七章化妆品的分析与检测.docx

1、第十七章化妆品的分析与检测第十七章 化妆品的分析与检测近几年，随着经济的高速发展和社会生活的现代化，接触化妆品的人群日益增多，化妆品行业也获得了空前的发展，种类日趋繁多，成分日趋复杂，因此化妆品对健康的影响就成为人们关注的焦点。一、评价化妆品的四大要素：安全性：指暴露与某一特定物质不存在可预见的危害的危险性，或仅存在没有实际意义的可被忽视的危害。 稳定性：指的是物质在一定条件下分解的难易程度。 使用性：就是使用这个化妆品会给你带来什么样的效果，比如美白，补水，保湿，提亮等。 有效性：是否满足人们的需求很需要的效果。 二、化妆品的综合分析与评价： 感官及稳定检测：为提升感官评定的准确性，稳定产品

2、使用，提高使用检验准确率，特制定此流程。包括视觉、味觉、嗅觉。 安全性评价：是指综合运用安全系统工程学的理论方法，对系统存在的危险性进行定性和定量分析，确认系统发生危险的可能性及其严重程度，提出必要的控制措施，以寻求最低的事故率、最小的事故损失和最优的安全效益。 微生物检测：为了更具实用性、先进性、可读性，便于使用者和化妆品行业从业人员参考。 重金属检测：从环境污染方面所说的重金属，实际上主要是指汞、镉、铅、铬、砷等金属或类金属，也指具有一定毒性的一般重金属，如铜、锌、镍、钴、锡等。 第一节 化妆品的感官及稳定性检测一、化妆品的感官评价（1）护肤用品的感官评价 护肤用品的感官评价是通过对其使用

3、性能的测定来评价的，膏霜、乳液类产品的性能评价主要包括以下几个内容： 铺展性：主要指产品在涂抹过程中是否容易铺展，是否容易起白条现象。 渗透性：指护肤产品在使用过程中其中的油脂、 活性成分是否容易渗透进皮肤中。 滋润性：指护肤产品赋予皮肤的滋润感。 油腻性：指护肤产品在使用中没有过度的油腻感。 粘起感：指用指头将膏体挑起时的难易程度及此时的膏体形状。 直接使用感：指膏体在使用时以上各性能指标的情况。 后期使用性：指膏体在使用10 min以后以上各性能的情况。 （2）洁肤用品及洗发产品的性能评价 洁肤用品及洗发产品的性能评价主要有以下几方面： 分散性：在使用过程中样品是否容易分散于皮肤、头发上。

4、 泡沫性：产品在使用中泡沫是否丰富、细腻且稳定。 易冲洗程度：产品在使用后是否容易漂洗干净。 紧绷性：洁肤产品在使用后是否有明显的紧绷感。 脱脂感：产品使用后是否有过度脱脂现象。二、化妆品的稳定性检测表17-1温度保管指标1天2天3天1周2周1月2月3月其他 50 1月气味外观粘度Ph40 3月气味外观粘度Ph-10 40 4月气味外观粘度粘度Ph5 3月气味外观粘度Ph25 3月气味外观粘度Ph1.外观考察，有无分层现象，气味有无变化，有无沉淀，膏体有无粗细变化。2.光照实验。3.试验当天硬度、粘度。备注：第二节 化妆品的安全性评价一、急性毒性试验急性毒性，常被称为半致死量，记做LD50，是

5、FDA规定化妆品及化妆品组分的毒理指标之一，急性毒性试验（经口服或经皮肤渗透）一般可分为急性口服毒性试验和急性皮肤毒性试验。 LD50系指当受动物经一次或24 h内多次摄取大剂量化妆品或化妆品组分等试验物质后，因毒理反应而出现受试动物死亡数目在50 %时的试物质量（mg）和受试物体重（kg）之比，即以mg/kg表示，并注明试物液摄取的途径、受试动物的种类、产源、性别、体重等。美国FDA 将其列为评价化妆品组分的依据指标，主要原因如下： 肤用化妆品虽不属于口服之列，但由于擦用过后，可经皮肤渗透于体内而中毒。 唇部化妆品，因随食物而带入体内，被组织吸收进入血液循环，可导致中毒。 眼部化妆品，因流泪

6、或淌汗，经脸部皮肤渗入体内，可产生毒理反应。 婴幼儿误食化妆品，可导致中毒死亡。 化妆品涉及面广，男女老少皆用；应用频率高，护肤，美容均不可少，尤其当今化妆品品种繁多，化妆品新原料亦层出不穷地升级换代，就需要LD50的评价数据，以利配制前的正确选用，确保使用者的安全。 吗啡：1-50 mg/kg阿斯匹林：50-500 mg/kg甲醇：500-5000 mg/kg乙醇：5000-15000 mg/kg根据物质的半致死剂量LD50值，美国科学院把毒性物质危险划分为五个等级 “0”：无毒性，LD50 15 g/kg “1”：实际无毒性，5 g/kg LD50 15 g/kg “2”：轻度毒性，0.5

7、 g/kg LD50 5 g/kg “3”：中度毒性，50 mg/kg LD50 500 mg/kg“4”：高度毒性，LD50 50 mg/kg二、皮肤刺激性试验 化妆品皮肤刺激性试验指采 用动物(一般为家兔)试验的方法来评价化妆品对人体皮肤刺 激性大小的试验。试验包括急性皮肤刺激和多次皮肤刺激两 部分内容，具体做法是将受试样品一次剂量或多次剂量涂敷 于健康无破损的动物皮肤上，观察产生的可逆性炎性症状。 为化妆品对人体皮肤的安全性提供依据。其结论分为无刺激 性、轻刺激性等四个等级。 皮肤刺激强度评价 表17-2强度 分值 强度 分值 无刺激性 0.00.4 中等刺激性 2.05.9 轻刺激性

8、0.51.9 强刺激性 6.08.0 表17-3皮肤反应积分皮肤反应积分红斑形成无红斑0水肿形成无水肿0勉强可见1勉强可见1明显红斑2皮肤隆起轮廓清晰2中等到严重红斑3水肿隆起约1 mm3紫红色红斑并有焦痂形成4水肿隆起超过1 mm,范围扩大。4三、眼刺激性试验试验基本原则： 1受试样品以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照； 2在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试样品对眼睛的刺激作用。观察时间应能足以评价刺激效应的可逆性和不可逆性。观察时间最少72 h，但一般不超过21 d； 3当动物出现严重和持久的痛苦迹象时，

9、以适当的方式将动物处死； 4强酸或强碱物质如pH 2或pH 11.5，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本试验； 5已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验，可以推测该物质对眼睛将会引起相似的严重结果； 6在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必进行体内试验。 目的：检测外来化合物对实验动物眼和粘膜得原发性刺激和腐蚀作用的急性试验，为人类眼和粘膜接触该受试物的潜在危害提供资料。 实验动物：首选成年白色家兔（如果使用其它的哺乳动物做试验，试验者应提供选择的依据【应选择与人类皮肤、粘膜反应比较相近的动物，常用的动物有家兔、豚鼠。动物种属的选择应依据要观察

10、的指标和模型的合理性。通常一个试验类型选择一种动物进行评价。】），体重23 kg，至少3只（如果受试样品的显著效应是可预见的，可以考虑用一只动物。如果用一只动物试验得出的结果提示受试样品有严重的刺激性和腐蚀性，则不必进行进一步的试验。如果结果相反，则至少需要3只家兔。有时，在增加动物的进一步试验中应该适当的阐明可疑反应。）。试验前动物要在动物实验室环境中至少适应3 d时间。试验前24 h，要对实验动物的两只眼睛进行常规检查。有眼睛刺激症状、角膜缺陷或结膜损伤的动物不能用于试验。 眼刺激性评价标准表17-4急性眼刺激积分指数（1、A、0、1）(最高数)眼刺激的平均指数（M、1、0、1）眼刺激个体

11、指数（1、1、0、1）刺激强度0548 h后为0-无刺激性51548 h后5-轻刺激性153048 h后10-刺激性30607 d后20（6/6动物30）7 d后 （ 4/6动物10）中度刺激性60807 d后40(6/6动物60）7d后（ 4/6动物30）中度到重度刺激性80110-重度刺激性眼刺激性评价标准表17-5观察项目刺激反应判断符号分值角膜浑浊（以最致密部位为准）无浑浊散在或弥漫浑浊、虹膜清晰可见半透明区易分辨、虹膜模糊不清出现灰色透明区、虹膜细节不清、瞳孔大小勉强看清角膜不透明、由于浑浊、虹膜无法辨认+01234虹膜正常褶皱明显加深、充血、肿胀、角膜周围轻度充血瞳孔对光任有反应出

12、血、肉眼可见坏死、对光无反应（或出现其中一种反应）+012结膜充血（指眼睑膜、球结膜部位）血管正常血管充血呈鲜红色血管充血呈深红色、血管不易分辨弥漫性充血呈紫红色+0123水肿无水肿轻微水肿（包括瞬膜）明显水肿、伴有部分眼睑外翻水肿至眼睑半闭合水肿至眼睑超半闭合+01234分泌物无分泌物少量分泌物分泌物使眼睑或睫毛潮湿或粘着分泌物使整个眼区潮湿或粘着+0123四、过敏性试验过敏性试验（皮肤变态反应试验）是以诱发过敏为目的的而进行的诱发性投药，是以确认药物的诱发性效果和过敏性。实验动物多数为豚鼠，每组受试验动物数为1025只。试验配成0.1%水溶液，从头部向尾部成对地做三次皮内注射。经过一星期后

13、，第8d用2cm*4cm滤纸涂以赋形剂配制的试验物质，将其贴于注射部位，持续48h做封闭试验。第三节、化妆品微生物检测一、化妆品中细菌总数的检测化妆品细菌总数测定：指对化妆品内容物单位质量或体积)内所含细菌数量的检测，通常以1g或1ml化妆品中所含活菌的数量表示。测定细菌总数可以用来判明化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、设备、工艺流程及操作环境的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的科学依据。国家标准刘一每种化妆品的细菌总数都有具体要求，如优级品的润肤乳液中细菌总数应控制在 5010个/1g之内。具体测定方法参见GF3 7918.287。仪器设备: （1）培养箱：（361）。（2）

14、恒温水浴锅：（461）。（3）天平。（4）灭菌广口瓶或三角瓶：500ml。（5）灭菌培养皿：皿底直径9.0。（6）灭菌吸管：1.0、10.1。（7）灭菌小试管。（8）玻璃珠：直径5。（9）均质机。（10）灭菌刀、剪刀、镊子。（11）酒精灯。 培养基和试剂: (1)蛋白胨10 g (2)琼脂1520 g (3)牛肉膏3 g (4)蒸馏水1000 mL (5)氯化钠5 g (6) pH 7.27.4 (7)营养琼脂培养基制法：将除琼脂以外的各成分溶于蒸馏水中，用15%的NaOH调节pH使之在7.27.4。加入琼脂，于121 下高压灭菌15 min (2) 生理盐水成分：(1)NaCl 0.9 g

15、(2)蒸馏水 100 ml制法：一般每种检样配制250 ml无菌生理盐水。称取2.2 gNaCl,加入250 ml蒸馏水溶解；分装于2支大试管中，每支9 ml;再量取225 ml装于500 ml广口瓶或三角瓶中，并加入适量的玻璃珠；剩余的装入另1支试管中，包扎后于121下高压灭菌15 min。 (3) 75的酒精棉球。实验步骤: 在无菌条件下，将25 ml(或25 g)检样剪碎，放入装有225 ml无菌生理盐水和玻璃珠的500 ml广口瓶或三角瓶内，经充分振摇，形成10-1均匀稀释液。用1 ml的无菌吸管吸取10-1稀释液1 ml，注入装有9 ml无菌生理盐水的试管内，振摇混合均匀，即为10-

16、2稀释液。再用此吸管吸取10-1稀释液各1 ml于2个培养皿内。另取1 ml的无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，注入装有 9 ml无菌生理盐水的试管内，振摇混合均匀，即为10-3稀释液。再用此吸管吸取10-2稀释液各1 ml于2个培养皿内。采用相同的方法吸取10-3稀释液各1 ml于2个培养皿内。检样在361 下48 h后营养琼脂培养基中细菌的菌落数。化妆品中微生物指标限值表17-6微生物指标限值备注菌落总数（CFU/g）小于等于500小于等于1000眼部化妆品，口唇化妆品和儿童化妆品以及其他化妆品霉菌和酵母菌总数（CFU/g）小于等于100耐热大肠杆菌群/g不得检出金黄色葡萄球菌/g不得检

17、出铜绿假单胞菌/g不得检出二、 化妆品中粪大肠菌群的检测 粪大肠菌群是生长于人体和温血动物肠道中的一组肠道细菌，随粪便排除体外，约占粪便干重的1/3以上，故称为粪大肠菌群。受粪便污染污染的水、食品、化妆品和水壤等物质均含有大量的这类菌落。在化妆品中若检出有粪大肠菌群，即表明该化妆品已经被粪便污染，这时一般该化妆品的菌落总数均很高。被粪便污染的化妆品中可能有肠道致病菌存在，经消费者使用等途径进入人体后，可引起肠道性疾病，故这种化妆品对消费者存在潜在的危险性。从对化妆品微生物污染状况检测表明，有三种微生物（粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌）容易引起化妆品的污染，其中以粪大肠杆菌群超标比列最

18、高。（一）粪大肠菌群的生化特性粪大肠菌群不是细胞学上的分类命名，而是根据卫生学方面的需要，设定的一类与粪便污染有关的一组细菌。粪大肠菌群为一群需氧及兼性厌氧的菌落，呈革兰阴性反应，能在普通培养基上生长繁殖。其生化活动能力较强，能发酵多种糖类，产酸产气，其特点是能较快发酵乳酸。粪大肠菌群在乳酸培养基中于37摄氏度下进行培养，在24 h内能使乳糖发酵产酸，还有甲酸解氢酶进行甲酸分解，生成氢气和二氧化碳，产生大量气体，这时，若加入伊红美蓝指示剂，分解乳糖所产生的酸（带阳电荷）与伊红美蓝呈紫色且有金属光泽，故常用此特性来鉴定粪大肠菌群。将粪大肠菌群接种于蛋白胨水培养基中，于37摄氏度培养24 h,粪大

19、肠菌群能分解培养基中蛋白质的色氨酸，产生淀基质（吲哚），当与试剂（对二甲基氨基苄甲醛）作用后，形成红色化合物玫瑰淀基质（玫瑰吲哚），此种反应在生化中称为吲哚反应。（二）检测步骤（1）发酵（产酸产气）试验 将试样液以无菌接种于双倍乳糖胆盐发酵管（其内放有倒置的小玻璃管，以收集气体）内，置44摄氏度培养皿中培养2448 h。由于乳糖胆盐培养基是一种具有选择作用的培养基，其中胆盐具有抑制革兰阳性菌的作用。若观察到发酵管内不产酸（由酚酞指示剂指示）、不产生，则报告试样为粪大肠菌群阴性，未检出粪大肠菌群，检测结束。若发酵管内产酸产气，则继续进行下列检测。（2）鉴别培养 将产酸产气的发酵管内试样培养液接种

20、到伊红美蓝琼基平皿上，置37摄氏度培养1824 h;同时将该培养液接种到蛋白胨水中，置于44摄氏度培养24。（3）验证试验 对所检出的细菌需要进一步验证其是否是粪大肠菌，验证方法有以下三种菌落观察：在上述平面培养基上，仔细观察菌落生长情况。大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上其典型菌落呈深红色、圆形、边缘整齐、表面光滑湿润、常有金属光泽，或呈紫黑色不带或略带金属光泽及粉色，中心较深的菌落。革兰染色、镜检:将以上典型的（或近似的）大肠菌落进行革兰染色、镜检，若呈现阳性（紫色）反应，则报告未检出大肠菌群。靛基质试验（吲哚试验）：在上述已培养好的蛋白胨水中滴入靛基质试剂（对二甲基氨基苄甲醛）进行靛基质反应

21、，若液面呈玫瑰红色，呈阳性反应，则报告粪大肠菌群呈阳性，检出：若液面任是棕黄色，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出粪大肠菌群。综合分析以上所有测试结果，当发酵管内产酸产气，观察试验平面皿为典型粪大肠菌落，并经革兰染色、镜检试验为阴性（-）及靛基质试验为阳性（+），则报告该试样液检出粪大肠菌群。三、绿脓杆菌的检测1.原理绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42 条件下能生长。该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。2.仪器（1）恒温培养箱：37 、42 。（2）三角瓶。（

22、3）试管。（4）平皿。（5）刻度吸管：10 mL、2 mL、1 mL。（6）显微镜。（7）载玻片。（8）接种针、接种环。(9)电炉。(10)高压灭茵器。3.培养基和试剂(1)SCDLP液体培养基(2)十六烷基三甲基溴化铵培养基 表17-7成分:牛肉膏3 g 蛋白胨 氯化钠 十六烷基三甲基溴化铵 琼脂 蒸馏水10 g5 g0.3 g20 g1000 mL 制法：除琼脂外，将上述成分混合加热溶解，调pH为7.47.6，加入琼脂，68.95 kPa (10 1b)20 min灭菌后，制成平板备用。(3)乙酰胺培养基 表17-8 成分:乙酰胺10 g 氯化钠 无水磷酸氢二钾 无水磷酸二氢钾 硫酸镁(M

23、gSO47H2O) 酚红 琼脂 蒸馏水5 g1.39 g0.73 g0.5 g0.012 g（1.2 %溶液1 mL）20 g1000 mL 制法：除琼脂和酚红外，将其它成分加到蒸馏水中，加热溶解，调pH为7.2，加入琼脂、酚红，103.43 kPa(15 lb)20 min高压灭菌后，制成平板备用。(4)绿脓菌素测定用培养基 表17-9 成分:蛋白胨20 g 氯化镁 硫酸钾 琼脂 甘油(化学纯) 蒸馏水1.4 g10 g18 g10 g1000 mL 制法：将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加温使其溶解，调pH至7.4，加入琼脂和甘油，加热溶解，分装于试管内，68.95 kPa(10 l

24、b)20 min高压灭菌后，制成斜面备用。(5)明胶培养基 表17-10 成分:牛肉膏3 g 蛋白胨 明胶 蒸馏水5 g120 g1000 mL制法：取各成分加到蒸馏水中浸泡20 min，随时搅拌加温使之溶解，调pH至7.4，分装于试管内，经68.95 kPa(10 lb)20 min灭菌后，直立制成高层备用。(6)硝酸盐蛋白胨水培养基 表17-11 成分:蛋白胨10 g 酵母浸膏 硝酸钾 亚硝酸钠 蒸馏水3 g2 g0.5 g1000 mL 制法：将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中，加热使之溶解，调pH为7.2，煮沸过滤后补足液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠，溶解混匀，分装到加有小倒管的试管中，68.

25、95 kPa(10 lb)20 min灭菌后备用。(7)普通琼脂斜面培养基 表17-12成分:蛋白胨10 g牛肉膏 氯化钠琼脂 蒸馏水 3 g5 g15 g1000 mL 制法：除琼脂外，将其余成分溶解于蒸馏水中，调pH为7.27.4，加入琼脂，加热溶解，分装试管，103.43 kPa(15 lb)20 min高压灭菌后，制成斜面备用。4.操作步骤（1）增菌培养：取1:10样品稀释液10 mL加到90 mL SCDLP液体培养基中，置37 培养18h24 h。如有绿脓杆菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。（2）分离培养：从培养液的薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷基三甲

26、基溴化铵琼脂平板上，置37 培养18h24 h。凡绿脓杆菌在此培养基上，其菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素，此培养基选择性强，大肠艾希氏菌不能生长，革兰氏阳性菌生长较差。在缺乏十六烷基三甲基溴化铵培养基时也可用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平板上，放37 培养24 h，绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其它菌不生长。（3）染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。（4） 氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌

27、可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，在15 s30 s之内，出现粉红色或紫红色时，为氧化酶试验阳性；若培养物不变色，为氧化酶试验阴性。（5）绿脓菌素试验：取可疑菌落23个，分别接种在绿脓菌素测定培养基上，置37 培养24 h，加入氯仿3 mL5 mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中并加入1 mol/L的盐酸1 mL左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。(6) 硝酸盐还原产气试验：挑取可疑的绿脓杆菌纯培养物，接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，置37 培养24 h，观察结果。凡在硝酸盐蛋白胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。(7) 明胶液化试验，取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置37 培养24 h，取出放冰箱10 min30 min，如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性；如凝固不溶者为阴性。(8)42 生长试验：挑取可疑的绿脓杆菌纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在4142 培养箱中，培养24 h48 h，绿脓