重医免疫学思考题解析.docx

1、重医免疫学思考题解析临床检验免疫学-思考题答案抗原抗体反应一、 抗原抗体反应的原理1.） Ag、Ab能特异性结合：（内因）Ag、Ab能特异性结合，是由于Ag表位（抗原决定簇）和Ab Fab段（V区）之间的特异性结 合，二者在空间结构上是严格互补的。1.）Ag、Ab结合的动力：（外因）静电引力（又称库仑引力）：它是指抗原和抗体分子上带有相反电荷 -NH3+或-COCT之间的相互吸引力。 例如Ab分子上赖氨酸离解层中含有 -NH3+ , Ag分子上天门冬氨酸离后含有-COO-，这两者之间就可相互吸引而产生静电引力。该力的大小与两个电荷间距离的平方成反比。距离越近，静电引力就越强。范得华力（又称电子

2、云力）：该力是原子与原子、分子与分子间所具有的一种吸引力。 当Ag、 Ab两分子外层轨道上的电子相互作用时， 电子云由于偶极摆动而产生吸引力， 从而促使Ag、 Ab的结合。 该力大小小于静电引力。氢键：该力是由于分子中的 H原子和电负性较大的 O、N、S原子间的相互吸引而形成的。 氢键对于维持生物大分子（AgAb ）的形态和结构有很大作用。它的大小大于范得华力。疏水作用力：Ab是蛋白质，Ag少数是多糖，多数也是蛋白质，那么它们就是胶体物质，在水溶液中就带有-NH3+或-COCT极性基团，从而带上正电或负电 ，成为亲水胶体。当Ag表位和Ab Fab段相互靠近时，亲水层消失，排斥掉两者间的 H2O

3、分子，促进Ag、Ab的结合。 疏水作用力在整个 Ag、Ab反应中提供的作用最大二、 抗原抗体反应的特点1） .特异性：Ag、Ab的结合实质上是抗原表位和抗体可变区之间的结合。 Ab可变区可形 成一个平穴槽，Ag则楔状嵌入，由于两者在化学结构和空间结构上的互补，使得它们的结合具有特异性。 这种结合如同钥匙与锁的关系，一把钥匙只能开相应的一把锁2） .最适比例：Ag、Ab的结合并不是在任何比例下都进行得充分、完全的。要形成我们肉眼可见的反应（如沉淀、凝集现象等） ，就涉及到最适比例问题。3） .可逆性：Ag、Ab结合形成抗原抗体复合物，这一过程是一个动态平衡，在一定的条件下，反应是可逆的： Ag

4、+ Ab tAgAb，其主要原因为 Ag、Ab结合是非共价键结合，不为 化学反应。三、 影响抗原抗体反应的主要因素自身因素：1） Ag :与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关；2） Ab :与Ab的来源有关：是 R型抗体或H 型抗体；与Ab的特异性、亲合性有关； 与Ab的浓度有关。外界环境条件：1） .电解质：一般实验室所用电解质都是生理盐水 （0.9% NaCl）,浓度不能过高。浓度过高， 会使Ab蛋白质优先沉淀而出现盐析现象。2） . PH : 一般为PH 6-8,当PH 试血和放血）鉴定、保存试血和放血：试血：末次Ag注射后，测定血清中Ab的效价，叫试血。若Ab达到所需效价, 即可

5、放血。若未达到，继续追加免疫 Ag 一次。试血：可溶性Ag :用双扩（梅花孔型）；颗粒性Ag :用直接凝集试验（试管法） 放血：直接颈动脉放血或直接心脏穿刺抽血。然后分离出血清，即可得到 Ab二、 佐剂概念、作用机理、福氏不完全/完全佐剂的组成。.佐剂（adjuvant）:同Ag 一起或预先注入机体，能增强机体对该 Ag的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。作用机理：组成：1福氏不完全佐剂（FIA）：组成：羊毛脂+石腊油，二者比例为 4 ： 12福氏完全佐剂（FCA）：组成：羊毛脂+石腊油+卡介苗免疫效果更好，因为进一步提高、加强了免疫反应，并使免疫反应发生质的改变。免疫球蛋白的分离提纯分离提纯

6、免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？方法原理盐析法在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水， 降低带电电势，亲水性变为疏水性， 分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。离子父换 层析法利用不冋的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不冋，与某一载体上的具有相反电 荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。凝胶过滤法凝胶颗粒是网状结构， 当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时， 分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来， 从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。亲和层析 法利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联 （吸附）到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当 Ab （

7、Ig）通过时，与抗原特异性结合于柱上，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液 pH、离子强度，使Ab解脱下来。单克隆抗体及应用一、单克隆抗体概念针对Ag分子表面某一抗原决定簇（又称表位）而产生的抗体分子，称 McAb单克隆抗体一一由一个B细胞克隆产生的识别单一抗原表位的同源抗体。二、 杂交瘤技术制备单抗的原理及简要步骤原理：1、 B细胞（浆细胞）特点：1）能产生抗体 2）但不能在体外长期培养 3）细胞内含HGPRT酶（次黄嘌呤鸟 嘌呤磷酸核糖转化酶）和TK酶（胸腺嘧啶核苷激酶），可通过旁路途径合成DNA2、 骨髓瘤细胞1）能在体外长期培养 2）不含HGPRT和TK酶3、 杂交瘤细胞具有以上两种细胞

8、的共性：既能产生抗体、在体外能长期培养；同时含有 HGPRT和TK酶，可通过旁路途 径合成DNA4、 HAT培养液筛选出杂交瘤细胞（次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）:氨基蝶呤是抗代谢的药物，能阻断内源性合成 DNA （合成DNA的主要途径）。 简要步骤：1制备能产生单抗的杂交瘤细胞2克隆化杂交瘤细胞3筛选杂交瘤细胞4.扩大培养单克隆杂交瘤细胞5收集单抗并鉴定6.纯化单抗（具体的步骤可以参考 ppt）三、 HAT培 养基 的作用筛选出杂交瘤细胞四、 人源单克隆抗体概念：单克隆抗体为人IgG五、 基因工程抗体、嵌合抗体概念，嵌合抗体优点基因工程抗体：在基因水平上对编码抗体的基因进行切割、 拼接或修饰

9、，甚至人工合成，然后导入受体细胞内表达而产生的抗体（单克隆抗体） 。嵌合抗体概念：用DNA重组技术将鼠源单抗基因的可变区（ V区）基因与产生人lg的恒定区（C区）基因相连接，构成嵌合基因，导入受体细胞（骨髓瘤细胞） ，表达出嵌合抗体。嵌合抗体优点：a.免疫原性低，有利于用于人体b.在人体内半衰期较鼠单抗长c.在人体内生物学作用（如 CDC、ADCC ）较鼠单抗强d.与人/人杂交瘤比，体外传代更稳定补体的检测与应用一、 补体的定义、组成及性质定义：补体是存在于人和动物血清中的一组具有酶活性的球蛋白，一般情况下处于未 激活状态。组成：1补体的固有成分：C1-C9,其中C1又包括C1q、C1r、C1

10、s,共9种成分11种蛋白分子。其 中C9的分子量最小、C3的含量最高；2补体的调节蛋白：如 C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3补体受体；女口 C1qR、C3aR等；性质：稳定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧烈震荡等二、 CH50实验的原理、正常值及意义原理：a组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血；b.羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比； （S型）c.在50%溶血附近（30% 70%之间），稍微改变补体量，溶血程度变化明显，因此以 50%溶血率来判定终点较 100%更为敏感，所以该试验称为 50%溶血试验（CH50）。正常值：50 100U/ml意义：1

11、补体量T :多见于急性炎症感染、组织损伤、癌肿；2补体量见于补体消耗f:体内有 Ag、Ab反应，如SLE、RA等；补体合成J：肝脏疾患； 补体先天性缺乏：具有遗传性和家族史三、 补体结合实验的原理、结果判断及评价原理：补体可与任何一组 AgAb复合物结合；一旦与某一 AgAb复合物结合后，便不 再与另一复合物结合。结果判断：不溶血为阳性，即待测物中有相应的 Ab或Ag ；溶血为阴性，即待测物中无相应的 Ab或Ag.评价:优点缺点1、 该试验既可测 Ag、又可测Ab ；2、 Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测 Ag的范围广；3、 可以用于病毒、立克次氏体、细菌等

12、多种病原体的检测（实际上是测 Ag ）；4、 比较敏感（0.05卩g/ml）、特异；5、 结果判断明显：通过有无溶血来观察，无 需特殊仪器检测。1、 参与反应的物质多，影响因素也多； （反 应体系中有Ag、Ab、C、羊红细胞、溶血素）2、 在正式试验前需要找出几种物质间最恰当 的比例，比较复杂。机体免疫功能检测、人体免疫功能包括哪些组成部分?类型 组成非特异性免疫1皮肤、黏膜的机械阻挡作用及局部分泌的抑菌、杀菌物质 2吞噬细胞的吞噬作用3.NK（nature killer）细胞对病毒感染靶细胞的杀伤作用4血液、体液中的抗菌分子：补体、溶菌酶特异性免疫细胞免疫：由TLC主导完成，其效应物质是致敏

13、 TLc（CTL/Th1） 体液免疫：由BLC主导完成，其效应物质是 Ab二、实验室中检测人细胞免疫和体液免疫最常用哪些试验，这些试验的原理如 何？正常值应为多少？一 .T细胞的计数（T细胞表面标志的检测）（一） 特异性抗原的检测T细胞表面有一些特异的 CD抗原，根据这些不同的 CD抗原可鉴定不同的 T细胞群体 CD抗原：淋巴细胞群（簇）分化抗原：不同群淋巴细胞在分化成熟过程中，细胞表面 出现或消失的抗原分子 检测T淋巴细胞表面CD抗原中：CD3+的数量表示成熟的总 T淋巴细胞的数量，CD4+的数量表示是Th细胞的数量，CD8+的数量表示是CTL/Ts细胞的数量。CD4+/CD8+ 1.5。免

14、疫功能差或者免疫功能紊乱，该比值小于 1（二） T细胞特异性受体（E受体）的检测E 花环形成试验 （Erythrocyte Rosette forming test）原理：T淋巴细胞表面含有绵羊红细胞（ SRBC）受体（CD2），当T淋巴细胞与绵羊红细胞相遇时，T细胞通过该受体吸附绵羊红细胞而形成花环。正常值：Et花环形成试验：60%80% （代表T细胞总数）Ea花环形成试验：20%30% （活性强的T细胞）二、T细胞功能的检测检测T细胞功能的试验有：（一） 淋巴细胞转化试验1原理淋巴细胞在某些物质刺激下，细胞增殖、分化（如细胞变大、胞浆增多、出现空泡）DNA合成增加（核染色质疏松，核仁出现）

15、 ，转化成为淋巴母细胞。正常值60%80%（二） 相关的细胞因子的检测（在细胞因子章节介绍）（三） 淋巴细胞的细胞毒性检测细胞毒性T细胞（CTL）具有杀伤靶细胞的功能，它是评价机体细胞免疫水平的指标。检测 这种杀伤作用的试验称为细胞毒试验。CD8+CTL与靶细胞表面相应抗原结合通过脱颗粒，释放穿孔素、颗粒酶，使靶细胞溶解、 凋亡。三、 B细胞数量的检测（一） B细胞表面识别抗原受体（BCR ）（Smlg, Surface membrane lg）的检测I.Smlg 是B细胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟 B淋巴细胞膜上，为 B细胞结构蛋白。类型为：IgM、IgD型。正常值：15%25%（二） B

16、细胞表面抗原的检测B细胞表面特有的 CD抗原有：CD19、CD21，用抗CD21的单抗（免疫荧光法、酶免 疫组化法）检测外周血淋巴细胞，阳性细胞为 B淋巴细胞，约占总淋巴细胞的 10%15%。四、 B细胞功能的检测（一） 血清中lg的测定人的体液免疫功能正常（B细胞功能正常），应反映在血清中有正常量的免疫球蛋白 检测人免疫球蛋白常用方法：单向琼脂扩散试验、免疫比浊法正常值：IgG 12.0mg/ml（7.616.60）IgM 1.3mg/ml （0.402.20）IgA 2.0mg/ml（0.703.50）（二） 血型抗体效价的测定反映体内IgM水平正常6月婴儿抗 A 1 : 8,或抗 B 1

17、 : 4; 1岁后抗A1:16，或抗B 1 : 8如3岁以上抗A或抗B效价仍 1 : 4，表示IgM缺乏，提示先天性体液免疫功能缺陷。（三） 抗原刺激机体后抗体应答反应（体内试验）将抗原注射到体内， 一段时间后检测相应抗体效价， 如抗体效价低，说明机体体液免疫功能差如用三联伤寒菌苗 0.25ml注射，每周1次，连续3次，抗H应为1 : 160，若低，表 示体液免疫应答功能差。免疫复合物及检测一、 免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病原因含义：immune complex,IC 它主要指 AgAb复合物及 AgAbC复合物两种。致病原因：中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板而致病。

18、二、 免疫复合物检测使用的标准品、出现的问题及 WHO推荐的检测方法 标准品：目前普遍应用的标准品是 AHG 热聚合人IgG （不是IC）。出现问题：到目前为止，所有检测 IC的试验，还没有另人满意的标准化措施 ；在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。WHO推荐的检测方法：C1q结合试验、胶固素试验、类风湿因子（ RF）试验、Raji细胞试验自身免疫性疾病及检测、AID的基本特征及常见的AID有哪些?1诱因可有可无。2、 有一定的遗传倾向。3、 女性患者多见，发病率随年龄增长而增加。4、 患者血清中可检出高效价的自身抗体和（或）自身致敏 T淋巴细胞。一些自身抗体

19、在自 身免疫病中呈现交叉重叠现象 ：即在同一种自身免疫病患者体内可检测到多种自身抗体， 而不同的自身免疫病也可存在同一种自身抗体。5、 IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明显。6、 病损局部可发现有淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润及免疫复合物沉积。7、 免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。二、ANA的定义及ANAs的组成ANA原指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。ANA广义地指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总和。 ANA所针对的靶抗原由细胞核扩展到整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞周期等。组成：抗DNA抗体：抗dsDNA、抗ssDNA抗体 抗组蛋白抗体（AHA） :抗 H1、H2A、H2B、H3、H4