酚氯仿抽提法修改版.docx

1、酚氯仿抽提法修改版第一篇：酚氯仿抽提法求助】PBS-酚/氯仿抽提法提取的DNA方法 大家能介绍一下PBS-酚/氯仿抽提法提取DNA的方法吗, 我们实验室没有钱买试剂盒, 还得自己配试剂, 谢谢! 你是提取细胞的还是血液的？ PBS是洗涤样品的作用吧，我用酚/氯仿抽提法提过DNA，与试剂盒比较起来，总体感觉是浓度大但是纯度不是很纯，但是做PCR的话是能购满足条件得，如果说要做酶切等操作的话，最好还是用试剂盒抽提 以下方法可供你参考，祝你好运 细胞DNA的提取 PBS洗涤离心2次，弃上清，加入400 L裂解液（100mg L1蛋白酶K，10mmolL-1 Tris-HCI，15 mmolL-1 N

2、aCl，10mmolL1 EDTA，4gL1SDS pH8.0），重悬细胞，37保温1224h。加450L平衡酚，混匀，5000 g离心10min转移上层水相，重复酚抽提1次转移上层水相，加入450L氯仿：异戊醇（24：1），混匀，5000g离心10min。转移上层水相，加入110体积3molL1乙酸钠（pH 5.2）和2.5倍体积无水乙醇，混匀置20 1h后， IO000g离心15min。以700mLL1乙醇洗涤2次，晾干后，加入50LTE，20保存备用 血液提DNA 300ul抗凝全血加1000ul PBS，充分混匀，8000rpm离心5min。 去上清液，加1000ul PBS，充分混匀

3、，8000rpm离心5min。 去上清液，加500ul消化Buffer（ 100mg L1蛋白酶K，10mmolL-1 Tris-HCI，15 mmolL-1 NaCl，10mmolL1 EDTA，4gL1SDS pH8.0），充分混匀，56水浴5h以上。 加500ul 25:24的酚氯仿，混匀，13000rpm离心10min。 取上清液，加等量的25:24的酚氯仿，混匀，13000rpm离心10min。 取上清液，加2倍体积的无水乙醇，轻摇混匀，直到出现絮状沉淀。（未见沉淀提示DNA量不多） 15000rpm离心3min。 去上清液，加500ul 70%的乙醇，充分混匀，15000rpm离心

4、3min。 去上清液，晾干，加50ul TE完全溶解备用。 我觉得酚/氯仿抽提法提取DNA还是可以的，除了开始做的少数几个标本，我一般提取的纯度没有低于1.8，甚至一些超过了2.0。不过，我们也不要完全相信仪器的数值，它只能提供一个参考。 我做的方法是： 1 DNA提取（血液） （1）加入等体积的PBS磷酸盐缓冲液，充分混匀后12000rpm离心5min，弃上清；加400lSTE，10%SDS 40l，蛋白酶-K 10l（10mg/ml） （2）56度水如2小时，也可以37度消化过夜；不过后者我做的较少； （3）等体积饱和酚，倒转摇匀。12000rpm 5分钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心

5、管；小心一点，不要吸入蛋白层； （4） 上清液加等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），倒转混匀。12000rpm 5分钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心管； （5）上清液加等体积氯仿：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上清入另一管； （6）加1/12体积3M 醋酸钠，混匀后再加3倍体积的4冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔振摇；然后你会看到白色絮状物（DNA）。 （7）-20放置2030分钟，12000rpm 低温（4）离心10分钟，沉淀DNA，去上清；可以直接倒掉； （8） 加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 低温（4）离心10分钟，去上清，重复1次；

6、（9） 自然干燥后，用pH8.0TE溶解，保存在-20备用。 我觉得，在提取的时候，吸取上清要根据实际情况，不要有的上清不是很多而偏要定个统一的标准，只要提取的与加入的试剂成一定比例就可以了。否则，会影响实验结果的。不过，看到一个战友说“加入酚的液体分层抽吸上层液时，在避免吸入蛋白的前提下，要尽量把上层液吸多点，因为很多DNA就在两层中间；加入醋酸钠和预冷无水乙醇后，放置在20度冰箱，时间长一点，2小时，以充分沉淀DNA。” 最好一次不要做得太多，容易出错。 2 DNA浓度的测定 取3ul DNA 标本加72l 双蒸水，充分混匀后，用紫外分光光度计测定，计算浓度和比值，判断DNA的浓度和纯度。

7、 若DAN纯度第二篇：常规酚-氯仿抽提法改进常规酚-氯仿抽提法改进. 取材：取50 mg 肌肉组织放入1.5 mL Ep管中，加灭菌双蒸水，用灼烧过的剪刀将肌肉剪碎（越碎越好）. 消化：吸除Eppendorf 管中的双蒸水，加入500 L裂解缓冲液及67 L 的20 g/L 的蛋白酶K，置于55 水浴锅中消化. 在消化的第1 h 内，每隔10 min 混匀1次，加快消化速度. 消化时间根据消化程度而定，大约34 h. Tris-平衡酚抽提：4 、5 000 r/min 条件下，将消化后的组织液离心5 min，取上清液至新的Eppendorf 管中，加入等体积的Tris-平衡酚（约500 L），

8、旋转器上摇匀10 min，在4 、8 000 r/min 条件下离心15 min，上清液移至新的Eppendorf 管中. 混合抽提：加入Tris-平衡酚和氯仿异戊醇混合液各250 L，颠倒混匀10 min，在4 、8 000 r/min 条件下离心15 min，取上清液至新的Eppendorf 管中. 氯仿异戊醇抽提：加入等体积的氯仿异戊醇，颠倒混匀10 min，4 、8 000 r/min 条件下离心15 min. 将上层水相小心转移至新的Eppendorf 管中. 沉淀：加入4 、0.1 倍体积浓度为3 mol/L 的NaAc（约50 L）、2.5 倍体积冷冻的无水乙醇（约1 mL），旋

9、转混匀. 置于-20 冰箱，沉淀3 h 以上. 保存：在4 、12 000 r/min 条件下离心10 min 后弃掉溶液，烘干，加入50L 灭菌双蒸水在4冰箱保存. 第三篇：酚氯仿抽提解析大全DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。 二、材料以方法 1、 材料：培养菌体 2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式

10、离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪 3、 试剂： 细胞裂解液 100 mM Tris-HCl 5 mM EDTA 500 mM NaCl 1.25% SDS PH 7.5 饱和酚，氯仿/异戊醇，酚/氯仿/异戊醇 无水乙醇，70乙醇，异丙醇 3 M NaAc pH5.2, RNase，50TE缓冲液，电泳载样缓冲液 三、操作步骤 （1） 培养菌体 （2） 加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65下2030 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇 （3） 1200015000rpm离心15 min （4） 取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，120001500

11、0rpm离心15 min （5） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20）或2倍体积冷无水乙醇（-20） （6） 加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min （7） 1200015000rpm离心10 min （8） 倒弃液体留下沉淀，用70乙醇洗涤沉淀 （9） 加入2倍体积无水乙醇 （10） 1200015000rpm离心10 min （11） 倒弃液体留下沉淀，真空干燥 （12） 复溶于2 ml TE （13） 加入RNase，65或37处理1030 min （14） 加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，1200015000rpm离心10 min （15）

12、取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20）或2倍体积冷无水乙醇（-20） （16） 加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min （17） 1200015000rpm离心10 min （18） 倒弃液体留下沉淀，用70乙醇洗涤沉淀 （19） 真空干燥沉淀 （20） 复溶于0.51.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4或-20保存。 （21） 电泳检测提取DNA的质量 四、结果与分析 点样空，若发亮则说明有污染 超螺旋结构DNA，若条带有拖尾则 说明有破碎的DNA 少量未清除的RNA 五、注意事项 1、 重点防止DNA的损伤，包括各种物理、化学和机械损伤。 2、

13、干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水，以备后面直接利用。如果用TE 缓冲液溶解，后面还需去离子。 3、 取上清时，如果上清液过少，可再加入少量水，重新离心，取上清，避免DNA损失过多。 第四篇：酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤： 1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min 2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300l），研磨后再加入300lDNA裂解液冲洗研磨棒。 3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10l蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56,5h）。 4.

14、加入等体积的Tris饱和酚（500l），摇匀（10min）。 5.离心：12000R，7min，4。离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。 6.吸取上层液体加入新的离心管。 7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。 8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450l，摇匀10min。 9.离心：12000R，7min，4。 10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400l（氯仿：异戊醇=24:1）。 11.离心：12000R，7min，4。 12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20冷冻的100%的

15、酒精。-20过夜。 13.将样品取出，12000R，7min，4离心。 14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400l的75%的经过-20冷冻的酒精，反复吹打溶解。 15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。 16.提取DNA完成。 溴氯仿法提取DNA的原理： 用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？ 使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。 使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。 缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解

16、一部分poly（A）RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。 氯仿的作用？ 氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中） 用酚氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？ 异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？ 用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减

17、少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。 原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。 将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。 溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。加4毫升10S

18、DS溶液，使溶液的SDS浓度达到1左右，边加边搅拌，放置60 水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分钟； 除杂质：加等体积氯仿-异戊醇混合液，充分震荡10分钟， 8000 r/min离心7分钟，取上层液量好体积，倒入烧杯中（离心管），加同体积的氯仿-异戊醇混合液，重复上次操作。直至界面不出现蛋白凝胶为止； 沉淀：准确量取上清液体积，加2倍体积95冷乙醇，搅拌后，置冰箱静止冷却，待有白色丝状物出现，约10-15分钟，离心8000 r/min离心7分钟，得白色沉淀； 溶解：将沉淀物用0.1mol/L NaOH约10毫升溶解,得DNA溶液。

19、 溶液I溶菌液： 溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。 EDTA：（1）螯合Mg2、Ca2等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。 溶液IINaOHSDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。但当pH12或pH3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。在溶液II中

20、的NaOH浓度为0.2mo1L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。 SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。（2）解聚细胞中的核蛋白。（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-R-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。 溶液III-3molL NaAc（pH4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。所以该溶

21、液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。而高盐的3molL NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。 为什么用无水乙醇沉淀DNA？ 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合

22、状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67左右。因而也可改用95乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95乙醇昂贵）。但是加95的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置1530分钟即可。 在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.10

23、.25mol/L？ 在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。 加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理？ 加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再

24、加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。 7为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？ 在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。磷酸盐缓冲系统（pKa7.2）和硼酸系统（pKa=9.24）等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2产生Ca3(PO4)2沉淀；在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离

25、子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳 苯酚、氯仿、异戊醇在DNA提取时的作用 抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？ 酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。作为表

26、面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约1015的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合（1:1）使用。 为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？ 在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子

27、表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。 苯酚：氯仿：异戊醇为什么要25:24:1？ 抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分

28、开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约1015的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合（1:1）使用。 为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡

29、，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。 第五篇：苯酚-氯仿法从小鼠尾巴中抽提基因组DNA从小鼠尾巴中抽提基因组DNA 一、试剂与材料 裂解液：50mM Tris(pH8.0) 100mM EDTA 0.5% SDS 蛋白酶K(Proteinase K) 10mg/ml (溶解在pH8.0,50mM Tris和1m

30、M CaCl2中，-20保存)。使用时，终浓度达到100ug/ml RNaseA RNaseA溶液配制将RNaseA溶解在0.001moll醋酸钠（pH5.2）中，使终浓度为10mgml，加热到 100，15min。室温下缓慢冷却，用0.1体积的1M的Tris-Cl调整pH至7.4后，小管分装保存在-20。使用时，终浓度为100ug/ml. Tris平衡苯酚；氯仿（三氯甲烷）； Tris平衡苯酚:氯仿=1:1(体积比) 3M 醋酸钠（pH5.2）；无水乙醇； 70%乙醇；无菌ddH2O. 手术剪，1.5mlEP管. 二、方法 剪取0.5cm小鼠尾巴(约20-30mg)，立即放入细胞冻存管并投入

31、液氮中（防止基因组DNA降解）。 从液氮中取出鼠尾，剪碎，放入1.5mlEP管中，加入350ul裂解液、20ul蛋白酶K和0.9ul RNaseA，混匀。 在热孵育器中，55过夜。（刚开始可每隔30min摇晃一次） 后续操作可在冰上进行- 取出EP管，加入等体积Tris平衡苯酚，用力摇晃3min；12000g，离心10分钟。 轻轻吸取上清至一新的1.5mlEP管中（宁可少吸，也不要吸到下层的苯酚或沉淀物）。 向上清中加入等体积苯酚/氯仿，用力摇晃2分钟；12000g，离心2分钟。 吸取上清至另一新的1.5mlEP管中，加入1/10体积的醋酸钠溶液和2.5倍体积的无水乙醇，摇匀。 12000g，离心1分钟，尽可能吸除上层乙醇。 加入1ml，70%乙醇漂洗DNA，用力摇匀。（此步为了去除残留的SDS和苯酚） 12000g，离心1分钟，去除乙醇，再重复、一次（为了尽可能把DNA清洗干净）。 将EP管倒置在吸水纸上，以吸干乙醇。 用65预热的无菌ddH2O,35ul溶解DNA，-20保存。 分光光度计检测纯度、浓度。DNA提取的注意事项 1、裂解液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进DNA溶解。 2、酚一定要碱平衡。苯酚具有高度腐蚀性，飞溅到皮肤、粘膜和眼睛会