培养基性能确认参考文件.docx

1、培养基性能确认参考文件培养基性能确认方法1. 目的 培养基性能确认法是为确认培养基的性能而进行的检测，证明培养基的性能，从而可以信赖所检测出的实验结果。2. 范围 : 配制的培养基，每次培养时，购买的培养基，每次购买时都要确认其性能。3. 设备及试剂(1) Incubator 2025, 3035 (2) 平皿 (内直径 9 cm) (3) Loop - 10 (cat No. 251586 ; NUNC)(4) Spreader (cat No. 90050 ; SPL)(5) Micropipet, 灭菌 Tip (1 mL 容量, 0.1 mL 容量)(6) Tube (10 mL 容量

2、) (7) 铂金线 (8) 70% 乙醇4. 检测方法 (1) 培养基性能确认使用的标准菌株1) Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538) (金黄色葡萄球菌 ; S. aur) 2) Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633) (枯草芽孢杆菌 ; B. sub)3) Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) (大肠埃希菌 ; E. coli )4) Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) (白色念珠菌 ; C. alb)5) Pse

3、udomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) (铜绿假单胞菌 ; P. aer)6) Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) (沙门氏菌 ; S. abo)(2) 性能确认1) 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 Tryptic soy agar (TSA) 配制 标准菌种中取 E. coli, B. sub, S. aur 和 C. alb 菌种 Ampoule ，开封后，各倒入平皿中。每株试验菌平行制备 2 个平皿。加灭菌的生理盐水 100，水化(Re-hydrate)检测菌种，30秒后，把事先灭菌的冷却后的温度约为 45 的

4、 TSA，分别倒入每个平皿约1520ml, 混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿，细菌在30 35培养5日，C. alb在20 25度培养5日。 为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在30 35，培养5天，做空白阴性对照实验。 培养后，琼脂平板，接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/22倍。标准菌种Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739)Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633)Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538)Candida albicans NCPF 3179 (

5、ATCC 10231)菌落照片培养前培养后 2) 沙氏葡萄糖琼脂培养基 Sabouraud dextrose agar (SDA) 配制 标准菌种中 C. alb 菌种Ampoule，开封后，倒入平皿中。 每株试验菌平行制备 2 个平皿。加灭菌的生理盐水 100，水化(Re-hydrate)检测菌种，30秒后，把事先灭菌的冷却后的温度约为 45 的 SDA，分别倒入每个平皿约1520ml, 混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿， 在20 25度培养5日。 为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在20 25，培养5天，做空白阴性对照实验。 培养后，琼脂平板，接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/22

6、倍。标准菌种Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231)菌落照片培养前培养后 3) 乳糖肉汤培养基 Lactose broth (LB) 标准菌株E. coli，加入10ml 乳糖肉汤培养基中，于培养30 35培养箱中培养18 24h。用接种环蘸取培养液涂布于EMBA平板上，在30 35培养18 24h。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。培养后，培养皿出现标准菌种的特征，视为阳性。标准菌种Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739)选择培养基伊红美蓝琼脂培养基 (EMBA)菌落特征金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌

7、落菌落照片培养前培养后 4) 麦康凯琼脂培养基 MacConkey agar (MCA) 标准菌株E. coli，加入10ml 乳糖肉汤培养基中，于培养30 35培养箱中培养18 24h。培养液涂抹于MCA平板上，在30 35培养18 24h，观察结果。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。培养后麦康凯琼脂培养基出现标准菌种的特征，判定为阳性。标准菌种Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739)选择培养基麦康凯琼脂培养基 (MCA)菌落特征周围有红色的沉降线带的红色的菌落菌落照片培养前培养后 5) 伊红美蓝琼脂培养基 Eosin methylene bl

8、ue agar (EMBA) 标准菌株E. coli，加在10ml乳糖肉汤培养基中，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于EMBA平板上，在30 35培养18 24h，观察结果。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。培养后伊红美蓝琼脂培养基出现标准菌种的特征，判定为阳性。标准菌种Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739)选择培养基伊红美蓝琼脂培养基 (EMBA)菌落特征金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌落菌落照片培养前培养后 6) 麦康凯肉汤琼脂培养基 MacConkey broth (MCB) 标准菌株E. coli放入10ml TSB中，于3

9、0 35培养18 24h。吸取0.1ml培养液加入10ml MCB培养基中，在42 44培养24 48h。把再菌培养液涂抹在麦康凯琼脂培养基平板，在3035培养1872小时。为确认检测条件，用胰酶大豆蛋白肉汤及麦康凯肉汤琼脂培养基做空白实验。培养后在平板出现标准菌种的特征，判定为阳性。标准菌种Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739)选择培养基麦康凯琼脂培养基 (MCA)菌落特征周围有红色的沉降线带的红褐色集落菌落照片培养前培养后 7) 2倍浓度的乳糖肉汤培养基 2X LB标准菌株E. coli接种在2倍浓度的乳糖部利用发酵管中，于35 37培养24 48h

10、。培养后2倍浓度的乳糖部利用发酵管发生气体，判定为阳性。标准菌种Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739)菌落照片培养前培养后8) 煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基 Brilliant green lactose bile broth (BGLB) 标准菌株E. coli接种在2倍的乳糖肉汤培养基，于35 37培养24 48h。吸取培养液在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基接种后，于35 37培养24 48h。 为确认检测条件，用2倍的乳糖肉汤培养基，做空白实验。培养后在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基发酵管发生气体，判定为阳性。标准菌种Escherichia coli NCT

11、C 12923 (ATCC 8739)菌落照片培养前培养后9) 亚硒酸盐-胱氨酸肉汤 Selenite cystine broth (SCB) 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液0.1ml喷注于亚硒酸盐-胱氨酸肉汤，30 35培养12 24h。再把菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板，于3035培养24 48h。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基及亚硒酸盐-胱氨酸肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017)选择培养基木糖赖氨酸脱氧胆盐

12、培养基 (XLDA)亚硫酸铋琼脂 (BSA)菌落特征红色，中心部显黑色或者不显黑色或者绿色菌落菌落照片培养前培养后培养前培养后10) 连四硫酸盐肉汤 Tetrathionate broth (TB) 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液0.1ml喷注于亚连四硫酸盐肉汤，30 35培养12 24h。 菌培养液再涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板，30 35培养24 48h。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基及连四硫酸盐肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性（菌落照片跟SCB相同）。 11) 木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 Xy

13、lose lysine deaoxycholate agar (XLDA) 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基平板，30 35培养24 48h。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017)培养基木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 (XLDA)菌落特征红色、中心部可能显示黑色点，或不显示菌落照片培养前培养后 12) 亚硫酸铋琼脂 Bithmuth sulfite agar (BSA) 标准菌株S. cho接

14、种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液涂抹于亚硫酸铋琼脂平板，30 35培养24 48h。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017)培养基亚硫酸铋琼脂 (BSA)菌落特征黑色或者绿色菌落菌落照片培养前培养后 13) 三糖铁琼脂 Triple sugar iron agar (TSIA) 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液用铂金线涂抹于三糖铁琼脂斜面平板的深部和斜面，于35 37培养18 24

15、h。为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017)培养基三糖铁琼脂 (TSIA)菌落特征深部显黄色，斜面部维持红色菌落照片培养前培养后 14) RVS沙門氏菌增殖培養基 Rappaport Vassiliadis Salmonella enrichment broth (RVSB) 标准菌株S. cho接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。0.1ml菌培养液喷注于RVSB，于30 35培养12 24h。菌培养液涂抹于XLDA平板后，于30 35培养18

16、48h。为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤及RV 沙門氏菌增殖培養基，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017)培养基木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 (XLDA)菌落特征红色，中心部显示黑点或不显示菌落照片培养前培养后 15) 胰蛋白胨大豆肉汤 Tryptic soy broth (TSB) 标准菌株S. aur及 P. aer ，各接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。S. aur培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂；P. aer培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂，于30 35培养24 48h。为确认检测

17、条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Staphylococcus aureus NCTC 10788(ATCC 6538)Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924(ATCC 9027)培养基甘露醇食盐琼脂 (MSA)溴棕三甲铵琼脂 (CTA)菌落特征黄色带包围的黄色菌落绿色荧光物质的菌落菌落照片培养前培养后培养前培养后 16) 溴棕三甲铵琼脂 Cetrimide agar (CTA) 标准菌株P. aer 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂，于30 35培养24 48h

18、。为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027)培养基溴棕三甲铵琼脂 (CTA)菌落特征绿色荧光物质的菌落菌落照片培养前培养后 17) 荧光素琼脂（FRA） Fluorescein agar (FRA) 标准菌株P. aer 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于荧光素琼脂（FRA），于30 35培养24 72h。为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Pseudomonas

19、aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027)培养基荧光素琼脂（FRA） 菌落特征黄色荧光物质菌落菌落照片培养前培养后 18) 假单胞琼脂(PYA) Pyocyanin agar (PYA) 标准菌株P. aer 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于假单胞琼脂(PYA)，于30 35培养24 72h。为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027)培养基假单胞琼脂 (PYA)菌落特征蓝色荧光物质菌落菌落照

20、片培养前培养后 19) 甘露醇食盐琼脂 Manitol salt agar (MSA) 标准菌株S. aur 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂，于30 35培养24 72h。为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Staphylococcus aureus NCTC 10788(ATCC 6538)培养基甘露醇食盐琼脂 (MSA)菌落特征黄色带包围的黄色菌落菌落照片培养前培养后20) Baird-Parker 琼脂 Baird-Parker agar (BPA) 标准菌株S. aur 接

21、种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于 Baird-Parker 琼脂，于30 35培养24 72h。为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌种Staphylococcus aureus NCTC 10788(ATCC 6538)培养基Baird-Parker 琼脂 (BPA)菌落特征透明带包围的有光泽的黑色菌落菌落照片培养前培养后21) 营养琼脂 Nutrient agar (NA) 标准菌株 B. sub、C. alb、E. coli、S. cho、S. aur、P. aer ，每种菌株，放入两个平皿。用1

22、00灭菌生理食盐水水化(Re-hydrate)。营养琼脂配好后，事先灭菌30秒后，冷却至45，倒入上述平皿中，每平皿大约倒入1520ml。摇匀后冷却待凝固，倒放，于30 35培养22 26h。为确认检测条件，用灭菌生理食盐水，做空白实验。培养后平板显示的菌落数应是接种菌数的1/2至2倍。标准菌种Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633)Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231)Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739)Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 60

23、17)Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538)Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027)菌落照片培养前培养后 22) 营养肉汁 Nutrient broth (NB) 标准菌株 B. sub、C. alb、E. coli、S. cho、S. aur、P. aer 接种在10ml的 营养肉汁，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于下表的平板，于30 35培养18 24h。为确认检测条件，用营养肉汁，做空白实验。培养后出现相关特征，判定为阳性。标准菌株培养基菌落特征菌落照片Bacillus subt

24、ilisNCTC 10400(ATCC 6633)胰蛋白胨大豆琼脂培养基 (TSA)微白色的稍微透明的菌落培养前培养后Candida albicansNCPF 3179(ATCC 10231)添加抗生物质的沙氏葡萄糖琼脂培养基 (SDA)微白色的菌落培养前培养后Escherichia coliNCTC 12923(ATCC 8739)伊红美蓝琼脂培养基 (EMBA)金属光泽菌落或在透明逛下显黑青色的菌落培养前培养后Salmonella abonyACM 5080(NCTC 6017)木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 (XLDA)红色，中心部呈现黑点或不呈现培养前培养后Salmonella abonyA

25、CM 5080(NCTC 6017)亚硫酸铋琼脂 (BSA)黑色或绿色菌落培养前培养后StaphylococcusaureusNCTC 10788(ATCC 6538)甘露醇食盐琼脂 (MSA)黄色带包围者的黄色菌落培养前培养后PseudomonasAeruginosaNCTC 12924(ATCC 9027溴棕三甲铵琼脂 (CTA)绿色荧光物质的菌落培养前培养后培养基中英文对照Tryptic soy agar (TSA) 胰蛋白胨大豆琼脂培养基Sabouraud dextrose agar (SDA) 沙氏葡萄糖琼脂培养基Lactose broth (LB) 乳糖肉汤培养基Eosin met

26、hylene blue agar (EMBA) 伊红美蓝琼脂培养基 MacConkey agar (MCA)麦康凯琼脂培养基MacConkey broth (MCB) 麦康凯肉汤琼脂培养基Tryptic Soy Broth(TSB)胰蛋白胨大豆肉汤Brilliant green lactose bile broth (BGLB) 煌绿乳糖胆盐肉汤Selenite cystine broth (SCB）亚硒酸盐-胱氨酸肉汤Xylose lysine deaoxycholate agar (XLDA) 木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基Bithmuth sulfite agar (BSA) 亚硫酸铋琼脂Te

27、trathionate broth (TB) 连四硫酸盐肉汤Triple sugar iron agar (TSIA)三糖铁琼脂Rappaport Vassiliadis Salmonella enrichment broth (RVSB)RV 沙門氏菌增殖培養基( RVS)Manitol salt agar (MSA）甘露醇食盐琼脂Cetrimide agar (CTA)溴棕三甲铵琼脂Fluorescein agar (FRA)荧光素琼脂（FRA）Pyocyanin agar (PYA)假单胞琼脂(PYA)Baird-Parker agar (BPA)Baird-Parker 琼脂Nutrient agar (NA)营养琼脂Nutrient broth (NB)营养肉汁