培养基性能确认参考文件.docx
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培养基性能确认参考文件
培养基性能确认方法
1.目的
培养基性能确认法是为确认培养基的性能而进行的检测，证明培养基的性能，从而可以信赖所检测出的实验结果。
2.范围:
配制的培养基，每次培养时，购买的培养基，每次购买时都要确认其性能。
3.设备及试剂
（1）Incubator–20~25℃,30~35℃
（2）平皿（内直径9cm）
（3）Loop-10㎕（catNo.251586;NUNC）
（4）Spreader（catNo.90050;SPL）
（5）Micropipet,灭菌Tip（1mL容量,0.1mL容量）
（6）Tube（10mL容量）
（7）铂金线
（8）70%乙醇
4.检测方法
（1）培养基性能确认使用的标准菌株
1）StaphylococcusaureusNCTC10788（ATCC6538）（金黄色葡萄球菌;S.aur）
2）BacillussubtilisNCTC10400（ATCC6633）（枯草芽孢杆菌;B.sub）
3）EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）（大肠埃希菌;E.coli）
4）CandidaalbicansNCPF3179（ATCC10231）（白色念珠菌;C.alb）
5）PseudomonasaeruginosaNCTC12924（ATCC9027）（铜绿假单胞菌;P.aer）
6）SalmonellaabonyACM5080（NCTC6017）（沙门氏菌;S.abo）
（2）性能确认
1）胰蛋白胨大豆琼脂培养基[Trypticsoyagar（TSA）]
①配制
标准菌种中取E.coli,B.sub,S.aur和C.alb菌种Ampoule，开封后，各倒入平皿中。
每株试验菌平行制备2个平皿。
加灭菌的生理盐水100㎕，水化（Re-hydrate）检测菌种，30秒后，把事先灭菌的冷却后的温度约为45℃的TSA，分别倒入每个平皿约15~20ml,混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿，细菌在30~35℃培养5日，C.alb在20~25℃度培养5日。
为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在30~35℃，培养5天，做空白阴性对照实验。
培养后，琼脂平板，接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/2~2倍。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
BacillussubtilisNCTC10400（ATCC6633）
StaphylococcusaureusNCTC10788（ATCC6538）
CandidaalbicansNCPF3179（ATCC10231）
菌落照片
培养前
培养后
2）沙氏葡萄糖琼脂培养基[Sabourauddextroseagar（SDA）]
①配制
标准菌种中C.alb菌种Ampoule，开封后，倒入平皿中。
每株试验菌平行制备2个平皿。
加灭菌的生理盐水100㎕，水化（Re-hydrate）检测菌种，30秒后，把事先灭菌的冷却后的温度约为45℃的SDA，分别倒入每个平皿约15~20ml,混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿，在20~25℃度培养5日。
为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在20~25℃，培养5天，做空白阴性对照实验。
培养后，琼脂平板，接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/2~2倍。
标准菌种
CandidaalbicansNCPF3179（ATCC10231）
菌落照片
培养前
培养后
3）乳糖肉汤培养基[Lactosebroth（LB）]
标准菌株E.coli，加入10ml乳糖肉汤培养基中，于培养30~35℃培养箱中培养18~24h。
用接种环蘸取培养液涂布于EMBA平板上，在30~35℃培养18~24h。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。
培养后，培养皿出现标准菌种的特征，视为阳性。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
选择培养基
伊红美蓝琼脂培养基（EMBA）
菌落特征
金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌落
菌落照片
培养前
培养后
4）麦康凯琼脂培养基[MacConkeyagar（MCA）]
标准菌株E.coli，加入10ml乳糖肉汤培养基中，于培养30~35℃培养箱中培养18~24h。
培养液涂抹于MCA平板上，在30~35℃培养18~24h，观察结果。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。
培养后麦康凯琼脂培养基出现标准菌种的特征，判定为阳性。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
选择培养基
麦康凯琼脂培养基（MCA）
菌落特征
周围有红色的沉降线带的红色的菌落
菌落照片
培养前
培养后
5）伊红美蓝琼脂培养基[Eosinmethyleneblueagar（EMBA）]
标准菌株E.coli，加在10ml乳糖肉汤培养基中，于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于EMBA平板上，在30~35℃培养18~24h，观察结果。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。
培养后伊红美蓝琼脂培养基出现标准菌种的特征，判定为阳性。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
选择培养基
伊红美蓝琼脂培养基（EMBA）
菌落特征
金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌落
菌落照片
培养前
培养后
6）麦康凯肉汤琼脂培养基[MacConkeybroth（MCB）]
标准菌株E.coli放入10mlTSB中，于30~35℃培养18~24h。
吸取0.1ml培养液加入10mlMCB培养基中，在42~44℃培养24~48h。
把再菌培养液涂抹在麦康凯琼脂培养基平板，在30~35℃培养18~72小时。
为确认检测条件，用胰酶大豆蛋白肉汤及麦康凯肉汤琼脂培养基做空白实验。
培养后在平板出现标准菌种的特征，判定为阳性。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
选择培养基
麦康凯琼脂培养基（MCA）
菌落特征
周围有红色的沉降线带的红褐色集落
菌落照片
培养前
培养后
7）2倍浓度的乳糖肉汤培养基[2XLB]
标准菌株E.coli接种在2倍浓度的乳糖部利用发酵管中，于35~37℃培养24~48h。
培养后2倍浓度的乳糖部利用发酵管发生气体，判定为阳性。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
菌落照片
培养前
培养后
8）煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基[Brilliantgreenlactosebilebroth（BGLB）]
标准菌株E.coli接种在2倍的乳糖肉汤培养基，于35~37℃培养24~48h。
吸取培养液在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基接种后，于35~37℃培养24~48h。
为确认检测条件，用2倍的乳糖肉汤培养基，做空白实验。
培养后在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基发酵管发生气体，判定为阳性。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
菌落照片
培养前
培养后
9）亚硒酸盐-胱氨酸肉汤[Selenitecystinebroth（SCB）]
标准菌株S.cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30~35℃培养18~24h。
菌培养液0.1ml喷注于亚硒酸盐-胱氨酸肉汤，30~35℃培养12~24h。
再把菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板，于30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基及亚硒酸盐-胱氨酸肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
SalmonellaabonyACM5080（NCTC6017）
选择培养基
木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基（XLDA）
亚硫酸铋琼脂（BSA）
菌落特征
红色，中心部显黑色或者不显
黑色或者绿色菌落
菌落照片
培养前
培养后
培养前
培养后
10）连四硫酸盐肉汤[Tetrathionatebroth（TB）]
标准菌株S.cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30~35℃培养18~24h。
菌培养液0.1ml喷注于亚连四硫酸盐肉汤，30~35℃培养12~24h。
菌培养液再涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板，30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基及连四硫酸盐肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性（菌落照片跟SCB相同）。
11）木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基[Xyloselysinedeaoxycholateagar（XLDA）]
标准菌株S.cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30~35℃培养18~24h。
菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基平板，30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
SalmonellaabonyACM5080（NCTC6017）
培养基
木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基（XLDA）
菌落特征
红色、中心部可能显示黑色点，或不显示
菌落照片
培养前
培养后
12）亚硫酸铋琼脂[Bithmuthsulfiteagar（BSA）]
标准菌株S.cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30~35℃培养18~24h。
菌培养液涂抹于亚硫酸铋琼脂平板，30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
SalmonellaabonyACM5080（NCTC6017）
培养基
亚硫酸铋琼脂（BSA）
菌落特征
黑色或者绿色菌落
菌落照片
培养前
培养后
13）三糖铁琼脂[Triplesugarironagar（TSIA）]
标准菌株S.cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30~35℃培养18~24h。
菌培养液用铂金线涂抹于三糖铁琼脂斜面平板的深部和斜面，于35~37℃培养18~24h。
为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
SalmonellaabonyACM5080（NCTC6017）
培养基
三糖铁琼脂（TSIA）
菌落特征
深部显黄色，斜面部维持红色
菌落照片
培养前
培养后
14）RVS沙門氏菌增殖培養基[RappaportVassiliadisSalmonellaenrichmentbroth（RVSB）]
标准菌株S.cho接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤，于30~35℃培养18~24h。
0.1ml菌培养液喷注于RVSB，于30~35℃培养12~24h。
菌培养液涂抹于XLDA平板后，于30~35℃培养18~48h。
为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤及RV沙門氏菌增殖培養基，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
SalmonellaabonyACM5080（NCTC6017）
培养基
木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基（XLDA）
菌落特征
红色，中心部显示黑点或不显示
菌落照片
培养前
培养后
15）胰蛋白胨大豆肉汤[Trypticsoybroth（TSB）]
标准菌株S.aur及P.aer，各接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤，于30~35℃培养18~24h。
S.aur培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂；P.aer培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂，于30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
StaphylococcusaureusNCTC10788
（ATCC6538）
PseudomonasaeruginosaNCTC12924
（ATCC9027）
培养基
甘露醇食盐琼脂（MSA）
溴棕三甲铵琼脂（CTA）
菌落特征
黄色带包围的黄色菌落
绿色荧光物质的菌落
菌落照片
培养前
培养后
培养前
培养后
16）溴棕三甲铵琼脂[Cetrimideagar（CTA）]
标准菌株P.aer接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤，于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂，于30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
PseudomonasaeruginosaNCTC12924（ATCC9027）
培养基
溴棕三甲铵琼脂（CTA）
菌落特征
绿色荧光物质的菌落
菌落照片
培养前
培养后
17）荧光素琼脂（FRA）[Fluoresceinagar（FRA）]
标准菌株P.aer接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤，于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于荧光素琼脂（FRA），于30~35℃培养24~72h。
为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
PseudomonasaeruginosaNCTC12924（ATCC9027）
培养基
荧光素琼脂（FRA）
菌落特征
黄色荧光物质菌落
菌落照片
培养前
培养后
18）假单胞琼脂（PYA）[Pyocyaninagar（PYA）]
标准菌株P.aer接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤，于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于假单胞琼脂（PYA），于30~35℃培养24~72h。
为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
PseudomonasaeruginosaNCTC12924（ATCC9027）
培养基
假单胞琼脂（PYA）
菌落特征
蓝色荧光物质菌落
菌落照片
培养前
培养后
19）甘露醇食盐琼脂[Manitolsaltagar（MSA）]
标准菌株S.aur接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤，于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂，于30~35℃培养24~72h。
为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
StaphylococcusaureusNCTC10788（ATCC6538）
培养基
甘露醇食盐琼脂（MSA）
菌落特征
黄色带包围的黄色菌落
菌落照片
培养前
培养后
20）Baird-Parker琼脂[Baird-Parkeragar（BPA）]
标准菌株S.aur接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤，于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于Baird-Parker琼脂，于30~35℃培养24~72h。
为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌种
StaphylococcusaureusNCTC10788（ATCC6538）
培养基
Baird-Parker琼脂（BPA）
菌落特征
透明带包围的有光泽的黑色菌落
菌落照片
培养前
培养后
21）营养琼脂[Nutrientagar（NA）]
标准菌株B.sub、C.alb、E.coli、S.cho、S.aur、P.aer，每种菌株，放入两个平皿。
用100㎕灭菌生理食盐水水化（Re-hydrate）。
营养琼脂配好后，事先灭菌30秒后，冷却至45℃，倒入上述平皿中，每平皿大约倒入15~20ml。
摇匀后冷却待凝固，倒放，于30~35℃培养22~26h。
为确认检测条件，用灭菌生理食盐水，做空白实验。
培养后平板显示的菌落数应是接种菌数的1/2至2倍。
标准菌种
BacillussubtilisNCTC10400（ATCC6633）
CandidaalbicansNCPF3179（ATCC10231）
EscherichiacoliNCTC12923（ATCC8739）
SalmonellaabonyACM5080（NCTC6017）
StaphylococcusaureusNCTC10788（ATCC6538）
PseudomonasaeruginosaNCTC12924（ATCC9027）
菌落照片
培养前
培养后
22）营养肉汁[Nutrientbroth（NB）]
标准菌株B.sub、C.alb、E.coli、S.cho、S.aur、P.aer接种在10ml的营养肉汁，于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于下表的平板，于30~35℃培养18~24h。
为确认检测条件，用营养肉汁，做空白实验。
培养后出现相关特征，判定为阳性。
标准菌株
培养基
菌落特征
菌落照片
Bacillussubtilis
NCTC10400
（ATCC6633）
胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）
微白色的稍微透明的菌落
培养前
培养后
Candidaalbicans
NCPF3179
（ATCC10231）
添加抗生物质的沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）
微白色的菌落
培养前
培养后
Escherichiacoli
NCTC12923
（ATCC8739）
伊红美蓝琼脂培养基（EMBA）
金属光泽菌落或在透明逛下显黑青色的菌落
培养前
培养后
Salmonellaabony
ACM5080
（NCTC6017）
木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基（XLDA）
红色，中心部呈现黑点或不呈现
培养前
培养后
Salmonellaabony
ACM5080
（NCTC6017）
亚硫酸铋琼脂（BSA）
黑色或绿色菌落
培养前
培养后
Staphylococcus
aureus
NCTC10788
（ATCC6538）
甘露醇食盐琼脂（MSA）
黄色带包围者的黄色菌落
培养前
培养后
Pseudomonas
Aeruginosa
NCTC12924
（ATCC9027
溴棕三甲铵琼脂（CTA）
绿色荧光物质的菌落
培养前
培养后
培养基中英文对照
Trypticsoyagar（TSA）
胰蛋白胨大豆琼脂培养基
Sabourauddextroseagar（SDA）
沙氏葡萄糖琼脂培养基
Lactosebroth（LB）
乳糖肉汤培养基
Eosinmethyleneblueagar（EMBA）
伊红美蓝琼脂培养基
MacConkeyagar（MCA）
麦康凯琼脂培养基
MacConkeybroth（MCB）
麦康凯肉汤琼脂培养基
TrypticSoyBroth（TSB）
胰蛋白胨大豆肉汤
Brilliantgreenlactosebilebroth（BGLB）
煌绿乳糖胆盐肉汤
Selenitecystinebroth（SCB）
亚硒酸盐-胱氨酸肉汤
Xyloselysinedeaoxycholateagar（XLDA）
木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基
Bithmuthsulfiteagar（BSA）
亚硫酸铋琼脂
Tetrathionatebroth（TB）
连四硫酸盐肉汤
Triplesugarironagar（TSIA）
三糖铁琼脂
RappaportVassiliadisSalmonellaenrichmentbroth（RVSB）
RV沙門氏菌增殖培養基（RVS）
Manitolsaltagar（MSA）
甘露醇食盐琼脂
Cetrimideagar（CTA）
溴棕三甲铵琼脂
Fluoresceinagar（FRA）
荧光素琼脂（FRA）
Pyocyaninagar（PYA）
假单胞琼脂（PYA）
Baird-Parkeragar（BPA）
Baird-Parker琼脂
Nutrientagar（NA）
营养琼脂
Nutrientbroth（NB）
营养肉汁
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