动物细胞传代培养实验报告.docx

1、动物细胞传代培养实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除动物细胞传代培养实验报告篇一：细胞传代培养实验报告细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。细胞培养可分为原代培养和传

2、代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。三、材料和试剂1、细胞：293细胞株2、试剂：0.25胰酶、1640培养基（含10小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯

3、等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。2、加入12ml0.25胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1L，滤器过滤除菌，4保存，用前可在37下回温。10xpbs配方：na2h

4、po4(14.2g)Kh2po4(2.32g)nacl(80g)Kcl(2.02g)(调至ph=7.4）五、实验结果传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2天左右就在瓶内形成单层，达到七八成满。这时需再次传代六、讨论与反思无菌操作中的注意事项在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。为此，在操作前要认真地洗手并用75乙醇消毒。操作前2030分钟起动超净台灭菌。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头

5、，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。多做，熟能生巧篇二：细胞传代实验报告篇一：细胞传代培养实验报告细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补

6、充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。三、材料和试剂1、细胞：293细胞株2、试剂：0.

7、25胰酶、1640培养基（含10小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。2、加入12ml0.25胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克

8、胰酶蛋白酶，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l，滤器过滤除菌，4保存，用前可在37下回温。10xpbs配方：na2hpo4(14.2g)kh2po4(2.32g)nacl(80g)kcl(2.02g)(调至ph=7.4）五、实验结果传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2天左右就在瓶内形成单层，达到七八成满。这时需再次传代六、讨论与反思无菌操作中的注意事项在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。为此，在操作前要认真地洗手并用75乙醇消毒。操作前2030分钟起动超净台灭菌。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台

9、内完成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。多做，熟能生巧篇二：细胞生物学实验传代培养一、【实验目的】1、了解动物细胞传代培养的基本原理。2、掌握动物细胞传代培养的基本操作，并对hela细胞进行传代培养。二、【实验原理】hela是heiettalacks的简称，heiettalacks是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各

10、研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。培养细胞的特性：贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。每代贴附生长细胞的生长过程：1、游离期细胞接种后在培养液中呈悬浮状态也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。10分钟一4小时2、贴壁期细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。3、血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原(:动物细胞传代培养实验报告)等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。4、潜伏期此时细胞有生

11、长话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为624小时。5、对数生长期细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。6、停止期（平台期）细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂细胞传代方法1、悬浮生长细胞传代离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l2一23，用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。2.悬浮生长细胞传代（hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。3、贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25的胰蛋白酶液。细胞培养用液的配制1、

12、d-hanks原液试剂配方氯化钠80.0g磷酸氢二钠（nahpo2ho）0.6g氯化钾4.0g磷酸二氢钾0.6g三蒸水1000ml2、d-hanks工作液试剂配方d-hanks原液100ml三蒸水896ml0.5%酚红液4ml3、消化液：胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无ca2+、mg2+的pbs缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25。用滤器过滤除菌。胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。用含血清培养液终止其对细胞的消化作用完全培养基的组成基础培

13、养基80一95血清5一20（一般加10）碳酸氢钠2.0g/l青、链霉素各100卑位毫升血清质量好坏是实验成败的关键。常用血清有胎牛血洁、新生牛血清、小牛血情、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。血清的灭活（消除补体活性）：56，30分钟血清的消毒：过滤除菌三、【实验材料】实验用具：离心管（2支），移液枪（每个台面一把），枪头，吸管（4根），培养皿（每组2个）实验药品：0.25胰酶，dhanks，1640培养基四、【实验操作】1.用75%乙醇擦手，取离心管一个，打开超净台（照明、风机），把离心管置于架子上。然后用75%乙醇擦

14、一下台面，点燃酒精灯。取尖吸管、吸量管各一支，套好吸球，放置在专用的架上。2从冰箱中取出0.25胰酶、dhanks、培养基。可以把胰酶和dhanks的瓶盖打开或者拧松。3.取待传代的细胞，用尖吸管弃去旧的培养基，加入dhanks。轻轻摇动后将hanks弃掉。4.用尖吸管吸取适量胰酶加入，加入的量以覆盖整个细胞培养面为宜，轻轻摇动。25分钟后迅速将消化液吸出。消化时间长短是实验成败的关键，宁可短消化，不能过消化。否则细胞会变死。在倒置显微镜下观察，当细胞质回缩，胞间间隙加大为消化适宜。5取培养基加入细胞，反复轻轻吹打培养皿壁，制备细胞细胞悬液。吹打的部位均匀，从上到小，从左到右，顺序进行吹打，保

15、证各个部位的培养细胞均能吹打到，成片的细胞已经分散成小的细胞团或者单细胞便停止吹打。吹打时用力不要过猛，尽量不要出现气泡，以免损伤细胞。6至所有细胞从培养皿底部脱落下来，然后吸取至离心管中。1000rpm离心5分钟。（无需准确计数时离心可略）7细胞离心毕，尖吸管弃去上清，吸取培养基适量，加入离心管，将细胞重悬、吹匀。（无需准确计数时离心可略）8吸量管吸取适量培养基1.5ml加入新的培养皿中。细胞悬液0.5ml加入新的培养皿中，培养密度为1105106/ml。显微镜下观察，摇匀，放入37度c02培养箱孵育。9待培养基（本身为红色），当ph值降低，培养基呈偏淡红色时，一般2天以后，将旧的培养基吸掉

16、，更换新鲜培养基继续培养。五、【实验现象】培养基：rm1640培养基10%胎牛血清六、【实验讨论】注意事项1传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。2每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。3如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的bss或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等篇三：实验二_细胞的传代培养定稿篇三：7-动物细胞传代培养报告成绩实验七动物

17、细胞传代培养学生姓名学号班级座位号：同组同学日期：年月日备注：【Introduction】（1）动物细胞培养的概念和要求：动物细胞培养，是从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。1动物细胞培养需要无菌操作，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染，不受其他有害因素影响，空气要保持清新和干燥。（2）原代培养和传代培养及其应用：接种组织块直接长出单层细胞或将组织分散成单个细胞再进行培养，在首次传代前的培养称为原代培养。原代培养在一定程度上能反映体内状态。在供体来源充分、生物学条件稳定的情况下，原代细胞是很好的

18、实验材料，如药物测试、研究细胞分化等。原代培养也是建立各种细胞系（株）必经的阶段。传代培养是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。在细胞一代中，细胞约能倍增36次。【materials&methods】实验用具：超净工作台、倒置显微镜、离心机、co2培养箱。实验器材：滤器；细胞培养瓶；细胞培养皿/板；培养液瓶-蓝盖瓶；移液器和吸头；离心管；eppendorf管；酒精灯或煤气灯；75%酒精棉。培养用液：完全培养基（合成培养基加入5%10%血清）；平衡盐溶液；消化液；抗生素液。实验操作：（1）戴好口罩，穿好鞋套、无菌白大衣戴手套，喷酒精。（2）从细胞瓶的反面加入胰酶2.5ml，轻洗再加0.5ml胰

19、酶置于培养箱中消化两分钟（3）加入23ml完全培养基终止吸管吹打力量适中，78次（4）低速离心1000转/分钟，5min，弃去上清液沉淀中加入1ml完全培养基，吹匀（5）吸取1/3体积悬液至原瓶中，加5ml完全培养基，继续培养。【Results】细胞传代的第二天去观察。（1）外观细胞培养瓶：培养液清亮，无混浊。贴壁面呈现白色点状。（2）倒置显微镜观察细胞：细胞分布均匀，密度为40%左右，大部分细胞贴壁铺展良好，类似梭状。少量细胞圆形悬浮，为有丝分裂期细胞。无细菌等污染。【Discussion】1.分析细胞生长优劣的影响因素，若结果不理想，是何原因？如何改进？。答：细胞培养最容易被细菌或者病毒感

20、染，因此实验操作时应当果断快速，不要犹豫。如果结果不理想，比如培养液浑浊，可能是已经被污染了。比如细胞生长过少，可能是吸吹过程中震动太大造成了细胞破裂；也可能是培养箱条件不适合生长；或者盖子太紧了没有气体交换。2.实验操作过程中应注意哪些问题？答：所有瓶口打开前、打开后、关闭前，都要在火焰上消毒。吸管口和枪头口从瓶口中间伸入，不要碰到瓶口；从液面浅表处吸，不要深入；若碰到，更换新的吸管或枪头。操作时，双手不要从瓶口、皿口上面经过，应绕过取物。这都是为了防止细胞被污染，所以要小心操作。另外，在吹吸细胞的时候不能太多次数，否则细胞遭受物理撞击容易破裂死亡。还有离心后要缓慢取出，尽量少晃动离心管，否

21、则应该重新离心。细胞培养时应该把瓶口拧松，留一些空隙让细胞呼吸。3对该实验有何意见或建议？答：鞋套太容易破了，希望可以换质量好一点的。还有后面组等待的时间太长了，可以先做实验再在等待的时候讲述一些概念性的东西。【Questions】1在细胞培养的过程中，若细胞培养皿/瓶中出现污染，该如何操作或挽救？如何判断污染源？答：细胞污染常见有三种：即真菌污染、细菌污染和支原体污染。细菌污染：可见培养液明显混浊，细菌产生的毒素等使细胞崩解、死亡，孔或皿底部常有沉淀物出现，用光学显微镜或倒置相差显微镜观察可见视野内有均匀的点状颗粒，瑞氏或革兰氏染色镜下检查即可确定。挽救方法有抗生素除菌法、抗生素联合巨噬细胞

22、吞噬法和裸鼠体内接种除菌法。其中裸鼠体内接种除菌法能彻底清除喉癌细胞系中的污染细菌,并能保持肿瘤细胞的来源特征和增生活性,是细胞系去除污染细菌最为理想的方法2。真菌污染：这在细胞培养中是比较常见的，尤其是在炎热、潮湿的季节。此种污染容易发现，肉眼观察大多呈白色或浅黄色小点漂浮于培养液表面，镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝，纵横交错于细胞之间。用氟康唑可以去除细胞培养中的真菌污染3。支原体污染：这是目前细胞培养中最常见、不易被察觉、干扰实验结果的一种污染。支原体在镜下呈暗色微小颗粒，并有类似布朗运动的表现，多位于细胞表面和细胞之间。2若给你一株从你未培养过的细胞株，你应该怎样做才能将该细胞株顺利传

23、代培养？答：准备细胞培养室和各种实验器材，然后首先观察该细胞株是贴壁生长还是悬浮生长，以便于制备相应的培养基以及培养方法。要多设计几个对照组来找到最佳培养方案，接着按照一般细传代的步骤操作。整个实验过程中要保持无菌状态，不能有污染。【References】1姜彬.细胞培养技术简介及避免污染的策略J.生物学通报,20XX,03:54-55.2王鸿,张伟,孟娜.细胞培养中珍贵贴壁细胞污染挽救方法的评价J.首都医科大学学报,20XX,01:129-134.3王恩军,靳祎,王亮.氟康唑去除细胞培养中的真菌污染J.河北职工医学院学报,20XX,04:7-8.实验七动物细胞传代培养学生姓名学号班级座位号：同组同学日期：年月日备注：【Real-timeRecord】