为菌种来源.docx

1、为菌种来源Exp.1 Cultural transfer techniques結果：表一、S. aureus broth culture 為菌種來源Growth （+）or （-）Contamination （+）or （-）Broth to broth transferBroth to slant transferBroth to agar deep transfer表二、S. aureus slant culture 為菌種來源Growth （+）or （-）Contamination （+）or （-）Slant to broth transferSlant to slant trans

2、ferSlant to agar deep transfer回答課本問題：1、2、3Exp. 2 Techniques for isolation of pure cultures結果：Part A：檢視分離菌的分布及菌落特徵Streak-plate techniqueCultureS. aureus and E.coli混合菌液平板上S. aureusDrawing of colonies on agar plateColony description: Form Elevation Pigmentation SizeIsolate 1 Isolate 2 Isolate Part B：繪製

3、瓊脂斜面上細菌之分布及生長菌種：S. aureus顏色：回答課本問題：1、2Exp.3 Cultural characteristics of microorganisms結果：Nutrient agar platesCultureMicrococcus luteus Mycobacterium smegmatisBacillus cereusEscherichia coliKlebsiella pneumoniaeColony description: Size Elevation Form MarginPigmentation Exp. 8 Preparation of bacterial

4、 smears回答課本問題：1、2、3Exp.9 Simple staining1. 畫出代表視野中之微生物形態。2. 描述各菌之形狀（桿菌、球菌、螺旋體）及其排列（鏈狀、成簇、成對）。Methylene blueCrystal violetCarbol fuchsinDrawing of a representative fieldOrganism Cell morphology Shape ArrangementCell color 回答課本問題：1、2、3Exp.10 Negative staining繪製一鏡檢視野菌名：形狀：排列：回答課本問題：1、2、3Exp. 11 Gram st

5、ain1. 繪製一代表視野。2. 描述各菌形態、排列及呈色，並根據顏色將菌分為革蘭氏陽性菌或陰性菌。E. coliB. cereusS. aureusMixtureDrawing of a representative fieldCell morphology Shape ArrangementCell colorGram reaction 回答課本問題：2、3、4Exp. 12 Acid-fast staining1. 繪製一代表視野。2. 描述各菌形態、排列及呈色，並根據顏色將菌分為抗酸性菌或非抗酸性菌。Mycobacterium sp.S. aureusMixtureDrawing of

6、 a representative fieldCell morphology Shape ArrangementCell colorAcid-fast reaction 回答課本問題：1、2、3Exp. 13 Differential staining for visualization of bacterial cell structuresPart A: Spore staining procedure1. 畫出各菌之代表視野。2. 描繪內胞子於生長型細胞中之位置，如中央、近終端或終端等。3. 表明內胞子及生長型細胞之顏色。B. cereusB. subtilisDrawing of a

7、representative fieldColor of sporesColor of vegetative cellLocation of endospore Part B: Capsule staining procedure1. 畫出菌之代表視野。2. 指出莢膜及菌體之顏色。Klebsiella pneumoniaeDrawing of a representative fieldColor of capsuleColor of cell回答課本問題：1、2、3、4、5Exp. 15 Use of differential and selective media1. 檢視所有平板觀察下列

8、各項目並記錄於表格中：a. 接種線之生長量：以（-）表示未生長，（1+）表示少量生長，（2+）表示中等至大量生長。b. 生長之外觀：記錄菌落之顏色、透明度。c. 生長周圍培養基之改變：培養基顏色變化及溶血性。MediumBacterial speciesAmount of growthAppearance of growthAppearance of mediumTSA（Tryptic soy agar）E. coliE. aerogenesS. typhimuriumB. cereusS. aureusS. epidermidisS. pyogenesE. faecalisMSA（Manni

9、tol salts agar）S. aureusS. epidermidisS. pyogenesE. coliBA（Blood agar）S. pyogenesE. faecalisB. cereusE. coliMCA（MacConkey agar）E. coliE. aerogenesS. typhimuriumS. aureusEMB（Eosin-methylene blue agar）E. coliE. aerogenesS. typhimuriumS. aureusPEA（Phenylethyl alcohol agar）S. aureusS. epidermidisS. pyog

10、enesE. coli2. 指出下列培養基具有的選擇性和鑑別性功能：a. Mannitol salt agarb. Blood agarc. MacConkey agard. Eosin-methylene blue agar（Levine）e. Phenylethyl alcohol agar 回答課本問題：1Exp. 44 Chemical agents of controls：Chemotherapeutic agentsPart A：Kirby-Bauer antimicrobial susceptibility test procedure1. 觀察所有平板上各抗生素濾片周圍是否出現

11、抑制環。2. 以尺量取各抑制環之直徑，以mm為單位，並將結果記錄於表格中。3. 將結果與表43.2比較，判斷各受試菌對化學治療劑之感受性，以抗性（R）居間（I）或感受性（S）表示，並將結果記錄於下表中。Chemotherapeutic agentGram-negativeGram-positiveE. coliS. aureusZone sizeSusceptibilityZone sizeSusceptibilityPenicillin StreptomycinTetracyclineChloramphenicolGentamicinVancomycin4. 指出化學治療劑之有效作用微生物為

12、革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。Chemotherapeutic agentType(s) of microorganismsPenicillin StreptomycinTetracyclineChloramphenicolGentamicinVancomycinPart B：Synergistic effect 1. 檢視所有平板，決定所表現之抑制環形式。抑制環明顯分離者表示加成作用（additive effect），抑制環融合者表示協同作用（synergism）。將觀察結果記錄於表中。CulturesAppearance of zone of inhibitionSynergistic or

13、 additive effectE. coli： trimethoprim and sulfisoxazole trimethoprim and tetracycline S. aureus： trimethoprim and sulfisoxazole trimethoprim and tetracycline 回答課本問題：1Exp. 16 Physical Factors：Temperature1. 檢視所有培養基，觀察細菌生長狀態。以（1）表示少量生長，以（2）表示中度生長，以（3）表示大量生長，以（）表示沒有生長。2. 觀察S. marcescens是否有橘色至深紅色色素產生，有色素

14、生成紀錄為（），沒有色素形成紀錄為（）。3. 依觀察所見決定各菌之溫度分類。TemperatureS. marcescensP. aeruginosaE. coliB. cereusPigmentGrowthGrowthGrowthGrowth4（refrig.）20（room temp.）37（body temp.）60Classification回答課本問題：2、3、4Exp. 17 Physical Factors：pH of the extracellular environment1. 觀察各菌在不同pH值之生長量（混濁度），以（1+）表示少量生長，（2+）表示中度生長，（3+）表示

15、大量生長，（）表示沒有生長。2. 判斷各菌生長之pH值範圍及生長最適pH值。SpeciespH3pH5pH7pH9pH rangeOptimum pHS. marcescensP. aeruginosaE. coliB. cereus回答課本問題：1、2、3Exp. 18 Physical Factors：Atmospheric oxygen requirements1. 觀察各菌於試管中之生長分布情形。2. 依觀察所見判斷各菌之需氧狀況。SpeciesDistribution of Growth（可繪圖輔助）Classification according to Oxygen Require

16、mentS. marcescensP. aeruginosaE. coliB. cereus回答課本問題：1、2、3、4Exp. 20 Serial dilution-agar plate procedure to quantitate viable cells1. 觀察並計算所有平板上之菌落數，若平板上菌落數超過300視為過多無法計算，記錄為too numerous to count（TNTC），若菌落數少於30視為過少，記錄為too few to count（TFTC），僅計算30至300之間的菌落數，凡表面或表面下之菌落均需計算在內。2. 原培養液中每毫升之細菌數為菌落數乘以稀釋倍數（n

17、umber of cells per ml =number of colonies dilution factor）。例如：a. 平板上菌落數=50稀釋倍數=1：1106加入平板之菌液=1mL50106 = 5107 CFUs/mL（CFU：colony-forming units）b. 平板上菌落數=50稀釋倍數=1：1105加入平板之菌液=0.1mL（50105）cells/0.1 mL = 5107 CFUs/mL3. 將觀察所見及檢體中每毫升計算所得菌數記錄於表格中。4. 因各稀釋度之平板計數均同時進行三組，故檢體中每毫升之菌數應取平均值。Tube dilutionml of dilu

18、tion platedFinal dilution on plateNumber of coloniesBacterial count per ml of sample （CFU/ml）10-50.110610-50.110610-50.110610-60.110710-60.110710-60.110710-70.110810-70.110810-70.1108Average count per ml of sample （CFU/ml）=回答課本問題：1、2、3、4、5、6、7Exp. 51 Standard qualitative analysis of waterPart A：Pres

19、umptive test1. 於培養24及48小時後，檢視所有試管，並依下列說明將結果記錄於表中。a. Positive：24小時內試管出現10或以上之氣體。b. Doubful：48小時後試管出現氣體。c. Negative：48小時後試管中無氣體出現。2. 依表50.1決定並計算MPN值（註1）。斜坡旁水溝GasReadingMPNRange 95probability稀釋倍數10-310-410-5試管123451234512345結果註1：大腸桿菌群最大可能數（MPN/100ml）查表所得之MPN/最具意義之三種稀釋度之中間水樣稀釋度。例如：依上表結果得Reading值為5-3-1，經

20、查表MPN為110，則大腸桿菌群最大可能數（MPN/100ml）110/10-41.1106（cells/100ml）。結果：大腸桿菌群最大可能數（MPN/100ml）Part B：Confirmed test1. 檢視EMB平板，觀察是否有大腸桿菌菌落存在，並將結果記錄於表中。2. 依所得結果決定水檢體是否可飲用並記錄之。如有大腸桿菌存在，表陽性肯定試驗，該水不可飲用，如無大腸桿菌存在，則為陰性試驗，表該水未受糞便污染可飲用。水樣Coliforms（EMB plate）Potable or Nonpotable斜坡旁水溝Part C：Completed test1. 檢視乳糖醱酵培養是否有氣

21、體產生。2. 取金屬綠光澤菌落進行革蘭氏染色，鏡檢觀察有無革蘭氏陰性短桿菌存在，此乃表示大腸桿菌，故水不可飲用。將革蘭氏反應及細菌形態記錄於表中。水樣Lactose brothA/G（+）or（-）Gram stainPotablilityReaction/MorphologyPotableNonpotable斜坡旁水溝回答課本問題：1、2Exp. 52 Quantitative analysis of water：Membrane filter method1. 計數濾膜片上之菌落數，並將結果記錄於下表中。水樣來源總菌數（CFUs/10ml）總菌數（CFUs/100ml）大腸桿菌群菌數（CF

22、Us/100ml） 回答課本問題：1、2Exp. 39 Cultivation and enumeration of bacteriophages1. 觀察所有平板上菌苔中之溶菌斑形成單位（PFU：plaque-forming units）。2. 計數PFUs數目介於30-300的平板。3. 根據PFU計數結果，計算原來的噬菌體保存液中每毫升含有之噬菌體數目。4. 將結果記錄於表格中。Phage dilutionNumber of PFUscalculation：PFUsdilution factorPFUs/ml of stock phage cultureAverage count per

23、 ml of stock phage culture（PFUs/mL） 回答課本問題：1、2、3、4、5、6Exp. 48 Microbiological analysis of food products：Bacterial count1. 計數各平板上之菌落數目，計數時選擇菌落數介於30-300之平板，如菌落數少於30，列為太少不計（TFTC：too few too count），如大於300，列為太多不計（TNTC：too numerous to count）。2. 將菌落數乘以稀釋倍數，計算食物檢體中每毫升之菌數。3. 將平板上之菌落數及食物檢體中每毫升之含菌數記錄於下表中。食物檢體名

24、稱dilutionml of dilution platedDilution factorNumber of colonies per platesNumber of organisms per ml10-10.110210-20.110310-30.110410-40.11054. 檢視eosin-methylene blue agar（EMB）平板培養，觀察表面是否有金屬綠光澤之菌落，此乃大腸桿菌（E. coli），以（）或（）表示有無大腸桿菌存在食物檢體中及此食物是否受糞便污染。食物檢體名稱E. coli （）or（）Fecal contamination（）or（）回答課本問題：1、2