为菌种来源.docx

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为菌种来源

Exp.1Culturaltransfertechniques

結果：

表一、S.aureusbrothculture為菌種來源

Growth（+）or（-）

Contamination（+）or（-）

Brothtobrothtransfer

Brothtoslanttransfer

Brothtoagardeeptransfer

表二、S.aureusslantculture為菌種來源

Growth（+）or（-）

Contamination（+）or（-）

Slanttobrothtransfer

Slanttoslanttransfer

Slanttoagardeeptransfer

回答課本問題：

1、2、3

Exp.2Techniquesforisolationofpurecultures

結果：

PartA：

檢視分離菌的分布及菌落特徵

Streak-platetechnique

Culture

S.aureusandE.coli混合菌液

平板上S.aureus

Drawingofcoloniesonagarplate

Colonydescription:

Form

Elevation

Pigmentation

Size

Isolate1Isolate2

Isolate

PartB：

繪製瓊脂斜面上細菌之分布及生長

菌種：

S.aureus

顏色：

回答課本問題：

1、2

Exp.3Culturalcharacteristicsofmicroorganisms

結果：

Nutrientagarplates

Culture

Micrococcusluteus

Mycobacteriumsmegmatis

Bacilluscereus

Escherichiacoli

Klebsiellapneumoniae

Colonydescription:

Size

Elevation

Form

Margin

Pigmentation

Exp.8Preparationofbacterialsmears

回答課本問題：

1、2、3

Exp.9Simplestaining

1.畫出代表視野中之微生物形態。

2.描述各菌之形狀（桿菌、球菌、螺旋體）及其排列（鏈狀、成簇、成對）。

Methyleneblue

Crystalviolet

Carbolfuchsin

Drawingofarepresentativefield

Organism

Cellmorphology

Shape

Arrangement

Cellcolor

回答課本問題：

1、2、3

Exp.10Negativestaining

繪製一鏡檢視野

菌名：

形狀：

排列：

回答課本問題：

1、2、3

Exp.11Gramstain

1.繪製一代表視野。

2.描述各菌形態、排列及呈色，並根據顏色將菌分為革蘭氏陽性菌或陰性菌。

E.coli

B.cereus

S.aureus

Mixture

Drawingofarepresentativefield

Cellmorphology

Shape

Arrangement

Cellcolor

Gramreaction

回答課本問題：

2、3、4

Exp.12Acid-faststaining

1.繪製一代表視野。

2.描述各菌形態、排列及呈色，並根據顏色將菌分為抗酸性菌或非抗酸性菌。

Mycobacteriumsp.

S.aureus

Mixture

Drawingofarepresentativefield

Cellmorphology

Shape

Arrangement

Cellcolor

Acid-fastreaction

＊回答課本問題：

1、2、3

Exp.13Differentialstainingforvisualizationofbacterialcellstructures

PartA:

Sporestainingprocedure

1.畫出各菌之代表視野。

2.描繪內胞子於生長型細胞中之位置，如中央、近終端或終端等。

3.表明內胞子及生長型細胞之顏色。

B.cereus

B.subtilis

Drawingofarepresentativefield

Colorofspores

Colorofvegetativecell

Locationofendospore

PartB:

Capsulestainingprocedure

1.畫出菌之代表視野。

2.指出莢膜及菌體之顏色。

Klebsiellapneumoniae

Drawingofarepresentativefield

Colorofcapsule

Colorofcell

＊回答課本問題：

1、2、3、4、5

Exp.15Useofdifferentialandselectivemedia

1.檢視所有平板觀察下列各項目並記錄於表格中：

a.接種線之生長量：

以（-）表示未生長，（1+）表示少量生長，（2+）表示中等至大量生長。

b.生長之外觀：

記錄菌落之顏色、透明度。

c.生長周圍培養基之改變：

培養基顏色變化及溶血性。

Medium

Bacterialspecies

Amountofgrowth

Appearanceofgrowth

Appearanceofmedium

TSA

（Trypticsoyagar）

E.coli

E.aerogenes

S.typhimurium

B.cereus

S.aureus

S.epidermidis

S.pyogenes

E.faecalis

MSA

（Mannitolsaltsagar）

S.aureus

S.epidermidis

S.pyogenes

E.coli

BA

（Bloodagar）

S.pyogenes

E.faecalis

B.cereus

E.coli

MCA

（MacConkeyagar）

E.coli

E.aerogenes

S.typhimurium

S.aureus

EMB

（Eosin-methyleneblueagar）

E.coli

E.aerogenes

S.typhimurium

S.aureus

PEA

（Phenylethylalcoholagar）

S.aureus

S.epidermidis

S.pyogenes

E.coli

2.指出下列培養基具有的選擇性和鑑別性功能：

a.Mannitolsaltagar

b.Bloodagar

c.MacConkeyagar

d.Eosin-methyleneblueagar（Levine）

e.Phenylethylalcoholagar

＊回答課本問題：

1

Exp.44Chemicalagentsofcontrols：

Chemotherapeuticagents

PartA：

Kirby-Bauerantimicrobialsusceptibilitytestprocedure

1.觀察所有平板上各抗生素濾片周圍是否出現抑制環。

2.以尺量取各抑制環之直徑，以mm為單位，並將結果記錄於表格中。

3.將結果與表43.2比較，判斷各受試菌對化學治療劑之感受性，以抗性（R）居間（I）或感受性（S）表示，並將結果記錄於下表中。

Chemotherapeuticagent

Gram-negative

Gram-positive

E.coli

S.aureus

Zonesize

Susceptibility

Zonesize

Susceptibility

Penicillin

Streptomycin

Tetracycline

Chloramphenicol

Gentamicin

Vancomycin

4.指出化學治療劑之有效作用微生物為革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。

Chemotherapeuticagent

Type（s）ofmicroorganisms

Penicillin

Streptomycin

Tetracycline

Chloramphenicol

Gentamicin

Vancomycin

PartB：

Synergisticeffect

1.檢視所有平板，決定所表現之抑制環形式。

抑制環明顯分離者表示加成作用（additiveeffect），抑制環融合者表示協同作用（synergism）。

將觀察結果記錄於表中。

Cultures

Appearanceofzoneofinhibition

Synergisticoradditiveeffect

E.coli：

trimethoprimandsulfisoxazole

trimethoprimandtetracycline

S.aureus：

trimethoprimandsulfisoxazole

trimethoprimandtetracycline

＊回答課本問題：

1

Exp.16PhysicalFactors：

Temperature

1.檢視所有培養基，觀察細菌生長狀態。

以（1＋）表示少量生長，以（2＋）表示中度生長，以（3＋）表示大量生長，以（－）表示沒有生長。

2.觀察S.marcescens是否有橘色至深紅色色素產生，有色素生成紀錄為（＋），沒有色素形成紀錄為（－）。

3.依觀察所見決定各菌之溫度分類。

Temperature

S.marcescens

P.aeruginosa

E.coli

B.cereus

Pigment

Growth

Growth

Growth

Growth

4℃（refrig.）

20℃（roomtemp.）

37℃（bodytemp.）

60℃

Classification

回答課本問題：

2、3、4

Exp.17PhysicalFactors：

pHoftheextracellularenvironment

1.觀察各菌在不同pH值之生長量（混濁度），以（1+）表示少量生長，（2+）表示中度生長，（3+）表示大量生長，（－）表示沒有生長。

2.判斷各菌生長之pH值範圍及生長最適pH值。

Species

pH3

pH5

pH7

pH9

pHrange

OptimumpH

S.marcescens

P.aeruginosa

E.coli

B.cereus

回答課本問題：

1、2、3

Exp.18PhysicalFactors：

Atmosphericoxygenrequirements

1.觀察各菌於試管中之生長分布情形。

2.依觀察所見判斷各菌之需氧狀況。

Species

DistributionofGrowth

（可繪圖輔助）

ClassificationaccordingtoOxygenRequirement

S.marcescens

P.aeruginosa

E.coli

B.cereus

回答課本問題：

1、2、3、4

Exp.20Serialdilution-agarplateproceduretoquantitateviablecells

1.觀察並計算所有平板上之菌落數，若平板上菌落數超過300視為過多無法計算，記錄為toonumeroustocount（TNTC），若菌落數少於30視為過少，記錄為toofewtocount（TFTC），僅計算30至300之間的菌落數，凡表面或表面下之菌落均需計算在內。

2.原培養液中每毫升之細菌數為菌落數乘以稀釋倍數（numberofcellsperml=numberofcolonies×dilutionfactor）。

例如：

a.平板上菌落數=50

稀釋倍數=1：

1×106

加入平板之菌液=1mL

50×106=5×107CFUs/mL（CFU：

colony-formingunits）

b.平板上菌落數=50

稀釋倍數=1：

1×105

加入平板之菌液=0.1mL

（50×105）cells/0.1mL=5×107CFUs/mL

3.將觀察所見及檢體中每毫升計算所得菌數記錄於表格中。

4.因各稀釋度之平板計數均同時進行三組，故檢體中每毫升之菌數應取平均值。

Tubedilution

mlofdilutionplated

Finaldilutiononplate

Numberofcolonies

Bacterialcountpermlofsample（CFU/ml）

10-5

0.1

106

10-5

0.1

106

10-5

0.1

106

10-6

0.1

107

10-6

0.1

107

10-6

0.1

107

10-7

0.1

108

10-7

0.1

108

10-7

0.1

108

Averagecountpermlofsample（CFU/ml）=

＊回答課本問題：

1、2、3、4、5、6、7

Exp.51Standardqualitativeanalysisofwater

PartA：

Presumptivetest

1.於培養24及48小時後，檢視所有試管，並依下列說明將結果記錄於表中。

a.Positive：

24小時內試管出現10﹪或以上之氣體。

b.Doubful：

48小時後試管出現氣體。

c.Negative：

48小時後試管中無氣體出現。

2.依表50.1決定並計算MPN值（註1）。

斜坡旁水溝

Gas

Reading

MPN

Range95﹪

probability

稀釋倍數

10-3

10-4

10-5

試管

1

2

3

4

5

1

2

3

4

5

1

2

3

4

5

結果

註1：

大腸桿菌群最大可能數（MPN/100ml）＝查表所得之MPN/最具意義之三種稀釋度之中間水樣稀釋度。

例如：

依上表結果得Reading值為5-3-1，經查表MPN為110，則大腸桿菌群最大可能數（MPN/100ml）＝110/10-4＝1.1×106（cells/100ml）。

結果：

大腸桿菌群最大可能數（MPN/100ml）＝

PartB：

Confirmedtest

1.檢視EMB平板，觀察是否有大腸桿菌菌落存在，並將結果記錄於表中。

2.依所得結果決定水檢體是否可飲用並記錄之。

如有大腸桿菌存在，表陽性肯定試驗，該水不可飲用，如無大腸桿菌存在，則為陰性試驗，表該水未受糞便污染可飲用。

水樣

Coliforms（EMBplate）

PotableorNonpotable

斜坡旁水溝

PartC：

Completedtest

1.檢視乳糖醱酵培養是否有氣體產生。

2.取金屬綠光澤菌落進行革蘭氏染色，鏡檢觀察有無革蘭氏陰性短桿菌存在，此乃表示大腸桿菌，故水不可飲用。

將革蘭氏反應及細菌形態記錄於表中。

水樣

Lactosebroth

A/G（+）or（-）

Gramstain

Potablility

Reaction/Morphology

Potable

Nonpotable

斜坡旁水溝

＊回答課本問題：

1、2

Exp.52Quantitativeanalysisofwater：

Membranefiltermethod

1.計數濾膜片上之菌落數，並將結果記錄於下表中。

水樣來源

總菌數

（CFUs/10ml）

總菌數

（CFUs/100ml）

大腸桿菌群菌數（CFUs/100ml）

＊回答課本問題：

1、2

Exp.39Cultivationandenumerationofbacteriophages

1.觀察所有平板上菌苔中之溶菌斑形成單位（PFU：

plaque-formingunits）。

2.計數PFUs數目介於30-300的平板。

3.根據PFU計數結果，計算原來的噬菌體保存液中每毫升含有之噬菌體數目。

4.將結果記錄於表格中。

Phagedilution

NumberofPFUs

calculation：

PFUs×dilutionfactor

PFUs/mlofstockphageculture

Averagecountpermlofstockphageculture（PFUs/mL）＝

＊回答課本問題：

1、2、3、4、5、6

Exp.48Microbiologicalanalysisoffoodproducts：

Bacterialcount

1.計數各平板上之菌落數目，計數時選擇菌落數介於30-300之平板，如菌落數少於30，列為太少不計（TFTC：

toofewtoocount），如大於300，列為太多不計（TNTC：

toonumeroustocount）。

2.將菌落數乘以稀釋倍數，計算食物檢體中每毫升之菌數。

3.將平板上之菌落數及食物檢體中每毫升之含菌數記錄於下表中。

食物檢體

名稱

dilution

mlofdilutionplated

Dilutionfactor

Numberofcoloniesperplates

Numberoforganismsperml

10-1

0.1

102

10-2

0.1

103

10-3

0.1

104

10-4

0.1

105

4.檢視eosin-methyleneblueagar（EMB）平板培養，觀察表面是否有金屬綠光澤之菌落，此乃大腸桿菌（E.coli），以（＋）或（－）表示有無大腸桿菌存在食物檢體中及此食物是否受糞便污染。

食物檢體名稱

E.coli（＋）or（－）

Fecalcontamination（＋）or（－）

＊回答課本問題：

1、2