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1、最新推荐基因分离步骤范文模板 14页本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！= 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ = 基因分离步骤篇一：试述基因分离的主要方法和原理2 试述基因分离的主要方法和原理。碱裂解法提取质粒DNA，在碱性条件下线状DNA发生变性，质粒DNA维持环状；在高盐条件下复性处理，变性的染色体DNA会形成沉淀，从而将质粒DNA与染色体DNA分开。3 试设计一个方案，将拟南芥生长素反应因子9转入油菜中进行异源表达（拟南芥基因组测序已完成）。1设计引物，因为拟南芥基因组测序已完成，所以可以在基因序列库中搜索生长素反应因子9

2、序列，得到序列信息，根据序列设计PCR引物，根据载体的MCS在上下游引物5-端加上两种不同限制性核酸内切酶的识别和切割序列，要求这两种酶不在基因内部产生切割；2提取拟南芥mRNA，3PCR扩增，利用上述引物进行RT-PCR，扩增得所需基因序列DNA；4PCR产品和检验，扩增得基因DNA与测序载体连接，转化大肠杆菌；利用载体上的抗性基因筛选重组子；扩大培养后提取质粒进行测序，以确定基因是否突变；5准备上游质粒、载体进行双酶切若没突变，对质粒进行和Ti载体进行双酶切，然后进行定向连接，转化大肠杆菌，利用Ti质粒载体的抗性基因和分子标记筛选重组子；提取质粒，利用冻融法或电击法转化农杆菌中；利用分子标

3、记筛选得到重组农杆菌；利用叶盘转化法，将目的基因转入油菜中，经抗性筛选后再生植株；6表达，利用抗性基因筛选重组植株，用PCR法鉴定重组是否成功，用Southern印迹法筛选单基因植株；杂交筛选纯合子植株；用Northern印迹法鉴定目的基因mRNA是否转录，用Western印迹法鉴定目的蛋白； 观察转基因植物的表型。4 现分离得到一个青霉菌的单基因的抗高温突变体，试设计一个方案克隆和分离该基因（青霉菌基因组测序尚未进行）。设计题1） 设计一个实验程序将拟南芥光敏色素基因A转入番茄表达：答：因为拟南芥基因组测序已完成，所以可以在基因序列库如GenBank中搜索光敏色素序列，得到序列信息；根据序列

4、设计PCR引物，根据载体（植物中用的如PBI）的MCS在上下游引物5-端加上两种不同限制性核酸内切酶的识别和切割序列，要求这两种酶不在基因内部产生切割； 提取拟南芥mRNA，利用上述引物进行RT-PCR，扩增得所需基因序列DNA； 扩增得基因DNA与测序载体连接，转化大肠杆菌；利用载体上的抗性基因筛选重组子；扩大培养后提取质粒进行测序，以确定基因是否突变；若没突变，对质粒和Ti载体分别进行双酶切，然后进行定向连接，转化大肠杆菌，利用Ti质粒载体的抗性基因和分子标记筛选重组子；提取质粒，利用冻融法或电击法转化农杆菌中；利用分子标记筛选得到重组农杆菌；利用叶盘转化法，将目的基因转入番茄中，经抗性筛

5、选后再生植株；利用抗性基因筛选重组植株，用PCR法鉴定重组是否成功，用Southern印迹法筛选单基因植株；杂交筛选纯合子植株；用Northern印迹法鉴定目的基因mRNA是否转录，用Western印迹法鉴定目的蛋白； 观察转基因植物的表型。篇二：基因组DNA提取步骤基因组DNA提取步骤1. 从无水乙醇中取出少许组织（约50mg）加入干净灭菌的EP管中，剪碎；2. 加入400ul 1的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K，充分浸润，入55摇床（100转/分），期间振荡助溶至澄清（5-6h）；3. 取出消化液，加入6mol/L的NaCl300ul，氯仿200ul，轻柔正反颠倒，使其充分乳化

6、，413000转/分离心30min；4. 取出上清（约400ul），加入等体积氯仿抽提一次，轻柔颠倒后，413000转/分离心10min；5. 上清加入5l RNaseA(10g/l), 37 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。6. 取上清加入等体积异丙醇，轻柔混匀后-20沉淀10min；7. 413000转/分离心15min，弃上清；8. 用75乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心2min），弃上清；9. 冰冻无水乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心4min）弃上清，自然晾干或烘干，DDW溶解，30-50ul。基因组

7、DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很

8、少。而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。 不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。 本实验以水稻幼苗(禾本科)、李(苹果)叶子、

9、动物肌肉组织和大肠杆菌培养物为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。从植物组织提取基因组DNA一、材料水稻幼苗或其它禾本科植物，李（苹果）幼嫩叶子。二、设备移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。三、试剂1、提取缓冲液：100mmol/L TrisCl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl,1.5% SDS。2、提取缓冲液：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇4、 Rnas

10、eA母液：配方见第一章。5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。四、操作步骤：（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液, 60水浴预热。2. 水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。4. 室温下5000rpm离心5分钟。5. 仔细

11、移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。9. 加入5l RNaseA(10g/l), 37 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省

12、略该步骤）。10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2体积的冰乙醇,混匀,-20放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。13. 取2l DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15l稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。注意 5g样品可保证获得500g DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。（二）. 从李(苹果)叶子提取基因组DNA1. 取3-5克嫩叶, 液氮磨成粉状。2. 加入提取缓冲液10ml,

13、再研磨至溶浆状。10000rpm, 10min。3. 去上清液,沉淀加提取液20ml, 混匀。65, 30-60min, 常摇动。4. 同本节（一）中步骤3-13操作。从动物组织提取基因组DNA一、材料哺乳动物新鲜组织。二、设备移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。三、试剂1、分离缓冲液：10mmol/L TrisCl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂)，乙醚，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，无水乙醇及70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。四、操作步骤:

14、1. 切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。2. 倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。3. 加1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。4. 加50ul或1mg 蛋白酶 K, 37保温1-2小时, 直到组织完全解体。5. 加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm离心数秒钟。6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后,3000rpm离心 5分钟。7. 取上层水相至干净离心管, 加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。8. 移去上层乙醚,保留下层水相。9. 加1/10 体积3mol/L NaA

15、c, 及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。10. 用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE中,-20保存。11. 如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5l RNaseA(10g/l), 37保温30分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10重沉淀DNA。 细菌基因组DNA的制备一、材料细菌培养物。二、设备移液管, 高速冷冻离心机, 台式离心机，水浴锅。篇三：基因的分离定律教学案基因的分离定律教学案生物备课组 主备人杜怀斌【教学目标】1.知识目标 理解应用

16、孟德尔对相对性状的遗传试验及其解释和验证。 理解并应用基因的分离定律及在实践上的应用。 知道基因型、表现型及与环境的关系。2.能力目标 通过分离定律到实践的应用，从遗传现象上升为对分离定律的认识，训练学生演绎、归纳的思维能力。 通过遗传习题的训练，使学生掌握应用分离定律解答遗传问题的技能技巧。 了解一般的科学研究方法：试验结果假说试验验证理论。 理解基因型和表现型的关系，掌握在遗传学中运用符号说明遗传规律的形式方法。3.情感目标 孟德尔从小喜欢自然科学，进行了整整8年的研究试验，通过科学家的事迹，对学生进行热爱科学、献身科学的教育。 通过分离定律在实践中的应用，对学生进行科学价值观的教育。【教

17、学重点、难点、疑点及解决办法】1教学重点：基因分离定律的实质。2教学难点：对分离现象的解释。3教学疑点：相对性状,杂交方法【教学方法】 模型、讲授、引导、自研【教学时数】 3学时第一课时 基因的分离定律教学案【教学过程】学生自主阅读课本（第19-23）（5分钟）师生互动，合作探究（20分钟）教师活动：在上节课的学习中，我们知道了基因是控制生物性状的遗传物质的功能单位和结构单位。那么基因在传种接代中有什么样的传递规律，得先了解遗传学奠基人孟德尔。 介绍孟德尔简历，豌豆杂交试验，揭示遗传学的经典定律基因的分离定律和基因的自由组合定律。 孟德尔的研究方法：杂交实验法。此方法是研究遗传规律的基本方法。

18、什么是杂交试验法？显示人工异花传粉示意图，对着图讲解父本、母本，如何去雄，如何传粉、受精。 孟德尔选用的实验材料豌豆。自花传粉，也是闭花受粉。试验结果可靠又易于分析，这是他研究的特点，也是他研究成功的原因之一。学生活动用笔勾画一孟德尔的一对相对性状的遗传试验讲述：由高茎豌豆和矮茎豌豆引出相对性状的概念。相对性状是指同种生物同一性状的不同表现类型。此概念有三个要点：同种生物豌豆同一性状茎的高度不同表现类型高茎1.52.0m，矮茎0.3m左右。教师活动：豌豆种子的圆滑和皱缩是不是相对性状？为什么？学生活动：是。具备相对性状概念包含的三个要点：同一种生物豌豆；同一性状 种子的形状；不同类型圆滑和皱缩

19、。师生交流：交待在遗传图解中常用符号：P亲本 母本 父本 杂交 目交（自花传粉，同种类型相交）杂种子一代杂种第二代（1）试验过程教师活动：出示一对相对性状的遗传试验图，对着图讲述试验过程，注意如下几个概念：显性性状和隐性性状：在杂交实验中，把杂种子一代中显现出来那个亲本的性状，叫做显性性状，如高茎；把未显现出来的那个亲本性状叫做隐性性状，如矮茎。性状分离：在杂种后代中，同时显现出显性性状和隐性性状（如高茎和矮茎）的现象叫做性状分离。研究特点：试验材料选用自花传粉的豌豆分析研究方法从一对相对性状入手运用数学方法统计学方法（2）试验结果无论正交反交， 自交， 只表现显性性状； 出现性状分离，分离比

20、接近3：1（高茎：矮茎）。二对分离现象的解释。教师活动：什么是基因？基因位于何处？学生活动 ：略。 讲述：上一节课我们已经学过了，基因控制性状。那么控制显性性状的基因是显性基因，一般用大写英文字母表示，如豌豆高茎基因用D表示；控制隐性性状的基因是隐性基因，一般用小写英文字母表示，豌豆矮茎基因用d表示。 在体细胞中。控制性状的基因以对存在，纯种高茎豌豆用DD表示，矮茎豌豆用dd表示。在生殖细胞中，控制性状的基因成单存在，因为核基因位于染色体上，减数分裂时，同源染色体分离，导致生殖细胞染色体数目减半。因此，纯种高茎豌豆的配子只含有一个显性基因D，纯种矮茎豌豆的配子只含有一个隐性基因d。受精时，雌雄

21、配子结合，合子中的基因又恢复成对，即 体细胞为Dd。 （Dd）只表现为高茎。显性作用：由于基因D对基因d具显性作用，故自交产生配子时（出示有染色体遗传的图像），由于D和d位于一对同源染色体上，故D和d独立存在，它们要随着同源染色体的分离而分开，分别进入不同的配子。这样， 产生的雄配子和雌配子就各有两种，一种含有基因D，一种含有基因d，且两种雄 ；两种雌配子D：d 。受精时，雌雄配子随机结合，便出现3种基配子D：d因组合：DD：Dd：dd1：2：1，性状表现为：高茎：矮茎接近3：1。总结 、扩展（4分钟） 学生甲孟德尔的研究方法是杂交试验法，用高茎豌豆和矮茎豌豆杂交，杂种子一代全是高茎豌豆。经自

22、花传粉后，杂种子二代发生性状分离，高茎豌豆和矮茎豌豆之比为3：1。孟德尔解释的关键是杂合子（ 入两个配子中。其他学生孟德尔也做了豌豆子叶黄色和绿色等其余六对杂交试验，量比都接近3：1，请同学们按板书要求试着做这六对杂交试验遗传图解。 表现型的数 代）中，D和d随同源染色体分开而分离，分别进课堂练习（5分钟）1杂合高茎豌豆自交产生的后代中，杂合高茎植株约占后代总数的（ ）A100 B3/4 C1/2 D1/42子叶黄色豌豆（YY）与子叶绿色豌豆（yy）杂交，后， 表现型全是黄色，让其自交 发生性状分离，黄色子叶与绿色子叶之比为3：1。请用遗传图解说明试验的全过程和试验结果。自我练习 资料P27

23、1-4（3分钟）作业 复习教材，掌握概念、熟悉分离定律的实验过程、前提、特定的数字 资料P28 课时作业 1-8新课导学（3分钟） 基因的分离定律的解释，验证教学后记 学生感觉难，需要多投入、利用自习课，多接触学生，给学生提问的机会和时间，及时解决学生的疑难，避免不消化。篇四：DNA分离方法一、分离与纯化的方法双链DNA因固有的结构特点，是一种惰性很强的 化学 分子，可用于重现犯罪现场和进行古 生物 学分析。但由于是很长的线性分子（如人的染色体DNA平均长度为100150Mb）而且缺乏横向的稳定性，因此很容易断裂。在溶液中，由于碱基堆砌力的相互作用与磷酸基团的静电排斥作用，DNA分子非常粘稠，

24、沉淀后很难溶解，而且也增加了它对剪切力的敏感性。即便是最轻柔的方式，高分子量的DNA也很容易因剪切力发生横向的断裂。常规方法分离基因组DNA时，大于150kb的DNA分子很容易发生断裂。 （一）酚抽提法本法最初于1976年由Stafford及其同事提出，通过改进，以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶的裂解缓冲液裂解细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA，重复抽提至一定纯度后，根据不同需要行透析或沉淀处理，获得所需的DNA样品。其中，EDTA为二价金属离子螯合剂，可以抑制DNA酶的活性，同时降低细胞膜的稳定性；SDS为生物阴离子去垢剂，主要引起细胞膜的降解并能乳化脂

25、质和蛋白质，与这些脂质和蛋白质的结合可以使它们沉淀，其非极性端与膜磷脂结合，极性端使蛋白质变性、解聚，所以SDS同时还有降解DNA酶的作用；无DNA酶的RNA酶可以有效水解RNA，而避免DNA的消化；蛋白酶K则有水解蛋白质的作用，可以消化DNA酶、DNA上的蛋白质，也有裂解细胞的作用；酚可以使蛋白质变性沉淀，也抑制DNA酶的活性；pH8.0的Tris溶液能保证抽提后DNA进入水相，而避免滞留于蛋白质层。多次抽提可提高DNA的纯度。一般在第三次抽提后，移出含DNA的水相，作透析或沉淀处理。透析处理能减少对DNA的剪切效应，因此可以得到200kb的高分子量DNA。沉淀处理常以醋酸铵为盐类，用2倍体

26、积的无水乙醇沉淀，并用70%的乙醇洗涤，最后得到的DNA大小在100kb150kb。 运用该法可以从单层或悬浮培养细胞、新鲜组织及血液标本中制备少于10mg至大到数百mg的DNA样品。由于分离纯化的每一步都有剪切力的影响，最后得到的DNA样品中分子量超过100kb150kb的很少，但这种大小的DNA足以作为PCR反应的模板和进行Southern blotting分析以及构建以噬菌体为载体的基因组DNA文库。从5107个培养的非整倍体哺乳 动物 细胞（如HeLa细胞）大约可以制备分子量在100kb150kb的DNA 200mg，自20ml血液可得250mg。 （二）甲酰胺解聚法为构建高容量载体的

27、DNA文库和进行分子量巨大的DNA片段的脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis，PFGE）分析，需要制备分子量大于200kb的DNA。该法的细胞裂解与蛋白质水解同酚抽提法相似，但不进行酚的抽提，而是以高浓度的甲酰胺裂解DNA与蛋白质的复合物（即染色质），然后通过火棉胶袋的充分透析以除去蛋白酶和有机溶剂。甲酰胺是一种离子化溶剂，既可以裂解蛋白质与DNA的复合物，还可使释放的蛋白质变性。但甲酰胺对蛋白酶K的活性无显著影响。本法因操作步骤少，尤其省却了酚的多次提取，所得DNA分子量一般可以大于200kb。 （三）玻棒缠绕法缠绕法适于同时从不同的细胞或组织标本

28、中提取DNA。与前两个方案不同，它有两个关键步骤：一是基因组DNA沉淀于细胞裂解液与乙醇液的交界面；二是要将沉淀的DNA缠绕于带钩玻棒上。通过带钩玻棒将高分子量DNA沉淀从乙醇溶液中转移到pH8.0的TE溶液重溶。小的DNA片段与RNA不能有效形成凝胶状线卷。该方案以盐酸胍裂解细胞，制备的DNA分子量只有大约80kb，不能有效构建基因组DNA文库，但用于Southern杂交和PCR反应可以获得很好的结果。 （四）DNA样品的进一步纯化纯化的方法包括透析、层析、电泳及选择性沉淀等。其中电泳法简单、快速、易于操作、分辨率高、灵敏度好、易于观察及便于回收，在DNA的进一步纯化中占有重要的地位。由于聚

29、丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel）与琼脂糖凝胶（agarose gel）可以制成各种形状、大小和孔径不一的支持体，并可以在多种装置中进行电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）与琼脂糖凝胶电泳（AGE）广泛用于核酸的分离、纯化与鉴定。 二、DNA片段的回收通过凝胶电泳，我们可以对各种大小与来源的DNA片段进行分离、纯化与鉴定。目前，琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶是最常使用的电泳支持体，电泳分离的DNA处于凝胶的三维网状结构中。下面介绍从琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段的主要方法。 （一）总的原则与要求无论采用何种方法从何种支持介质中回收DNA片段，都要注意两个原则。一是要提

30、高DNA片段的回收率；二是要去除回收DNA样品中的污染。回收的DNA样品往往因支持介质的不纯、回收溶液的使用及不慎操作等因素而引入污染，这些污染可能严重影响后继的实验。根据实验要求，应对回收的DNA样品进行纯化，以除去污染物。常用的纯化方法包括有机溶剂抽提法与商品化 的柱层析法。其中柱层析法采用阴离子交换层析的原理，主要是利用带负电荷的DNA在低离子强度的缓冲液中与阴离子交换树脂结合，洗去杂质，然后再用高离子强度的缓冲液洗脱下来。上述两种纯化方法以及其它回收DNA片段的方法，最终均要在有盐的情况下进行乙醇沉淀，并以70%的乙醇除去有机分子与共沉淀的盐。 （二）从琼脂糖凝胶中回收DNA片段从琼脂

31、糖凝胶中回收DNA片段的方法主要包括二乙基氨基乙基（diethyl aminoethyl，DEAE）纤维素膜插片电泳法、电泳洗脱法、冷冻挤压法及低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法等。1DEAE纤维素膜插片电泳法 DEAE纤维素是一种阴离子交换纤维素，可以结合带负电荷的DNA分子。将DEAE纤维素膜插入到经琼脂糖凝胶电泳分离的核酸条带前，继续电泳直至所需回收的DNA片段刚好转移到膜上。取出DEAE纤维素膜，低盐条件下洗去杂质，高盐条件下洗出DNA分子。该法操作比较简单，可同时回收多个DNA片段，对500bp5kb的DNA片段回收率好，纯度高，能满足大多数实验的要求。但DNA片段大于5kb时，因结合力增大而回收率下降。至10kb或为单链DNA时，其与膜的结合变得很牢固而难以回收。因此，本法不适合于分子量大于10kb的DNA片段的回收，也不能回收单链DNA。 2电泳洗脱法电泳洗脱法包括两个主要步骤，一是将待回收的DNA片段电泳出凝胶介质，使其进入一个便于回收的小容积溶液中；二是分离纯化出DNA片段。按