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基因分离步骤

篇一：

试述基因分离的主要方法和原理

2试述基因分离的主要方法和原理。

碱裂解法提取质粒DNA，在碱性条件下线状DNA发生变性，质粒DNA维持环状；在高盐条件下复性处理，变性的染色体DNA会形成沉淀，从而将质粒DNA与染色体DNA分开。

3试设计一个方案，将拟南芥生长素反应因子9转入油菜中进行异源表达（拟南芥基因组测序已完成）。

1设计引物，因为拟南芥基因组测序已完成，所以可以在基因序列库中搜索生长素反应因子9序列，得到序列信息，根据序列设计PCR引物，根据载体的MCS在上下游引物5’-端加上两种不同限制性核酸内切酶的识别和切割序列，要求这两种酶不在基因内部产生切割；2提取拟南芥mRNA，3PCR扩增，利用上述引物进行RT-PCR，扩增得所需基因序列DNA；4PCR产品和检验，扩增得基因DNA与测序载体连接，转化大肠杆菌；利用载体上的抗性基因筛选重组子；扩大培养后提取质粒进行测序，以确定基因是否突变；5准备上游质粒、载体进行双酶切若没突变，对质粒进行和Ti载体进行双酶切，然后进行定向连接，转化大肠杆菌，利用Ti质粒载体的抗性基因和分子标记筛选重组子；提取质粒，利用冻融法或电击法转化农杆菌中；利用分子标记筛选得到重组农杆菌；利用叶盘转化法，将目的基因转入油菜中，经抗性筛选后再生植株；6表达，利用抗性基因筛选重组植株，用PCR法鉴定重组是否成功，用Southern印迹法筛选单基因植株；杂交筛选纯合子植株；用Northern印迹法鉴定目的基因mRNA是否转录，用Western印迹法鉴定目的蛋白；

观察转基因植物的表型。

4现分离得到一个青霉菌的单基因的抗高温突变体，试设计一个方案克隆和分离该基因（青霉菌基因组测序尚未进行）。

设计题

1）设计一个实验程序将拟南芥光敏色素基因A转入番茄表达：

答：

因为拟南芥基因组测序已完成，所以可以在基因序列库如GenBank中搜索光敏色素序列，得到序列信息；

根据序列设计PCR引物，根据载体（植物中用的如PBI）的MCS在上下游引物5’-端加上两种不同限制性核酸内切酶的识别和切割序列，要求这两种酶不在基因内部产生切割；提取拟南芥mRNA，利用上述引物进行RT-PCR，扩增得所需基因序列DNA；

扩增得基因DNA与测序载体连接，转化大肠杆菌；

利用载体上的抗性基因筛选重组子；

扩大培养后提取质粒进行测序，以确定基因是否突变；

若没突变，对质粒和Ti载体分别进行双酶切，然后进行定向连接，转化大肠杆菌，利用Ti质粒载体的抗性基因和分子标记筛选重组子；

提取质粒，利用冻融法或电击法转化农杆菌中；

利用分子标记筛选得到重组农杆菌；

利用叶盘转化法，将目的基因转入番茄中，经抗性筛选后再生植株；

利用抗性基因筛选重组植株，用PCR法鉴定重组是否成功，用Southern印迹法筛选单基因植株；

杂交筛选纯合子植株；

用Northern印迹法鉴定目的基因mRNA是否转录，用Western印迹法鉴定目的蛋白；观察转基因植物的表型。

篇二：

基因组DNA提取步骤

基因组DNA提取步骤

1.从无水乙醇中取出少许组织（约50mg）加入干净灭菌的EP管中，

剪碎；

2.加入400ul1％的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K，充分浸润，

入55℃摇床（100转/分），期间振荡助溶至澄清（5-6h）；

3.取出消化液，加入6mol/L的NaCl300ul，氯仿200ul，轻柔正反

颠倒，使其充分乳化，4℃13000转/分离心30min；

4.取出上清（约400ul），加入等体积氯仿抽提一次，轻柔颠倒后，

4℃13000转/分离心10min；

5.上清加入5μlRNaseA（10μg/μl）,37℃10分钟,除去RNA（RNA对DNA的操作、分析一

般无影响，可省略该步骤）。

6.取上清加入等体积异丙醇，轻柔混匀后-20℃沉淀10min；

7.4℃13000转/分离心15min，弃上清；

8.用75％乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心2min），弃上

清；

9.冰冻无水乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心4min）弃上

清，自然晾干或烘干，DDW溶解，30-50ul。

基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交（包括RFLP）及PCR分离基因等。

利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。

加入一定量的异丙醇或乙醇，

基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中,可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部,从而达到提取的目的。

在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓,以保证得到较长的DNA。

一般来说,构建基因组文库,初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。

而进行RFLP和PCR分析,DNA长度可短至50kb,在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段（20kb以下）,并可保证包含PCR所扩增的片段（一般2kb以下）。

不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同;不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。

在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法,以获得可用的DNA大分子。

尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时,应考虑除去多糖和酚类物质。

本实验以水稻幼苗（禾本科）、李（苹果）叶子、动物肌肉组织和大肠杆菌培养物为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。

从植物组织提取基因组DNA

一、材料

水稻幼苗或其它禾本科植物，李（苹果）幼嫩叶子。

二、设备

移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和

1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。

三、试剂

1、提取缓冲液Ⅰ：

100mmol/LTris·Cl,pH8.0,20mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,

1.5%SDS。

2、提取缓冲液Ⅱ：

18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。

3、80:

4:

16/氯仿:

戊醇:

乙醇

4、RnaseA母液：

配方见第一章。

5、其它试剂：

液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/LNaAc。

四、操作步骤：

（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取

1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ,60℃水浴预热。

2.水稻幼苗或叶子5-10g,剪碎,在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,剧烈摇动混匀,60℃水浴保温30-60分钟（时间长,DNA产量高）,不时摇动。

3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液,颠倒混匀（需带手套,防止损伤皮肤），室温下静置5-10分钟,使水相和有机相分层（必要时可重新混匀）。

4.室温下5000rpm离心5分钟。

5.仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。

6.在1.5mleppendorf中加入1mlTE。

用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转

入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。

7.如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟,再将沉淀移入TE管中。

这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。

8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟,上清液倒入干净的5ml离心管。

9.加入5μlRNaseA（10μg/μl）,37℃10分钟,除去RNA（RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。

10.加入1/10体积的3mol/LNaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。

11.用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。

12.将DNA重溶解于1mlTE,-20贮存。

13.取2μlDNA样品在0.7%Agarose胶上电泳,检测DNA的分子大小。

同时取15μl稀释20倍,测定OD260/OD280,检测DNA含量及质量。

[注意]5g样品可保证获得500μgDNA,足供RFLP、PCR等分析之用。

（二）.从李（苹果）叶子提取基因组DNA

1.取3-5克嫩叶,液氮磨成粉状。

2.加入提取缓冲液Ⅱ10ml,再研磨至溶浆状。

10000rpm,10min。

3.去上清液,沉淀加提取液Ⅰ20ml,混匀。

65℃,30-60min,常摇动。

4.同本节

（一）中步骤3-13操作。

从动物组织提取基因组DNA

一、材料

哺乳动物新鲜组织。

二、设备

移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。

三、试剂

1、分离缓冲液：

10mmol/LTris·ClpH7.4,10mmol/LNaCl,25mmol/LEDTA。

2、其它试剂：

10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml或粉剂），乙醚，酚:

氯仿:

异戊醇（25:

24:

1），无水乙醇及70%乙醇，5mol/LNaCl，3mol/LNaAc，TE。

四、操作步骤:

1.切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵（越细越好）。

2.倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。

3.加1ml10%SDS,混匀,此时样品变得很粘稠。

4.加50ul或1mg蛋白酶K,37℃保温1-2小时,直到组织完全解体。

5.加1ml5mol/LNaCl,混匀,5000rpm离心数秒钟。

6.取上清液于新离心管，用等体积酚:

氯仿:

异戊醇（25:

24:

1）抽提。

待分层后,3000rpm离心5分钟。

7.取上层水相至干净离心管,加2倍体积乙醚抽提（在通风情况下操作）。

8.移去上层乙醚,保留下层水相。

9.加1/10体积3mol/LNaAc,及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。

室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。

10.用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1mlTE中,-20℃保存。

11.如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清;如要除去其中的RNA,可加5μlRNaseA（10μg/μl）,37℃保温30分钟,用酚抽提后,按步骤9-10重沉淀DNA。

细菌基因组DNA的制备

一、材料

细菌培养物。

二、设备

移液管,高速冷冻离心机,台式离心机，水浴锅。

篇三：

《基因的分离定律》教学案

《基因的分离定律》教学案

生物备课组主备人杜怀斌

【教学目标】

1.知识目标

①理解应用孟德尔对相对性状的遗传试验及其解释和验证。

②理解并应用基因的分离定律及在实践上的应用。

③知道基因型、表现型及与环境的关系。

2.能力目标

①通过分离定律到实践的应用，从遗传现象上升为对分离定律的认识，训练学生演绎、归纳的思维能力。

②通过遗传习题的训练，使学生掌握应用分离定律解答遗传问题的技能技巧。

③了解一般的科学研究方法：

试验结果——假说——试验验证——理论。

④理解基因型和表现型的关系，掌握在遗传学中运用符号说明遗传规律的形式方法。

3.情感目标

①孟德尔从小喜欢自然科学，进行了整整8年的研究试验，通过科学家的事迹，对学生进行热爱科学、献身科学的教育。

②通过分离定律在实践中的应用，对学生进行科学价值观的教育。

【教学重点、难点、疑点及解决办法】

1．教学重点：

基因分离定律的实质。

2．教学难点：

对分离现象的解释。

3．教学疑点：

相对性状,杂交方法

【教学方法】模型、讲授、引导、自研

【教学时数】3学时

第一课时《基因的分离定律》教学案

【教学过程】

学生自主阅读课本（第19-23）（5分钟）

师生互动，合作探究（20分钟）

教师活动：

在上节课的学习中，我们知道了基因是控制生物性状的遗传物质的功能单位

和结构单位。

那么基因在传种接代中有什么样的传递规律，得先了解遗传学奠基人孟德尔。

①介绍孟德尔简历，豌豆杂交试验，揭示遗传学的经典定律——基因的分离定律和基因的自由组合定律。

②孟德尔的研究方法：

杂交实验法。

此方法是研究遗传规律的基本方法。

什么是杂交试验法？

显示《人工异花传粉示意图》，对着图讲解父本、母本，如何去雄，如何传粉、受精。

③孟德尔选用的实验材料——豌豆。

自花传粉，也是闭花受粉。

试验结果可靠又易于分

析，这是他研究的特点，也是他研究成功的原因之一。

学生活动用笔勾画

一孟德尔的一对相对性状的遗传试验

讲述：

由高茎豌豆和矮茎豌豆引出相对性状的概念。

相对性状是指同种生物同一性状

的不同表现类型。

此概念有三个要点：

同种生物——豌豆

同一性状——茎的高度

不同表现类型——高茎1.5－2.0m，矮茎0.3m左右。

教师活动：

豌豆种子的圆滑和皱缩是不是相对性状？

为什么？

学生活动：

是。

具备相对性状概念包含的三个要点：

同一种生物——豌豆；同一性状——种子的形状；不同类型——圆滑和皱缩。

师生交流：

交待在遗传图解中常用符号：

P——亲本♀——母本♂——父本×——杂交×——目交（自花传粉，同种

类型相交）

——杂种子一代

——杂种第二代

（1）试验过程

教师活动：

出示一对相对性状的遗传试验图，对着图讲述试验过程，注意如下几个概念：

显性性状和隐性性状：

在杂交实验中，把杂种子一代中显现出来那个亲本的性状，叫做显性性状，如高茎；把未显现出来的那个亲本性状叫做隐性性状，如矮茎。

性状分离：

在杂种后代中，同时显现出显性性状和隐性性状（如高茎和矮茎）的现象叫做性状分离。

研究特点：

①试验材料——选用自花传粉的豌豆

②分析研究方法——从一对相对性状入手

③运用数学方法——统计学方法

（2）试验结果

①无论正交反交，

②自交，只表现显性性状；出现性状分离，分离比接近3：

1（高茎：

矮茎）。

二．对分离现象的解释。

教师活动：

什么是基因？

基因位于何处？

学生活动

：

略。

讲述：

上一节课我们已经学过了，基因控制性状。

那么控制显性性状的基因是显性基因，一般用大写英文字母表示，如豌豆高茎基因用D表示；控制隐性性状的基因是隐性基因，一般用小写英文字母表示，豌豆矮茎基因用d表示。

在体细胞中。

控制性状的基因以对存在，纯种高茎豌豆用DD表示，矮茎豌豆用dd表示。

在生殖细胞中，控制性状的基因成单存在，因为核基因位于染色体上，减数分裂时，同源染色体分离，导致生殖细胞染色体数目减半。

因此，纯种高茎豌豆的配子只含有一个显性基因D，纯种矮茎豌豆的配子只含有一个隐性基因d。

受精时，雌雄配子结合，合子中的基因又恢复成对，即体细胞为Dd。

（Dd）只表现为高茎。

显性作用：

由于基因D对基因d具显性作用，故

自交产生配子时（出示有染色体遗传的图像），由于D和d位于一对同源染色体上，故D和d独立存在，它们要随着同源染色体的分离而分开，分别进入不同的配子。

这样，产生的雄配子和雌配子就各有两种，一种含有基因D，一种含有基因d，且两种雄

；两种雌配子D：

d。

受精时，雌雄配子随机结合，便出现3种基配子D：

d

因组合：

DD：

Dd：

dd＝1：

2：

1，性状表现为：

高茎：

矮茎接近3：

1。

总结、扩展（4分钟）

学生甲孟德尔的研究方法是杂交试验法，用高茎豌豆和矮茎豌豆杂交，杂种子一代全是高茎豌豆。

经自花传粉后，杂种子二代发生性状分离，高茎豌豆和矮茎豌豆之比为3：

1。

孟德尔解释的关键是杂合子（

入两个配子中。

其他学生孟德尔也做了豌豆子叶黄色和绿色等其余六对杂交试验，

量比都接近3：

1，请同学们按板书要求试着做这六对杂交试验遗传图解。

表现型的数代）中，D和d随同源染色体分开而分离，分别进

课堂练习（5分钟）

1．杂合高茎豌豆自交产生的后代中，杂合高茎植株约占后代总数的（）

A．100％B．3/4C．1/2D．1/4

2．子叶黄色豌豆（YY）与子叶绿色豌豆（yy）杂交，

后，表现型全是黄色，让其自交发生性状分离，黄色子叶与绿色子叶之比为3：

1。

请用遗传图解说明试验的全过程和试验结果。

自我练习资料P271-4（3分钟）

作业①复习教材，掌握概念、熟悉分离定律的实验过程、前提、特定的数字②资料P28课时作业1-8

新课导学（3分钟）基因的分离定律的解释，验证

教学后记学生感觉难，需要多投入、利用自习课，多接触学生，给学生提问的机会和时间，及时解决学生的疑难，避免不消化。

篇四：

DNA分离方法

一、分离与纯化的方法

双链DNA因固有的结构特点，是一种惰性很强的化学分子，可用于重现犯罪现场和进行古生物学分析。

但由于是很长的线性分子（如人的染色体DNA平均长度为100～150Mb）而且缺乏横向的稳定性，因此很容易断裂。

在溶液中，由于碱基堆砌力的相互作用与磷酸基团的静电排斥作用，DNA分子非常粘稠，沉淀后很难溶解，而且也增加了它对剪切力的敏感性。

即便是最轻柔的方式，高分子量的DNA也很容易因剪切力发生横向的断裂。

常规方法分离基因组DNA时，大于150kb的DNA分子很容易发生断裂。

（一）酚抽提法

本法最初于1976年由Stafford及其同事提出，通过改进，以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶的裂解缓冲液裂解细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA，重复抽提至一定纯度后，根据不同需要行透析或沉淀处理，获得所需的DNA样品。

其中，EDTA为二价金属离子螯合剂，可以抑制DNA酶的活性，同时降低细胞膜的稳定性；SDS为生物阴离子去垢剂，主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质，与这些脂质和蛋白质的结合可以使它们沉淀，其非极性端与膜磷脂结合，极性端使蛋白质变性、解聚，所以SDS同时还有降解DNA酶的作用；无DNA酶的RNA酶可以有效水解RNA，而避免DNA的消化；蛋白酶K则有水解蛋白质的作用，可以消化DNA酶、DNA上的蛋白质，也有裂解细胞的作用；酚可以使蛋白质变性沉淀，也抑制DNA酶的活性；pH8.0的Tris溶液能保证抽提后DNA进入水相，而避免滞留于蛋白质层。

多次抽提可提高DNA的纯度。

一般在第三次抽提后，移出含DNA的水相，作透析或沉淀处理。

透析处理能减少对DNA的剪切效应，因此可以得到200kb的高分子量DNA。

沉淀处理常以醋酸铵为盐类，用2倍体积的无水乙醇沉淀，并用70%的乙醇洗涤，最后得到的DNA大小在100kb～150kb。

运用该法可以从单层或悬浮培养细胞、新鲜组织及血液标本中制备少于10mg至大到数百mg的DNA样品。

由于分离纯化的每一步都有剪切力的影响，最后得到的DNA样品中分子量超过100kb～150kb的很少，但这种大小的DNA足以作为PCR反应的模板和进行Southernblotting分析以及构建以λ噬菌体为载体的基因组DNA文库。

从5×107个培养的非整倍体哺乳动物细胞（如HeLa细胞）大约可以制备分子量在100kb～150kb的DNA200mg，自20ml血液可得250mg。

（二）甲酰胺解聚法

为构建高容量载体的DNA文库和进行分子量巨大的DNA片段的脉冲场凝胶电泳（pulsedfieldgelelectrophoresis，PFGE）分析，需要制备分子量大于200kb的DNA。

该法的细胞裂解与蛋白质水解同酚抽提法相似，但不进行酚的抽提，而是以高浓度的甲酰胺裂解DNA与蛋白质的复合物（即染色质），然后通过火棉胶袋的充分透析以除去蛋白酶和有机溶剂。

甲酰胺是一种离子化溶剂，既可以裂解蛋白质与DNA的复合物，还可使释放的蛋白质变性。

但甲酰胺对蛋白酶K的活性无显著影响。

本法因操作步骤少，尤其省却了酚的多次提取，所得DNA分子量一般可以大于200kb。

（三）玻棒缠绕法

缠绕法适于同时从不同的细胞或组织标本中提取DNA。

与前两个方案不同，它有两个关键步骤：

一是基因组DNA沉淀于细胞裂解液与乙醇液的交界面；二是要将沉淀的DNA缠绕于带钩玻棒上。

通过带钩玻棒将高分子量DNA沉淀从乙醇溶液中转移到pH8.0的TE溶液重溶。

小的DNA片段与RNA不能有效形成凝胶状线卷。

该方案以盐酸胍裂解细胞，制备的DNA分子量只有大约80kb，不能有效构建基因组DNA文库，但用于Southern杂交和PCR反应可以获得很好的结果。

（四）DNA样品的进一步纯化

纯化的方法包括透析、层析、电泳及选择性沉淀等。

其中电泳法简单、快速、易于操作、分辨率高、灵敏度好、易于观察及便于回收，在DNA的进一步纯化中占有重要的地位。

由于聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamidegel）与琼脂糖凝胶（agarosegel）可以制成各种形状、大小和孔径不一的支持体，并可以在多种装置中进行电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）与琼脂糖凝胶电泳（AGE）广泛用于核酸的分离、纯化与鉴定。

二、DNA片段的回收

通过凝胶电泳，我们可以对各种大小与来源的DNA片段进行分离、纯化与鉴定。

目前，琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶是最常使用的电泳支持体，电泳分离的DNA处于凝胶的三维网状结构中。

下面介绍从琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段的主要方法。

（一）总的原则与要求

无论采用何种方法从何种支持介质中回收DNA片段，都要注意两个原则。

一是要提高DNA片段的回收率；二是要去除回收DNA样品中的污染。

回收的DNA样品往往因支持介质的不纯、回收溶液的使用及不慎操作等因素而引入污染，这些污染可能严重影响后继的实验。

根据实验要求，应对回收的DNA样品进行纯化，以除去污染物。

常用的纯化方法包括有机溶剂抽提法与商品化

的柱层析法。

其中柱层析法采用阴离子交换层析的原理，主要是利用带负电荷的DNA在低离子强度的缓冲液中与阴离子交换树脂结合，洗去杂质，然后再用高离子强度的缓冲液洗脱下来。

上述两种纯化方法以及其它回收DNA片段的方法，最终均要在有盐的情况下进行乙醇沉淀，并以70%的乙醇除去有机分子与共沉淀的盐。

（二）从琼脂糖凝胶中回收DNA片段

从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法主要包括二乙基氨基乙基（diethylaminoethyl，DEAE）纤维素膜插片电泳法、电泳洗脱法、冷冻挤压法及低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法等。

1．DEAE纤维素膜插片电泳法DEAE纤维素是一种阴离子交换纤维素，可以结合带负电荷的DNA分子。

将DEAE纤维素膜插入到经琼脂糖凝胶电泳分离的核酸条带前，继续电泳直至所需回收的DNA片段刚好转移到膜上。

取出DEAE纤维素膜，低盐条件下洗去杂质，高盐条件下洗出DNA分子。

该法操作比较简单，可同时回收多个DNA片段，对500bp～5kb的DNA片段回收率好，纯度高，能满足大多数实验的要求。

但DNA片段大于5kb时，因结合力增大而回收率下降。

至10kb或为单链DNA时，其与膜的结合变得很牢固而难以回收。

因此，本法不适合于分子量大于10kb的DNA片段的回收，也不能回收单链DNA。

2．电泳洗脱法电泳洗脱法包括两个主要步骤，一是将待回收的DNA片段电泳出凝胶介质，使其进入一个便于回收的小容积溶液中；二是分离纯化出DNA片段。

按