临床试验SOP 第四节仪器操作类SOP 的撰写指南.docx

1、临床试验SOP 第四节 仪器操作类SOP 的撰写指南第四节仪器操作类SOP 的撰写指南在各期临床试验、生物等效性研究及临床药代动力学研究过程中，必然要涉及许多与诊断、治疗有关的仪器设备的操作。因此，建立各种仪器设备操作的SOP、并严格按照SOP正确使用这些仪器设备是保证临床试验成功的保证。一主要内容仪器操作类SOPs包括了与临床试验有关的各种诊断检查、检验分析仪器设备和治疗急救仪器操作，内容广泛，现举例如下：1.心电图机标准操作规程；2.动态心电监护仪标准操作规程；3.2003型多参数监护仪标准操作规程；4.LH-1 ECG/心律失常模拟器标准操作规程 (用于检验心电图机、监护仪以及无线遥测设

2、备的准确性)；5.呼吸机标准操作规程；6.脑电图仪测标准操作规程；7.肺活量测定标准操作规程；8.(电子) 血压计标准操作规程；9.动脉血氧饱和度（SpO2）监护标准操作规程；10.床边X光机标准操作规程；11.B超诊断仪标准操作规程；12.高效液相色谱仪标准操作规程；13.高效液相色谱法测定生物样品药物浓度标准操作规程；14.血药浓度监测仪标准操作规程；15.WD-21D 型生化分析仪标准操作规程，等等。以上只举出临床试验过程中的部分仪器操作类SOPs。实际上，对药物临床试验机构来讲，涉及到的仪器设备远远不止这些。而且，同种仪器设备也可能由于不同厂家生产、或型号规格不同使得制定SOP的数量倍

3、增，因此很难说这类SOP究竟多少份就足够。二编写要点由于仪器操作类SOPs包括内容广泛，种类繁多，而且各具特色，所以在撰写此类SOP时特别需要根据每个仪器操作程序、环节的不同特点来进行编写。流程图可简明、清晰地传达信息，故程序性较强的环节可考虑用流程图来描述。仪器操作类SOPs要注意其内容在排序上与实际操作一致，以保证其可行性。在仪器操作类SOPs中除了正确的操作程序外，还应建立质量保证体系。该体系包括适当的维护、检测和校准程序保证各仪器处于正常运行状态。在一些临床药代动力学的研究，如生物样本浓度测定中，还使用各种方法学确证手段和质控样品，来保证实验方法和结果的准确、可靠。(一) 范例1：高效

4、液相色谱仪测定西肽普兰的标准操作规程高效液相色谱仪测定西肽普兰的标准操作规程SOP编号：页数：制订人：审核人：批准人：（签名、日期）（签名、日期）（签名、日期）颁发日期：生效日期：修订登记：编号页码修订内容修订原因、依据修订人签名/日期批准人签名/日期审查登记：审查日期签名审查日期签名142536. 目的：此SOP的目的是定量和定性测定人血浆中西肽普兰浓度. 范围：适用于西肽普兰的临床药代动力学研究. 规程：1.标准品：氢溴酸西酞普兰对照品（批号：030902，纯度：，汕头XX制药总厂），盐酸普萘洛尔（批号：030604，纯度：，汕头XX制药总厂）。2.试剂2.1乙腈：色谱纯试剂 (Merk，

5、德国）；2.2其它试剂：为分析纯试剂。三乙胺 (分析纯，XX永生试剂厂)，磷酸二氢钾 (分析纯，广州化学试剂厂)；氢氧化钠 (分析纯，广州市东红化工厂)；盐酸 (分析纯，广州化学试剂厂)；正己烷 (分析纯，广州化学试剂厂)；异戊醇 (分析纯，广州化学试剂厂)；2.3水：去离子水，再用Millipore 超纯水系统进行纯化，滤膜孔径为0.2 m。3.仪器设备3.1Waters高效液相色谱系统（600E低压梯度泵，717自动进样器，474荧光检测器，Mellenium 32色谱工作站）；3.2XW-80A漩涡混合器（XX医科大学仪器厂）；Sigma冷冻离心机；高速离心机（美国雅培公司血药浓度监测仪

6、附件）。1.0溶液制备4.1标准溶液配制4.1.1精密称取西酞普兰标准品10.0 mg，置于100 mL容量瓶，以甲醇溶解并定容，得100 g/mL的西酞普兰储备液；4.1.2取西酞普兰储备液25、50、75、100、250、500、1000 L，分别置于100 mL容量瓶，以甲醇稀释并定容，配制浓度分别为255075、100、250、500、1000 ng/mL的西酞普兰标准溶液。4.2内标液的配制4.2.1精密称取普萘洛尔0.4 mg置于100mL容量瓶，以甲醇溶解并定容，得浓度为4 g/mL的内标液。4.3流动相配制4.3.1精密称取4.08 g KH2PO4，溶于950 mL蒸馏水，混

7、匀后备用；4.3.2用移液器量取0.1 mL 三乙胺置于100mL容量瓶，加95 mL蒸馏水手动混匀，再加蒸馏水至刻度，混匀后备用；4.3.3用三乙胺调KH2PO4溶液pH 到，并用蒸馏水稀释到1000 mL，混匀；4.3.4各取的KH2PO4溶液6份和乙腈4份混合，尼龙膜过滤脱气后备用；4.3.5注：实际量取的KH2PO4溶液和乙腈体积必须在实验记录本上予以记录。4.40.2 M NaOH 溶液的配制 4.4.1精密称取0.8 g NaOH，置于100 mL容量瓶，用蒸馏水溶解并定容，混匀后备用。4.50.01 M HCl溶液的配制4.5.1精密量取84 L 37%的浓HCl，加入95mL蒸

8、馏水(100 mL容量瓶)，再用蒸馏水定容，混匀后备用。4.6正己烷异戊醇（982，v/v）溶液的配制4.6.1分别量取980 mL正己烷和20 mL异戊醇，置于1000 mL玻瓶，混匀后备用。5.1加样血浆样品的配制5.1将10 L的255075、100、250、500、1000、5000、10000 ng/mL西酞普兰标准溶液加入1 mL空白血浆，漩涡混合30 s，配置成、0.75、1、5、10、50、100 ng/mL的西酞普兰标准血浆溶液备用。6.1样本提取过程6.1取血浆样品1 mL置10 mL玻璃试管中，准确加入内标溶液（普萘洛尔4 g/mL）25 L，漩涡混合30 s；6.2加入

9、0.2 M NaOH 溶液500 L，漩涡混合30 s；6.3加入正己烷异戊醇（982，v/v）溶液4 mL，漩涡混合2 min，离心 (4500 rpm ) 10 min；6.4分离有机层转移至10 mL尖底玻璃试管中，加入0.01 M HCl溶液200 L，漩涡混合2 min，离心 (4500 rpm ) 5 min；6.5弃去上层有机相，吸取下层水相100 L进样，记录色谱图。7.1色谱条件7.1色谱柱：250 mm)，色谱科公司，或其它C18柱7.2保护柱：在线过滤器7.3流动相：乙腈30 mM KH2PO4缓冲液（用三乙胺调pH 到）= 4060 (v/v)7.4流速：1.3 mL/

10、min7.5柱温：室温7.6荧光检测器激发波长：236nm，发射波长：306nm7.7自动进样器参数：进样体积为100 L7.8数据收集时间：15 min8.1仪器设置和平衡8.2仪器设置和平衡8.1.1开机：打开高效液相色谱仪各系统电源，确认各系统运行正常；8.1.2冲洗色谱柱：按以下顺序冲洗：50/50的水/乙腈冲洗15 min，10/90的水/乙腈冲洗15 min，50/50的水/乙腈冲洗15 min，90/10的水/乙腈冲洗15 min；8.1.3用流动相平衡色谱柱。8.3样品分析8.2.1上样：将待分析的样品转移到自动进样器样品管，标准血浆样品和质控样品必须均匀分布到未知待测样品中；

11、8.2.2在开始和结束时各进一次标准品，样品量多时，还须在中间进一次标准品；8.2.3色谱工作站软件的设置和使用SOP另述。8.4关机8.3.1.冲洗色谱柱：分析结束后按以下顺序冲洗：90/10的水/乙腈冲洗30 min，50/50的水/乙腈冲洗15 min，10/90的水/乙腈冲洗30 min，50/50的水/乙腈冲洗15 min，色谱柱在50/50的水/乙腈条件保存；8.3.2.关机：关闭电源。9.1数据分析9.1样品和内标峰的确定：根据标准品的保留时间确定样品和内标峰。保留时间的变异为1 min；9.2浓度计算9.2.1用峰面积定量，峰面积由色谱软件自动计算，并由人工进行检查和调整峰面积

12、计算的起始点；9.2.2样品浓度由分析者根据标准曲线进行计算。9.3保存每一个色谱图，并按要求打印部分或全部色谱图；9.4典型色谱图在该SOP的结尾。10.1方法学确证10.1特异性 (Specificity)10.1.1特异性是指样品中存在干扰成分的情况下，分析方法能够准确、专一地测定西酞普兰的能力10.1.2至少要考察6个不同个体空白血浆样品色谱图、空白血浆样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的血浆样品色谱图反映分析方法的特异性。西酞普兰与内标分离良好，西酞普兰和内标的保留时间分别为和见图1。图1西酞普兰的HPLC色谱图A空白血浆色谱图；B空白血浆标准品色谱图；B血浆样品色谱图1内标

13、；2西酞普兰10.2标准曲线和定量范围（Calibration Curve）10.2.1标准曲线反映了所测定物质浓度与仪器响应值之间的关系，一般用回归分析方法（如用加权最小二乘法）所得的回归方程来评价；10.2.2应提供标准曲线的线性方程和相关系数，其线性相关程度应。标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度；10.2.3必须至少用6个浓度建立标准曲线；10.2.4定量范围要能覆盖全部待测的生物样品浓度范围，不得用定量范围外推的方法求算未知样品的浓度；10.2.5建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点，仅用于评价干扰；10.2.6标准曲

14、线各浓度点的实测值与标示值之间的偏差 (偏差=（实测值标示值）/ 标示值 100%) 在可接受的范围之内时，可判定标准曲线合格。可接受范围一般规定为最低浓度点的偏差在20%以内，其余浓度点的偏差在15%以内。只有合格的标准曲线才能对临床待测样品进行定量计算；10.2.7当线性范围较宽的时候，推荐采用加权的方法对标准曲线进行计算，以使低浓度点计算得比较准确。10.2.8西酞普兰的标准曲线 (0.5100 ng/mL) 为：，以信噪比S/N31计，最低检测浓度为0.5 ng/mL。10.3定量下限（Lower Limit of quantitation，LLOQ）定量下限是标准曲线上的最低浓度点，

15、表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度。其准确度应在真实浓度的80%120%范围内，相对标准差(RSD)应小于20%。应由至少5个标准样品测试结果证明。西酞普兰的定量下限为0.5 ng/mL。10.4精密度与准确度 (Prcision and Accuracy) 10.4.1精密度是指在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一系列测量值的分散程度。通常用质控样品的批内和批间RSD来考察方法的精确度。一般RSD应小于15，在LLOQ附近RSD应小于20。选择高 (70 ng/mL)、中(30 ng/mL)、低(2.5 ng/mL)3个浓度的质控样品同时进行方法的精密度考察，批间精密度为连续考察5天的结果。西酞普兰的批内精密度和批间精密度见表1；10.4.2准确度是指在确定的分析条件下，测得的生物样品浓度与真实浓度的接近程度(即质控样品的实测浓度与真实浓