第五部分和第六部分液体奶和奶品微生物检验方法.docx

1、第五部分和第六部分液体奶和奶品微生物检验方法第五部分 液体奶微生物检验方法一、菌落总数的测定第134页二、大肠菌群的测定第134页三、芽孢耐热芽孢检验第134页四、霉菌、酵母菌的检测第134页五、乳酸菌的检测第138页六、嗜冷菌的检测第139页七、牛乳美兰还原试验第139页八、致病菌检验第140页（一）蜡样芽孢杆菌第140页（二）沙门氏菌第145页（三）金黄色葡萄球菌第156页九、涂抹检验第159页十、空气净度检验第159页十一、水样检测第159页十二、无菌奶的检验第159页十三、半成品的检验第160页十四、乳制品中乳酸菌益生菌的测定第160页十五、志贺氏菌的检验第162页十六、微生物鉴定第1

2、70页十七、小样发酵法的操作规程第175页一、菌落总数的测定:同冰淇淋微生物检验方法,见116页.二、大肠菌群的测定：同冰淇淋微生物检验方法,见109页.三、芽孢耐热芽孢检验细菌特殊形态：1芽孢：细菌生长到后期的一种形态（营养不良造成）细胞浓缩形成。 2荚膜： 3鞭毛：有动力性，用穿刺法（半固体）测芽孢：一些细菌在其生长后期，在胞内形成一个抗逆性，（热、干燥、压力等）特别强的圆形或椭圆状的原壁厚密的内生孢子称为芽孢。培养基：锰盐营养琼脂:每1000ML普通营养琼脂中加硫酸锰(3.08gMnSO4+100mlH2O)1ml（注：现化验室用直接配制好的锰盐营养琼脂混合物，30g加入1000 ml煮

3、沸的蒸馏水中，混匀，溶解。）（一）芽孢总数测定A、样品准备1. 在无菌操作条件下，将10ml室温状态下的待检样品加入一个灭菌试管中，盖好棉塞。2. 在同直径的试管中加入10ml同样室温状态下的水，并插入温度计。3. 将上述两支试管同时放入水浴中保温，待温度计温度升至80时开始计时。4. 计时达10分钟后，迅速将样品管取出，置于冷水中迅速降温至室温。5.按无菌操作条件对降温后的样品进行稀释，编号后记录在“微生物检验操作表”中。显示目录料选取10-2至10-4三个稀释度的样品稀释液。中间产品检验选取10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。问题产品检验选取10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。

4、B、培养基准备1. 检查预先经过灭菌处理的锰盐营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。2. 将高压灭菌后的培养基，冷至45左右待用。C、接种培养1. 在无菌操作条件下，在一个灭菌平皿内倾入15ml锰盐营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以作为环境对照样品。2. 按样品编号在灭菌平皿底部作相应标记，并记录在“微生物检验操作表”中。3. 在无菌操作条件下，用1ml的灭菌吸管移取1ml选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内。4. 同上对同一样品重复操作。即每个选定的样品稀释度做两个平皿。5. 按以上步骤，以1毫升无菌生理盐水作为空白操作对照。6. 在无菌操作条件下，将约15ml的锰盐营养琼脂培

5、养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面上轻轻转动，使样品和培养基混合均匀。7. 待琼脂凝固后，将平皿翻转，即保持有标记和培养基的一面向上。8. 将所有平皿（包括空白和环境对照）置于361的恒温培养箱内，保温培养60-62小时。9. 在“微生物检验操作表”中记录保温时间。D、菌落计数1. 计数原则同菌落总数。计数时认准芽孢菌落，必要时要镜检。记录在“微生物检验操作表”中。2. 检验结果=平行样品菌落数之和/2x稀释倍数。记录在“微生物检验操作表”中。3. 计数结果在100以内，按实际计数报告；100至10000的，按两位有效数字报告，如果样品只做原液时计数结果在100以外，按实际计数报告。（二）

6、耐热芽孢总数测定A、样品准备1. 在无菌操作条件下，将10ml室温状态下的待检样品加入一个灭菌试管中，盖好棉塞。2. 在同直径的试管中加入10ml同样室温状态下的水，并插入温度计。3. 将上述两支试管同时放入水浴中保温，待温度计温度升至100开始计时。4. 计时达10分钟后，迅速将样品管取出，置于冷水中迅速降温至室温。5. 按无菌操作条件对降温后的样品进行稀释，编号后记录在“微生物检验操作表”中。显示目录料选取10-2至10-4三个稀释度的样品稀释液。中间产品检验选取10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。问题产品检验选取10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。B、培养基准备1.检查预先经

7、过灭菌处理的锰盐营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。2. 将高压灭菌后的培养基，冷至45左右待用。C、接种培养1.在无菌操作条件下，在一个灭菌平皿内倾入约15ml锰盐营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以作为环境对照样品。2. 按样品编号在灭菌平皿底部作相应标记，并记录在“微生物检验操作表”中。3.在无菌操作条件下，用1ml的灭菌吸管移取1ml选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内。4.同上对同一样品重复操作。即每个选定的样品稀释度做两个平皿。5.按以上步骤，以1毫升无菌生理盐水作为空白操作对照。6.在无菌操作条件下，将约15ml的锰盐营养琼脂培养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面

8、上轻轻转动，使样品和培养基混合均匀。7.待琼脂凝固后，将平皿翻转，即保持有标记和培养基的一面向上。8.将所有平皿（包括空白和环境对照）置于551（注：培养温度针对特殊情况可以特殊对待，但各处统一）的恒温培养箱内，保温培养60-62小时。9.在“微生物检验操作表”中记录保温时间。D、菌落计数计数原则同菌落总数。计数时认准耐热芽孢菌落，必要时要镜检。记录在“微生物检验操作表”中。检验结果=（平行样品菌落数之和/2）稀释倍数。记录在“微生物检验操作表”中。计数结果在100以内，按实际计数报告；100至10000的，按两位有效数字报告样品只做原液时计数结果在100以外，按实际计数报告。四、霉菌、酵母菌

9、的检测（依据国标GB/T 4789.15-2003）（一）概念：指食品检样中经过处理，在一定条件下培养所得的1g或者1ml检样所得的霉菌、酵母菌的菌落总数。（二）培养基：虎红营养琼脂(孟加拉红培养基):蛋白胨 5g葡萄糖 10g磷酸二氢钾 1g硫酸镁（MgSO47H2O） 0.5g琼脂 20g 1/3000孟加拉红溶液 100ml蒸馏水 1000ml氯霉素 0.1g将上述各成分加入蒸馏水溶解后，再加孟加拉红溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装1210C灭菌20min。（注：现化验室用直接配制好的虎红营养琼脂混合物，30g加入1000ml煮沸的蒸馏水中，溶解。）（三）检测步骤：1.样

10、品处理 ：（1）以无菌操作用称取试样25ml(g)样液注入含有225ml灭菌水的具塞锥形瓶中，即为1：10稀释液。（1） 用灭菌吸管吸取1：10稀释液10 ml注入灭菌试管中，另用1ml灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。（2） 用灭菌吸管吸取1：10稀释液1 ml注入含有9ml灭菌水的试管中，即为1：100稀释液。（3） 按上述操作做10倍递增稀释液每稀释一次换一根1ml吸管。2.接种培养：（1） 选择三个（样品中霉菌酵母菌含量极少时也可选两个，但需要保留相应对比数据）合适稀释度，用无菌管吸取1ml于灭菌平皿中，每个稀释度作2个平皿。（2）将凉至45。C左右的虎红营养琼脂培养基注入平

11、皿中约15ml，待凝固后，倒置于2528。C培养箱中，3天后观察镜检，共培养观察5天。3.计算方法:（1）菌落形态：A霉菌：毛状，蜘蛛网状，棉絮状，有多种颜色。 B酵母菌：菌落光滑湿润，白或乳白色，较大，时间长表面有皱缩。（2）记数：通常选择菌落数在10-150之间的平皿进行计数,同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每克(或毫升)检样中所含霉菌和酵母菌.稀释度选择和菌落报告方式可参考GB/T4789.2-2003。五、乳酸菌的检测(依据国标GB/T 4789.35-2003)（一）定义：指一群分葡萄糖，乳糖产生乳酸，需氧或兼性厌氧，无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性无芽孢杆菌，球菌

12、。作用：1.刺激胃肠分泌活动2.增加胃肠蠕动3.胃肠酸碱平衡4.抑制胃肠道腐败菌的生长5.预防、治疗胃肠道病种类：乳酸链球菌，乳酸杆菌（二）培养基：1.改良MC培养基:大豆蛋白胨 5 g 葡萄糖 20g酵母浸膏 5 g 乳糖 20g牛肉浸膏 5 g 碳酸钙 10g琼脂 15 g 1%中性红溶液 5ml硫酸多粘菌素B（酌情而加）10万IU 蒸馏水 1000ml将前七种成分加入蒸馏水中，加热溶解，调PH=6，加入中性红溶液。分装烧瓶，高压灭菌1210C 15-20min。临用时加热溶化琼脂，冷至50，酌情加或不加硫酸多粘菌素B（检样有胖听或开罐后有异味等疑有杂菌污染时，可加多粘菌素B，混匀后使用）

13、。（注：现化验室用直接配制好的改良MC混合物， 72g 加入1000 ml煮沸的蒸馏水中，溶解。）2.改良番茄汁培养基: （改良TJA培养基）番茄汁 50 ml 葡萄糖 2g酵母抽取液 5 g 乳糖 20g牛肉膏 10 g 磷酸氢二钾 2g琼脂 15 g 吐温50 1g乙酸纳 5 g 蒸馏水 1000ml调PH=6.80.2 1210C灭菌15-20min。（一） 检测步骤：1.样品处理和接种培养：基本同于菌落总数的检测，不同的是选择2-3个适宜稀释度，所用培养基是凉至45。C左右的改良MC培养基，待凝固后，倒置于36。C +1的培养箱中，培养72+3小时后计数。2.菌落形态：皿底呈粉红色，菌

14、落呈红色，较小，菌落边缘有乳晕圈。菌态改良TTA改良MC杆菌平四底黄色，菌落中均大小，微白色，湿润，边缘不太齐，3mm1mm,棉絮状。平四底粉红色，菌落较小,圆形,红色，边缘似星状。2mm1mm,周边有淡晕环球菌四底黄色，菌落光滑。湿润，微白色，边缘整齐四底粉红色，菌落较小圆形红色，边缘整齐，有淡晕环（五）菌落计数：1. 选30300间的平板计数，同菌落总数。2. 选5个菌落作证实试验革兰氏染色G+无芽胞 过氧化氢酶G 观察是否淡晕环3. 计算：35取5个有4个相同 354/5=28 再乘以稀释倍有选举权报数。六、嗜冷菌的检测：同冰淇淋微生物检验方法,见119页。七、牛乳美兰还原试验（依据国标GB 6914-1986）（一）原理牛奶中的微生物分泌出还原酶，使美兰还原而褪色，还原反应的速度和所存在的细菌数量有关，根据美兰退色的时间估计牛乳中的细菌总数来评定牛乳的品质。注：亚甲蓝的配制：1.GB 6914-19