动物组织学与胚胎学陈兵绪论.docx

1、动物组织学与胚胎学陈兵绪论 动物组织学与胚胎学（陈兵）绪论 动 动 物 组织学与胚胎学 陈 陈 兵 扬州大学比较医学中心 20079 绪 绪 论 一、组织学与胚胎学的研究内容 组织学与胚胎学包括组织学和胚胎学两门学科，所研究的动物以家畜和家禽为主，兼顾宠物、经济动物和部分实验动物。 （一）、组织学(Histology )： 是研究 正常机体 微细结构及 功能关系的科学。 与解剖学相比，两者均属于形态学范畴，但比解剖学研究得更仔细、深入。 解剖学研究手段主要通过肉眼，而组织学必须借助一定的工具显微镜(光镜、电镜)。 随着研究的深入已超出形态学范畴，并形成机能组织学。 （解剖学主要用刀、剪等解剖的

2、方法来观察研究各器官的大体形态结构。 在此基础上，组织胚胎学则以显微镜为工具，研究器官的微细结构及其发生发育过程。 通过学习，将使我们对形态结构的认识更加精细，更加深刻。 因此，可以认为组织胚胎学是解剖学的延续和深化。 ） 研究内容包括细胞学、基本组织学和器官系统组织学三大部分。 细胞:是机体形态结构的基本单位，是新陈代谢、生长发育和增殖分化的结构基础。 组织:是由许多在结构和功能上密切相关的细胞，借细胞间质结合在一起所构成的细胞群体。 四大基本组织(上皮组织、结缔组织、肌组织、神经组织) 器官:是由几种不同的组织按一定的规律结合而成，每一器官各有一定的形态结构和特定的生理机能。 系统:由许多

3、功能相关的器官联合在一起构成, 能完成连续的生理功能。 （二）、胚胎学(Embryology )： 是研究机体发生及发育规律的科学。 胚胎学是研究胚胎发育过程，包括胚胎的形态变化发生原理以及影响胚胎发育的因素，从而认识胚胎发生规律的一门科学。 简言之，胚胎学是研究个体发生过程和规律的科学。 即受精卵到形成个体的全过程，包括胚胎发育前期和胚胎发育期。 （三）、组织学与胚胎学之间的关系： 组织学与胚胎学是两门密切关联的学科，它们都以细胞学为基础，都以用显微镜观察细胞、组织和器官为主要研究方法。 组织学与胚胎学发展历程中，两者研究内容相互交叉，相互推进，在胚胎学研究中用到组织学的知识，对胚胎学的研究

4、又促进了组织学的发展。 不少学者兼有组织学与胚胎学的研究成果，在我国将组织学与胚胎学列为一门课程。 二、组织学发展简史 ） （一）、 细胞 的发现 在 1665 年（17 世纪），英国学者虎克（Robert Hooke）用自制的显微镜（放大倍数 40140），观察软木（栎树皮）薄片，观察到许多小室，他称之为细胞（cellar 拉丁文）。 （但实际上观察到的只是植物细胞的细胞壁）。 不久荷兰学者列文虎克（A.V.Leeuwen Hoek）用设计较好的显微镜，观察了许多植物的活细胞与原生动物。 ） （二）、 细胞学说的提出 到 19 世纪 30 年代，德国植物学家施莱登与动物学家施旺共同提出了一切

5、动植物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物的基本单位的细胞学说，与焦耳用实验确立的能量守恒定律（热力学第一定律）、达尔文的进化论 并恩格斯列为19 世纪的三大发明。 （三）、 组织学创立初期 以后随着光学仪器、机械工业、染色化学的发展，出现的发大倍数较高的显微镜、能把切片切的很薄的切片机以及多种染料。 （四）、 现代组织学发展 20 世纪 40 年代，电子显微镜问世，经过不断的改进，如今可将标本放大几十万倍到上百万倍。 近 30 年来，新的技术和方法不断涌现并应用于组织学，如组织培养术、细胞融合术、免疫组织化学和免疫细胞化学术、放射自显影术、荧光和激光术、原位杂交术、图像分析和立体计量术等。 这

6、些技术的运用，使研究内容不断充实，研究领域不断扩大，因而出现了各学科间基本理论互相渗透，基本技术互相引用、促进，关系日益密切。 三、组织胚胎学研究方法 常用计量单位： 1mm=1000um 1um=1000nm 问 问 题 解决方法 观察对象太小 放大 显微镜 观察对象不透光 制成薄片 观察对象无色，无反差 染色（HE 染色） （一）、一般光学显微镜术（light microscope, LM ） 光镜技术是组织学研究中最为常用的技术，在光镜下看到的结构称为显微结构(光镜结构)，光学显微镜的分辨率为 0.2um，最大放大倍数 10001500 倍（有效放大倍数，如果继续通过光学手段放大也不会得

7、到有意义的信息，因此称为空放大），实验用 400 倍。 分辨率为一定范围内完全区分清楚两点的最短距离。 在组织切片制作中，最为常用的技术为石蜡切片技术，基本包括以下几个主要步骤： 取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、封片等。 1 、 、取材： 从人体或动物身上取出所需要的器官材料。 材料要求新鲜。 材料大小一般在 33-35mm。 2 、 、固定： 将取出的材料立即投入固定液内，使组织中的蛋白质迅速凝固，目的是防止组织腐败和自溶，使它保持原有的结构。 常用的固定液有 10%福尔马林。 固定时间需 24 小时左右。 3 、石蜡包埋： （1）脱水： 从低浓度酒精逐渐递升到高浓度酒

8、精，即由 50%、70%、80%、95%酒精各置 1224 小时，因 100%酒精有脆化组织作用，故放置时间不宜太长，放 23 小时即可。 然后放入二甲苯加酒精内半小时。 （2）透明： 放入二甲苯，直至标本透明为止，时间约半小时。 （3）浸蜡： 将材料移置石蜡内，放入 60温箱内，时间约 30 分钟，然后移入石蜡、，使石蜡逐渐透入组织。 每级时间约 1 小时内。 （4）包埋： 将溶解的石蜡倒入金属框或纸盒内，然后将浸蜡组织埋于金属框中央，待冷却后即成坚硬的蜡块。 4 、切片： （1）将标本蜡块装在切片机上，切成 57 微米的薄片，然后把切片放在温水皿中展开。 （2）将展开的组织切片移在载玻片上

9、，放在 40温箱中 24 小时，烘干。 5 、染色： 增加细胞和组织中各种结构间的色彩对比度，便于镜下观察。 （1）脱蜡： 将切片放入二甲苯内 510 分钟。 （2）脱二甲苯： 依次置 100%、95%、80%、70%酒精内，各级 5 分钟，然后移入蒸馏水。 （3）染苏木精： 用 Harris 氏苏木精液染细胞核 10 分钟，再用 0.5%盐酸酒精分色，约 30 秒钟，流水冲洗 1 小时以上。 （4）染伊红： 先把切片用 50%、70%80%酒精各脱水 5 分钟，再用 0.5%饱和酒精伊红溶液 1 分钟，染细胞质。 （5）透明： 95%、100%酒精，每级置 10 分钟。 6 、封片： 切片上

10、滴以中性树胶，然后覆上盖玻片，标本即可长期保存。 染色方法： 没有通用的染料，最常用的苏木精(hematoxylin，H)和伊红(eosin，E)，简称 HE 染色。 苏木精： 为碱性染液，使细胞核内的染色质和细胞质内的核糖体等物质染成蓝紫色，该物质称为具有嗜碱性(basophilia)。 伊 红： 为酸性染液，可使细胞质内的普通蛋白和胶原纤维等物质染成粉红色，该物质称为具有嗜酸性(acidophilia)。 中性 neutrophilia)： 若与两种染料的亲合力均不强的。 硝酸银染色( 银染) 亲银性(argentaffin)： 银染法中有些组织结构可直接使硝酸银还原而显示，称此为亲银性。

11、 嗜银性(argyrophilia)： 有些结构无直接还原作用，需加入还原剂方能显色，称此为嗜银性。 异染性： 细胞和组织用某些碱性染料染色时，其染色结果与染料的原有颜色不同。 如甲苯胺蓝（蓝色染料）染肥大细胞，肥大细胞颗粒呈紫红色。 其他制片技术： 其他制片技术： 冰冻切片技术： 新鲜组织块立即投到液氮内，然后在冷冻切片机上制片。 优点： 制片迅速，细胞内酶的活性保存较好，可以用于组织化学染色的研究。 涂片： 血细胞、分离细胞或脱落细胞可直接涂在玻片上。 铺片： 疏松结缔组织可撕成薄片铺在玻片上。 磨片： 牙和骨等坚硬组织可磨成薄片。 ( 二) 电子显微镜（electron microsco

12、pe, EM ）技术 电镜以电子束代替了光镜、分辨率可达 0.2nm, 可放大几万倍至几十万倍,镜下结构称超微结构。 根据分辨率、放大倍数及功能等不同可分为两种，透射电子技术与扫描电镜技术 1、透射电镜 （transmission electron microscope ，TEM ）技术 用于观察组织、细胞内部超微结构，分辨率 0.2nm。 标本制备： 固定 （戊二醛等）包埋（环氧树脂） 切片（50-80nm) 染色（醋酸铀和柠檬酸铅等重金属盐） 电子密度高： 被重金属深染呈黑色的部位，称电子密度高。 电子密度低： 被重金属浅染的部分称电子密度低。 2、扫描电镜 （scanning elect

13、ron microscope ，SEM)技术 特点： 用于观察组织表面的立体结构，分辨率 5-7nm（低），但立体感强。 （三）其它技术 组织化学术，放射自显影术，图像分析术，细胞培养和组织培养技术 四、组织学与胚胎学的地位及学习方法 （一） 组织学与胚胎学在畜牧兽医中的地位 组织学与胚胎学是动物科学与动物医学专业专业中一门专业基础课，是建立在动物学 、解剖学等学科基础之上，是学习病理 、产科 、繁殖学等后续课程的基础。 （二）组织学与胚胎学的学习方法 1.理论和实习密切联系 2.结构与功能的关系 每种细胞、组织和器官均有一定的形态结构特点，并与其功能有着密切关系。 如粗面内质网与高尔基体发达细胞，可与蛋白合成与分泌联系。 3.断面和立体的关系（不能以点代面、以面代全） 在显微镜下观察的组织切片都是结构断面的形态。 由于所切的部位不同，在一个细胞某断面可见细胞核，在某断面见不到细胞核。 又如身体内许多管状的器官，由于所切方位不同，往往呈完全不同的形态。 因此在观察切片上的形态结构时，要考虑断面和立体的关系。 4.从静态结构了解动态结构的变化 5.分析比较。 纵横联系，融会贯通 五、教学内容 1 、细胞学基础 2 、组织 3 、器官与系统 4 、胚胎学