心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响.docx

1、心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响【摘要】 目的观察中药心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响，探讨其对缺血心肌可能的保护机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组和中剂量组，每组12只。模型组及中药组采用冠状动脉结扎法制作心肌梗塞模型。中药高剂量组和中剂量组( gkg-1d-1)给予中药心复康水煎剂灌胃，假手术组和模型组每天等量生理盐水灌胃。给药4周后处死大鼠，通过免疫组化方法，测定血管内皮细胞粘附分子CD31的表达以了解缺血心肌血管新生情况，检测血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子的蛋白表达情况。结果中药高剂量组C

2、D31的表达明显高于模型组，中药组VEGF及bFGF的表达量均明显高于模型组。结论心复康通过上调VEGF和bFGF的表达，能够有效促进血管新生，改善缺血心脏功能，挽救缺血的心肌。【关键词】 心复康；心肌梗塞；血管新生Abstract：ObjectiveTo study the effect of Xinfukang on angiogenesis after myocardial infarction (MI) in rats. MethodsMyocardial infarction was induced by ligating the descending left coronary a

3、rtery in male rats. Twenty four hours later ,48 survied rats with AMI were randomly divided into myocardial infarction control group, sham-operated group, Xinkukang middle dose group and Xinfukang high dose group. After 4 weeks of therapy，cardiac tissue section was observed and the expression of CD3

4、1，VEGF，bFGF was detected by immunohistochemistry. ResultsCompared with sham operated, Xinfukang high dose group could enhance expression of CD31,VEGF,bFGF. ConclusionXinfukang can enhance angiogenesis after MI in rats and improve ischemia cardiac function .Key words：Xinfukang ；Myocardial infarction

5、；Angiogenesis 寻找冠心病心肌缺血后血运重建的方法以减轻心肌缺血症状和改善心肌供血情况，是目前研究的热点，中医药在这方面有其独到之处1，中药复方心复康在临床运用时有良好的临床效果，其对于心肌保护作用可能与促进缺血心肌的血管新生有关。本研究试图借助大鼠心肌梗塞模型，观察中药心复康对缺血心肌新生血管以及内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 的影响，探讨其对心肌梗塞大鼠缺血心肌的保护机制。1 器材与方法1 动物及试剂和仪器Wistar雄性大鼠80只，体重(20020) g左右，购自军事医学科学院第四研究所；CD31兔源性多克隆抗体、VEGF 兔源性多克隆抗体、

6、bFGF兔源性多克隆抗体均购自天津联星试剂公司；中药心复康由西洋参、白术、枸杞、土鳖虫、女贞子等组成，由天津中医药大学第一附属医院制剂室提供；图像分析系统(Image Pro 美国)。2 动物模型的建立、分组和处理实验动物用乙醚全身麻醉后，进行常规被皮消毒，于左胸部第四肋间切开皮肤，钝性分离肌肉压右胸，挤出心脏，于肺动脉圆锥与左心耳间、距左冠脉起源23 mm 处，用带0 号丝线弯针结扎冠状动脉，通过观察左室表面局部发绀和心电图S-T段呈单向曲线，标志结扎成功2,3。随后将心脏送回胸腔，排出胸腔内空气，缝合切口，局部予青霉素注射预防感染，假手术组穿线但不结扎。除去在术中死亡的大鼠，手术后存活的大

7、鼠随机分组，分为高剂量心复康组、中剂量心复康组，模型组及假手术组，每组可分得12只。术后每天定时灌胃，高剂量心复康组给予心复康81 gkg-1d-1和中剂量心复康组给予心复康 gkg-1d-1，假手术组和模型组给予等量的生理盐水。3 标本留取和处理28 d后颈椎脱臼处死动物，取出心脏并用冰生理盐水洗净，剪除大血管及附着的结缔组织，称重放入10%中性甲醛内, 用于石蜡包埋切片。4 指标检测 计数新生血管数CD31CD31是为内皮细胞的特异性功能标志，经DAB染色可特异性着色血管内皮细胞，通过观察CD31表达可判定新生血管的情况。血管内皮细胞均被染成黄、棕色。低倍光学显微镜(100)下找到血管密度

8、较大区域，再转到高倍视野(400)下精确计数单位面积微血管数量。随机测定8个视野，取其均值作为测定值。 用病理图像分析仪测VEGF和bFGF平均光密度指标判定标准：心肌组织中VEGF 表达：以心肌细胞胞浆内或细胞外基质出现棕黄色颗粒为阳性判定标准。bFGF的表达：阳性信号存在于心肌梗塞灶、边缘区内尚存的心肌细胞、血管内皮细胞及骨髓干细胞内，镜下呈棕黄色为阳性细胞。免疫组化阳性反应强度，用图像分析系统进行定量分析。阳性反应强度用IOD 值表示，IOD值=阳性反应面积/平均光密度。5 统计学方法所有数据以s表示, 数据应用 软件包单因素ANOVA( 方差分析) 方法进行差异显着性检验。 有统计学意

9、义。2 结果心复康对血管新生数目CD31表达的影响模型组CD31阳性细胞数量较假手术组表达升高，高剂量心复康组CD31阳细胞数量高于模型组，且有统计学差异，中剂量心复康组CD31阳性细胞数较假手术组升高，但与模型组比较，无统计学差异。结果见表1。心复康对心肌组织VEGF和bFGF表达的影响与假手术组比较，模型组VEGF和bFGF表达值均升高，有统计学意义；与模型组比较，中药组VEGF的表达均升高，且高剂量组表达要高于中剂量心复康组；与模型组比较，高剂量心复康组bFGF的表达升高，有统计学意义。见表1。表1 4组心肌细胞CD31，VEGF和bFGF表达数值(略)3 讨论 心肌梗塞后心肌修复过程与

10、血管状态密切相关，梗塞区内是否有血管迅速生成和(或) 残留血管重新开放对心肌梗塞的预后有十分重要的作用4。所谓促血管新生治疗，即通过某些药物的治疗增加有功能的冠状动脉分支或侧支循环，达到恢复缺血心肌血供、改善患者症状和预后的目的。VEGF是有高度特异性的血管内皮细胞生长刺激因子，能特异性地作用于血管内皮细胞,刺激其增殖,促进侧支血管的形成5。bFGF是一种强血管源性生长因子，可刺激成纤维细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞及神经细胞的生长6。目前，VEGF，bFGF 对血管新生调控的研究备受瞩目，两者对促进血管新生具有协同作用。CD31是血小板内皮细胞黏附分子1，内皮细胞CD31的表达，主要存在

11、于血管内皮细胞的细胞质中，因此可作为鉴定血管内皮细胞的特异性标志，作为定量指标，评价血管新生因子在血管新生过程中的作用是可靠的。 本研究旨在借助心肌梗塞大鼠模型，观察复方心复康对心肌梗死区和周边区VEGF，bFGF 和CD31的影响，探讨中药复方心复康对心肌梗塞大鼠心肌血管新生的作用。结果发现，中药治疗后28 d，中药组CD31染色阳性血管数明显多于假手术组和模型组，且VEGF，bFGF的表达量以高剂量心复康组为最高，VEGF，bFGF 是促血管新生的重要因子，中药心复康能够促进它们的表达，在表达水平具有一定的相关性，在血管生成过程中发挥着重要作用，促进心肌梗塞大鼠缺血心肌血管新生、改善心肌微

12、循环、保护心肌缺血性损伤79。考虑中药心复康保护梗塞心肌的可能机制为：通过上调相关细胞因子如VEGF，bFGF等因子的表达，进而促进内皮细胞的增生，从而促进血管新生，保护缺血心肌10，11。 心肌梗塞属于中医的“胸痹”“厥心痛”的范畴。金匮要略认为胸痹心痛的病机为“阳微阴弦”本虚标实。中药复方心复康以益气养阴，活血化淤为根本大法，方中西洋参甘寒之品，补气养阴、清火生津；鹿衔草甘温补阳，微补肾阳、健脾理气；女贞子辛苦清凉，补中有清，滋而不腻，为补益肝肾之良药；丹参擅长活血化淤，为活血化淤的常用药；川芎味薄而气清，为阴中之阳，故能行血中之气；土鳖虫具破血逐淤之力，其力猛而性温和。本方能够改善心肌梗

13、塞后心肌缺血状况，其可能机制促进了血管新生因子表达改善心肌血液供应。这一结果在冠心病2级预防中具有重要临床意义。【参考文献】 1汪姗姗，李勇，范维琥，等.麝香保心丸对实验性心肌梗塞大鼠心脏的促血管生成作用J.中成药，2002 ，24：446. 2Olivetti G, Capasso J M , Meggs L G, et al. Cellular basis of chronic vent ricular remodeling af ter myocardial infarction in ratsJ. Circ Res ,1991 , 68 : 856.3施新猷. 现代医学实验动物学M.北

14、京:人民军医出版社,2000：462.4Lee SH , Wolf PL , Escudero R , et al. Early expression of angiogenesis factors in acute myocardial ischemia and infarctionJ.N Engl J Med 2000，342(9) 626.5Kalka C , Tehrani H , Laudenberg B , et al. VEGF gene transfer mobilizes endothelial progenitor cells in patients with inoper

15、able coronary diseaseJ. Ann Thorac Surg， 2000，70 (3) 829.6Lee CH , Smits PC. Vascular growth factors for coronary angiogenesisJ. J Interv Cardiol， 2002，15(6) 511 .7Nahrendorf M , Hu K, Hiller K H , et al. Impact of hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibition on left vent ricular remodeling

16、 after myocardial infarctionJ. J Am Coll Cardiol , 2002，40 :1695.8Hayashidani S , Tsut sui H , Shiomi T , et al. Fluvastatin , a 3-Hydroxy 3-Methylglutaryl Coenzyme A Reduc-Tase inhibitor , attenuates left ventricular remodeling and failure af ter experimental myocardial infarctionJ. Circulation , 2

17、002，105 :868.9Bauersachs J, Galuppo P, Fraccarollo D, et al. Imp rovement of left ventricular remodeling and function by hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibition with cerivastatin in ratswith heart failure aftermyocardial infarctionJ.Circulation, 2001，104 (9) :982 .10张春来，许丹，尚小明，等.骨髓间充质干细胞移植对心肌梗塞大鼠血管新生和内皮功能的影响J.中国组织工程研究与临床康复,2007,11(15)：2874.11殷惠军，刘颖，蒋跃绒，等.芪丹液促进大鼠急性心肌梗塞后心肌血管新生的机理研究J.中国中西医结合杂志,2006，26(9)：807.