心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响.docx

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心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响

心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响

【摘要】　　目的观察中药心复康对心肌梗塞后大鼠心肌血管新生的影响，探讨其对缺血心肌可能的保护机制。

方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组和中剂量组，每组12只。

模型组及中药组采用冠状动脉结扎法制作心肌梗塞模型。

中药高剂量组和中剂量组（g·kg-1·d-1）给予中药心复康水煎剂灌胃，假手术组和模型组每天等量生理盐水灌胃。

给药4周后处死大鼠，通过免疫组化方法，测定血管内皮细胞粘附分子CD31的表达以了解缺血心肌血管新生情况，检测血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子的蛋白表达情况。

结果中药高剂量组CD31的表达明显高于模型组，中药组VEGF及bFGF的表达量均明显高于模型组。

结论心复康通过上调VEGF和bFGF的表达，能够有效促进血管新生，改善缺血心脏功能，挽救缺血的心肌。

【关键词】心复康；心肌梗塞；血管新生

　　Abstract：

ObjectiveTostudytheeffectofXinfukangonangiogenesisaftermyocardialinfarction（MI）inrats.MethodsMyocardialinfarctionwasinducedbyligatingthedescendingleftcoronaryarteryinmalerats.Twentyfourhourslater,48surviedratswithAMIwererandomlydividedintomyocardialinfarctioncontrolgroup,sham-operatedgroup,XinkukangmiddledosegroupandXinfukanghighdosegroup.After4weeksoftherapy，cardiactissuesectionwasobservedandtheexpressionofCD31，VEGF，bFGFwasdetectedbyimmunohistochemistry.ResultsComparedwithshamoperated,XinfukanghighdosegroupcouldenhanceexpressionofCD31,VEGF,bFGF.ConclusionXinfukangcanenhanceangiogenesisafterMIinratsandimproveischemiacardiacfunction.

　　Keywords：

Xinfukang；Myocardialinfarction；Angiogenesis

　　寻找冠心病心肌缺血后血运重建的方法以减轻心肌缺血症状和改善心肌供血情况，是目前研究的热点，中医药在这方面有其独到之处［1］，中药复方心复康在临床运用时有良好的临床效果，其对于心肌保护作用可能与促进缺血心肌的血管新生有关。

本研究试图借助大鼠心肌梗塞模型，观察中药心复康对缺血心肌新生血管以及内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响，探讨其对心肌梗塞大鼠缺血心肌的保护机制。

　　1器材与方法1动物及试剂和仪器Wistar雄性大鼠80只，体重（200±20）g左右，购自军事医学科学院第四研究所；CD31兔源性多克隆抗体、VEGF兔源性多克隆抗体、bFGF兔源性多克隆抗体均购自天津联星试剂公司；中药心复康由西洋参、白术、枸杞、土鳖虫、女贞子等组成，由天津中医药大学第一附属医院制剂室提供；图像分析系统（ImagePro美国）。

2动物模型的建立、分组和处理实验动物用乙醚全身麻醉后，进行常规被皮消毒，于左胸部第四肋间切开皮肤，钝性分离肌肉压右胸，挤出心脏，于肺动脉圆锥与左心耳间、距左冠脉起源2～3mm处，用带0号丝线弯针结扎冠状动脉，通过观察左室表面局部发绀和心电图S-T段呈单向曲线，标志结扎成功［2,3］。

随后将心脏送回胸腔，排出胸腔内空气，缝合切口，局部予青霉素注射预防感染，假手术组穿线但不结扎。

除去在术中死亡的大鼠，手术后存活的大鼠随机分组，分为高剂量心复康组、中剂量心复康组，模型组及假手术组，每组可分得12只。

术后每天定时灌胃，高剂量心复康组给予心复康81g·kg-1·d-1和中剂量心复康组给予心复康g·kg-1·d-1，假手术组和模型组给予等量的生理盐水。

3标本留取和处理28d后颈椎脱臼处死动物，取出心脏并用冰生理盐水洗净，剪除大血管及附着的结缔组织，称重放入10%中性甲醛内,用于石蜡包埋切片。

4指标检测计数新生血管数CD31CD31是为内皮细胞的特异性功能标志，经DAB染色可特异性着色血管内皮细胞，通过观察CD31表达可判定新生血管的情况。

血管内皮细胞均被染成黄、棕色。

低倍光学显微镜（100×）下找到血管密度较大区域，再转到高倍视野（400×）下精确计数单位面积微血管数量。

随机测定8个视野，取其均值作为测定值。

用病理图像分析仪测VEGF和bFGF平均光密度指标判定标准：

心肌组织中VEGF表达：

以心肌细胞胞浆内或细胞外基质出现棕黄色颗粒为阳性判定标准。

bFGF的表达：

阳性信号存在于心肌梗塞灶、边缘区内尚存的心肌细胞、血管内皮细胞及骨髓干细胞内，镜下呈棕黄色为阳性细胞。

免疫组化阳性反应强度，用图像分析系统进行定量分析。

阳性反应强度用IOD值表示，IOD值=阳性反应面积/平均光密度。

5统计学方法

　　所有数据以±s表示,数据应用软件包单因素ANOVA（方差分析）方法进行差异显着性检验。

有统计学意义。

　　2结果

　　心复康对血管新生数目CD31表达的影响模型组CD31阳性细胞数量较假手术组表达升高，高剂量心复康组CD31阳细胞数量高于模型组，且有统计学差异，中剂量心复康组CD31阳性细胞数较假手术组升高，但与模型组比较，无统计学差异。

结果见表1。

　　心复康对心肌组织VEGF和bFGF表达的影响与假手术组比较，模型组VEGF和bFGF表达值均升高，有统计学意义；与模型组比较，中药组VEGF的表达均升高，且高剂量组表达要高于中剂量心复康组；与模型组比较，高剂量心复康组bFGF的表达升高，有统计学意义。

见表1。

表14组心肌细胞CD31，VEGF和bFGF表达数值（略）

　　3讨论

　　心肌梗塞后心肌修复过程与血管状态密切相关，梗塞区内是否有血管迅速生成和（或）残留血管重新开放对心肌梗塞的预后有十分重要的作用［4］。

所谓促血管新生治疗，即通过某些药物的治疗增加有功能的冠状动脉分支或侧支循环，达到恢复缺血心肌血供、改善患者症状和预后的目的。

VEGF是有高度特异性的血管内皮细胞生长刺激因子，能特异性地作用于血管内皮细胞,刺激其增殖,促进侧支血管的形成［5］。

bFGF是一种强血管源性生长因子，可刺激成纤维细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞及神经细胞的生长［6］。

目前，VEGF，bFGF对血管新生调控的研究备受瞩目，两者对促进血管新生具有协同作用。

CD31是血小板内皮细胞黏附分子1，内皮细胞CD31的表达，主要存在于血管内皮细胞的细胞质中，因此可作为鉴定血管内皮细胞的特异性标志，作为定量指标，评价血管新生因子在血管新生过程中的作用是可靠的。

　　本研究旨在借助心肌梗塞大鼠模型，观察复方心复康对心肌梗死区和周边区VEGF，bFGF和CD31的影响，探讨中药复方心复康对心肌梗塞大鼠心肌血管新生的作用。

结果发现，中药治疗后28d，中药组CD31染色阳性血管数明显多于假手术组和模型组，且VEGF，bFGF的表达量以高剂量心复康组为最高，VEGF，bFGF是促血管新生的重要因子，中药心复康能够促进它们的表达，在表达水平具有一定的相关性，在血管生成过程中发挥着重要作用，促进心肌梗塞大鼠缺血心肌血管新生、改善心肌微循环、保护心肌缺血性损伤［7～9］。

考虑中药心复康保护梗塞心肌的可能机制为：

通过上调相关细胞因子如VEGF，bFGF等因子的表达，进而促进内皮细胞的增生，从而促进血管新生，保护缺血心肌［10，11］。

　　心肌梗塞属于中医的“胸痹”“厥心痛”的范畴。

《金匮要略》认为胸痹心痛的病机为“阳微阴弦”本虚标实。

中药复方心复康以益气养阴，活血化淤为根本大法，方中西洋参甘寒之品，补气养阴、清火生津；鹿衔草甘温补阳，微补肾阳、健脾理气；女贞子辛苦清凉，补中有清，滋而不腻，为补益肝肾之良药；丹参擅长活血化淤，为活血化淤的常用药；川芎味薄而气清，为阴中之阳，故能行血中之气；土鳖虫具破血逐淤之力，其力猛而性温和。

本方能够改善心肌梗塞后心肌缺血状况，其可能机制促进了血管新生因子表达改善心肌血液供应。

这一结果在冠心病2级预防中具有重要临床意义。

【参考文献】

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