圆二色谱仪使用.docx

1、圆二色谱仪使用圆二色谱仪使用手册实验前请先阅读第一部分注意事项2011年4月6日整编河北大学理化中心一、 注意事项 二、 光源的选择 三、 MOS 450波长的校正四、 电压的调节 五、 MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程 六、 MOS 450-SFM 300动力学操作方法 一、注意事项1、滴定及变温实验时，需要磁子搅拌。实验结束时首先拔掉搅拌电源。在样品池内无磁子的情况下搅拌器空转会烧毁控温元件。2、光源(也就是氙灯或汞氙灯)不可频繁开关。举例而言，如果马上不用仪器，但半个小时后需要使用仪器，就不要为了节约光源寿命而将光源关闭。短时间内频繁开关光源反而会缩短光源寿命。3、光电倍增管移动时

2、(比如从圆二色模式换为荧光模式)，注意用软件将Hv（高压）关闭。4、扫描速度在0.5-5s/nm。使用手册上写的扫描速度有误，特别注意不要低于0.5秒/nm,过快的扫描速度易造成calibration移位。5、如需用到emission单色器，就是那个需要用光纤连接的单色器，扫描速度要大于1s/nm,连0.5s/nm都不能用。6、PMT的HV不要超过1000V.7、使用控温附件进行变温实验时，一定要将地上的那个水浴恒温槽打开，水槽温度设为20度以下即可。8、TCU上设置为remote; Power supply设置为ARC.9、仪器运行过程中，更换样品时，shutter最好关闭。二、光源的选择1

3、、电源：图1中的Lamp power supply处有Xe（红色）、Xe(Hg)（红色）、零线（黑色）三个插孔。零线插头为黑色，直接插到黑色的零线插孔中。火线插头为红色，在做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时插在Xe（红色）插孔中，在做快速动力学测量的时候插在Xe(Hg)插孔中。2、光源选择：图2中的Vertical setting部位下方的底座上有Xe、Xe(Hg)两个标示前后排列。手动松开中间的大圆头Screws(图2中)，可以拉出或推进Vertical setting。当Vertical setting的金属头通过前后移动到下方的哪个标示位置上，也就是那个标示所示的灯正对着光路，为测试用光源

4、。做快速动力学测量的时候选Xe(Hg)，做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时选Xe，最后再旋紧中间的大圆头Screws。注：Xe（Hg）灯中的Hg元素有一些很强的特征谱线，加强了Xe元素发光的强度，对于动力学测量要求一个波长的光源能量要强，才能测量较为精确的谱图。而对于光谱扫描，单独的Xe元素谱线较为平滑，光源对扫描的影响较小。 图1 图2三、MOS 450波长的校正仪器使用一段时间后需要对仪器进行波长校正，以保证测量的准确性，波长校正的操作步骤如下：1、 确认样品仓中没有任何样品和样品池。2、 根据光源选择的操作说明，将光源换为Xe（Hg）灯。3、 打开ALX-250、MM-450和PMS-45

5、0电源。4、 点击电脑中的BioKine软件图标，进入测量主界面。5、 在主界面选择Device菜单的Scanning spectrometer命令，进入光谱扫描界面。点击按钮设置参数，在光谱测量模式里选择Fluorescence模式，波长扫描范围200-750nm，进行光谱扫描，得出如图1所示谱图。此时检测器位置为与入射光成180度的位置，不用改为荧光的位置。图16、 谱图在546nm处应该出一个峰，比较546nm处的峰是否有偏差。如果超出+/-1nm的范围，需要进行波长校正。7、 举例说明，如果在550nm处出峰，波长偏了4nm，那么就在图2所示主界面左下栏的Ex处填入550nm，按回车键

6、。图28、 点击图2主界面Install菜单的Spectrometer advanced settings命令，出现图3所示的窗口，点击Excitation下方的Calibration按钮，进入波长校正界面，如图4。图3图4在图4所示窗口里的Current wavelength处输入546，点击OK按钮，进行波长校正。Xe 灯校准波长467nm；Xe(Hg)灯校准波长546nm。操作完以上各步骤，波长校正完成。可进行正常的测量操作。四、电压的调节1. 选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150 W；2. 在打开ALX-250的同时，打开MM-450电源，机器

7、预热10min；3. 确保空仓（样品池中无待测样品）。狭缝设置为2nm4. 点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。点击Install 的Device，出现图1 ，只选中MOS-450，点击OK。图1进入图2界面，点击，图2输入EX值200nm，打开shutter，Hv on，Auto值为200左右。五、MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程1、选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150 W；2、在打开ALX-250的同时，打开仪器电源，先开MM-450，再开PMS-450。机器预热10min；3、 清洗好样品池，添加待测样品的空白溶液（如水

8、或缓冲盐）到样品池中。4、 安装上样品池盖。5、 如果测量波长小于210nm，需要对仪器进行氮气吹扫处理。打开氮气，调整流量计流速为1000L/h，通氮气几分钟。确认电源线插在氙灯的位置，并且氙灯已对准光路，具体操作见光源的选择操作说明。然后打开ALX-250光源开关，将氮气流量计流速设为400L/h，查看ALX-250面板显示，当氙灯能量达到150W，氙灯稳定。如果无需氮气吹扫，直接打开ALX-250电源，等待氙灯稳定后进行下一步操作。6、 点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。7、 点击图1主界面的Device/Scanning Spectrometer，进入光谱扫描界面

9、，如图2。 图1 图27. 点击主界面上方的按钮，进行光谱测定参数的设定，如图3。 图3Acquisition mode：选择测量模式CD。Begin(nm)：扫描初始波长End(nm）：扫描结束波长Scan Repeat ：扫描次数Acquisition duration：每个nm的测量持续时间，范围0.5s-20s，此项相当于扫描速度的设定。园二色谱扫描速度不能低于0.5s。使用emission 单色器，扫描速度为1nm/sShutterAutomatic mode：选择Always open，挡板处于始终打开的状态。PM gain*10：当在非常低的信号测量，可选择此项，进行信号的增益。

10、CD parameters：CD的灵敏度，根据信号的振幅设置，有四个不同的选项，1000、300、100和30 mdeg。其他选项根据需要可以选择。以上参数都设置好后，点击OK按钮，参数设置完成，回到主界面。8. 在要测量波长的范围内取一个波长点，输入到图2下方的Ex处，点击Enter键。这时确认按钮变为，然后点击，自动调整HV电压，然后再点击按钮，锁定此电压值。电压值一般小于800V。9. 空白的测量 点击图2主界面Blank spectum区域的Record按钮，记录第一步添加的空白样品谱图，空白谱图显示在主界面中。测量后选择Subtract复选框，将在随后的样品光谱的测量中扣除空白值。1

11、0. 样品的测量 再点击按钮，关闭挡板，取出样品池，将空白样品换成被测样品，然后再放回到样品支架上，盖好样品仓盖。这时再点击，打开挡板。点击图2主界面Acquisition control区域的按钮，记录样品的园二色谱图，显示在图2主界面中。11. 谱图的平滑第十步测量的谱图为样品园二色原始测量图，需要经过平滑处理，得到平滑的曲线图，操作如下：选择主界面Analysis菜单，这时界面变为分析界面，选择Tools菜单下的Smoothing命令，出现平滑的设置界面，选择第二项。 选择平均平滑点数，此数值必须是奇数，然后点击Proceed按钮，这时平滑后的曲线出现在界面中。12. 保存数据选择主界面

12、的File菜单下的Save As，出现图5界面。图5选择要保存文件到哪个文件夹，并给文件命名，选中Save as text，然后点击Save按钮，文件保存到指定的文件夹中。13. 如果对园二色数据需要进行蛋白质二级结构分析，进行如下操作：在BioKine软件中选择File菜单的Load data file命令，打开要进行分析的文件，然后选择File菜单的Exprot data to/Dicroprot file命令，如图6，导出数据文件为Dicroprot的文件。图6出现图7所示界面，选择导出数据要保存的文件夹并命名此导出数据，并根据测量的具体情况填入相应的信息，点击Export按钮，数据导出结束，关闭图7界面。图7 在http:/dicroprot-pbil.ibcp.fr网站上下载蛋白质二级结构分析软件，然后将导出的数据在此软件中打开进行相应的二级结构分析。