圆二色谱仪使用.docx

圆二色谱仪使用.docx

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圆二色谱仪使用

圆二色谱仪

使用手册

实验前请先阅读第一部分注意事项

2011年4月6日整编

河北大学理化中心

一、注意事项

二、光源的选择

三、MOS450波长的校正

四、电压的调节

五、MOS-450圆二色光谱扫描操作规程

六、MOS450-SFM300动力学操作方法

一、注意事项

1、滴定及变温实验时，需要磁子搅拌。

实验结束时首先拔掉搅拌电源。

在样品池内无磁子的情况下搅拌器空转会烧毁控温元件。

2、光源（也就是氙灯或汞氙灯）不可频繁开关。

举例而言，如果马上不用仪器，但半个小时后需要使用仪器，就不要为了节约光源寿命而将光源关闭。

短时间内频繁开关光源反而会缩短光源寿命。

3、光电倍增管移动时（比如从圆二色模式换为荧光模式），注意用软件将Hv（高压）关闭。

4、扫描速度在0.5-5s/nm。

使用手册上写的扫描速度有误，特别注意不要低于0.5秒/nm,过快的扫描速度易造成calibration移位。

5、如需用到emission单色器，就是那个需要用光纤连接的单色器，扫描速度要大于1s/nm,连0.5s/nm都不能用。

6、PMT的HV不要超过1000V.

7、使用控温附件进行变温实验时，一定要将地上的那个水浴恒温槽打开，水槽温度设为20度以下即可。

8、TCU上设置为remote;Powersupply设置为ARC.

9、仪器运行过程中，更换样品时，shutter最好关闭。

二、光源的选择

1、电源：

图1中的Lamppowersupply处有Xe（红色）、Xe（Hg）（红色）、零线（黑色）三个插孔。

零线插头为黑色，直接插到黑色的零线插孔中。

火线插头为红色，在做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时插在Xe（红色）插孔中，在做快速动力学测量的时候插在Xe（Hg）插孔中。

2、光源选择：

图2中的Verticalsetting部位下方的底座上有Xe、Xe（Hg）两个标示前后排列。

手动松开中间的大圆头Screws（图2中），可以拉出或推进Verticalsetting。

当Verticalsetting的金属头通过前后移动到下方的哪个标示位置上，也就是那个标示所示的灯正对着光路，为测试用光源。

做快速动力学测量的时候选Xe（Hg），做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时选Xe，最后再旋紧中间的大圆头Screws。

注：

Xe（Hg）灯中的Hg元素有一些很强的特征谱线，加强了Xe元素发光的强度，对于动力学测量要求一个波长的光源能量要强，才能测量较为精确的谱图。

而对于光谱扫描，单独的Xe元素谱线较为平滑，光源对扫描的影响较小。

图1图2

三、MOS450波长的校正

仪器使用一段时间后需要对仪器进行波长校正，以保证测量的准确性，波长校正的操作步骤如下：

1、确认样品仓中没有任何样品和样品池。

2、根据光源选择的操作说明，将光源换为Xe（Hg）灯。

3、打开ALX-250、MM-450和PMS-450电源。

4、点击电脑中的BioKine软件图标，进入测量主界面。

5、在主界面选择Device菜单的Scanningspectrometer命令，进入光谱扫描界面。

点击

按钮设置参数，在光谱测量模式里选择Fluorescence模式，波长扫描范围200-750nm，进行光谱扫描，得出如图1所示谱图。

此时检测器位置为与入射光成180度的位置，不用改为荧光的位置。

图1

6、谱图在546nm处应该出一个峰，比较546nm处的峰是否有偏差。

如果超出+/-1nm的范围，需要进行波长校正。

7、举例说明，如果在550nm处出峰，波长偏了4nm，那么就在图2所示主界面左下栏的Ex处填入550nm，按回车键。

图2

8、点击图2主界面Install菜单的Spectrometeradvancedsettings命令，出现图3所示的窗口，点击Excitation下方的Calibration按钮，进入波长校正界面，如图4。

图3

图4

在图4所示窗口里的Currentwavelength处输入546，点击OK按钮，进行波长校正。

Xe灯校准波长467nm；Xe（Hg）灯校准波长546nm。

操作完以上各步骤，波长校正完成。

可进行正常的测量操作。

四、电压的调节

1.选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150W；

2.在打开ALX-250的同时，打开MM-450电源，机器预热10min；

3.确保空仓（样品池中无待测样品）。

狭缝设置为2nm

4.点击电脑桌面上的

图标，进入BioKine软件操作主界面。

点击Install的Device，出现图1，只选中MOS-450，点击OK。

图1

进入图2界面

，点击

，

图2

输入EX值200nm，打开shutter，Hvon，Auto值为200左右。

五、MOS-450圆二色光谱扫描操作规程

1、选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150W；

2、在打开ALX-250的同时，打开仪器电源，先开MM-450，再开PMS-450。

机器预热10min；

3、清洗好样品池，添加待测样品的空白溶液（如水或缓冲盐）到样品池中。

4、安装上样品池盖。

5、如果测量波长小于210nm，需要对仪器进行氮气吹扫处理。

打开氮气，调整流量计流速为1000L/h，通氮气几分钟。

确认电源线插在氙灯的位置，并且氙灯已对准光路，具体操作见光源的选择操作说明。

然后打开ALX-250光源开关，将氮气流量计流速设为400L/h，查看ALX-250面板显示，当氙灯能量达到150W，氙灯稳定。

如果无需氮气吹扫，直接打开ALX-250电源，等待氙灯稳定后进行下一步操作。

6、点击电脑桌面上的

图标，进入BioKine软件操作主界面。

7、点击图1主界面的Device/ScanningSpectrometer，进入光谱扫描界面，如图2。

图1图2

7.点击主界面上方的

按钮，进行光谱测定参数的设定，如图3。

图3

Acquisitionmode：

选择测量模式CD。

Begin（nm）：

扫描初始波长

End（nm）：

扫描结束波长

ScanRepeat：

扫描次数

Acquisitionduration：

每个nm的测量持续时间，范围0.5s-20s，此项相当于扫描速度的设定。

园二色谱扫描速度不能低于0.5s。

使用emission单色器，扫描速度为1nm/s

ShutterAutomaticmode：

选择Alwaysopen，挡板处于始终打开的状态。

PMgain*10：

当在非常低的信号测量，可选择此项，进行信号的增益。

CDparameters：

CD的灵敏度，根据信号的振幅设置，有四个不同的选项，1000、300、100和30mdeg。

其他选项根据需要可以选择。

以上参数都设置好后，点击OK按钮，参数设置完成，回到主界面。

8.在要测量波长的范围内取一个波长点，输入到图2下方的Ex处，点击Enter键。

这时确认

按钮变为

，然后点击

，自动调整HV电压，然后再点击

按钮，锁定此电压值。

电压值一般小于800V。

9.空白的测量

点击图2主界面Blankspectum区域的Record按钮，记录第一步添加的空白样品谱图，空白谱图显示在主界面中。

测量后选择Subtract复选框，将在随后的样品光谱的测量中扣除空白值。

10.样品的测量

再点击

按钮，关闭挡板，取出样品池，将空白样品换成被测样品，然后再放回到样品支架上，盖好样品仓盖。

这时再点击

，打开挡板。

点击图2主界面Acquisitioncontrol区域的

按钮，记录样品的园二色谱图，显示在图2主界面中。

11.谱图的平滑

第十步测量的谱图为样品园二色原始测量图，需要经过平滑处理，得到平滑的曲线图，操作如下：

选择主界面Analysis菜单，这时界面变为分析界面，选择Tools菜单下的Smoothing命令，出现平滑的设置界面，选择第二项。

选择平均平滑点数，此数值必须是奇数，然后点击Proceed按钮，这时平滑后的曲线出现在界面中。

12.保存数据

选择主界面的File菜单下的SaveAs…，出现图5界面。

图5

选择要保存文件到哪个文件夹，并给文件命名，选中Saveastext，然后点击Save按钮，文件保存到指定的文件夹中。

13.如果对园二色数据需要进行蛋白质二级结构分析，进行如下操作：

在BioKine软件中选择File菜单的Loaddatafile命令，打开要进行分析的文件，然后选择File菜单的Exprotdatato/Dicroprotfile命令，如图6，导出数据文件为Dicroprot的文件。

图6

出现图7所示界面，选择导出数据要保存的文件夹并命名此导出数据，并根据测量的具体情况填入相应的信息，点击Export按钮，数据导出结束，关闭图7界面。

图7

在http:

//dicroprot-pbil.ibcp.fr网站上下载蛋白质二级结构分析软件，然后将导出的数据在此软件中打开进行相应的二级结构分析。