硕士论文.docx

1、硕士论文文章的问题较多，请进行仔细修改：1.题目与内容不相符，除了做了提取工艺还做了蛋白组成。2.英文摘要错误较多，需重新写。图表的英文翻译错误较多，请核实翻译。3.稿件所研究的方向已有较多报道，请在前言交代最新的研究结果，以及本文的创新点，以及研究意义。4.文中图标的编码顺序错误，请修改。5.稿件研究方法和内容比较粗糙，没有重复试验和数据统计6.电泳图谱模糊不清，且没有标明条带对应的样品。小麦胚芽清蛋白提取工艺及分子量测定摘要：小麦胚芽清蛋白是一种优质蛋白质，为了充分开发利用小麦胚芽资源，通过单因素试验和正交试验对清蛋白提取工艺进行了研究，得到最佳提取条件为粉碎粒度0.125mm，提取温度3

2、0，提取时间30min，提取料液比111，此条件下提取清蛋白占麦胚蛋白29.2%。清蛋白SDS-PAGE凝胶电泳包含7条条带，分子量分别为20.89、28.84、38.02、43.65、51.29、60.26、72.44Ku.此方法实现了对小麦胚芽清蛋白最大程度的提取。关键词：小麦胚芽,清蛋白,提取率,电泳Extraction technique of wheat germ albumin and determination of molecular weightDIAO Da-peng1,HUANG Ji-hong1,2*,lI Jin3,HOU Yin-chen2(1.He,nan Uni

3、versity of Technology,Zhengzhou 450001,China 2. He,nan province Food Industry Research Institution,Zhengzhou 450000, China 3.Henan Caixin company.Dancheng 477150,China)Abstract: Wheat germ albumin is a nice protein. To develop wheat germ deeply, the experiment research its extraction technique by si

4、ngle-factor experiment and orthogonal experiment .The optimal extraction condition is mesh number 0.125mm,temperature 30,time 30min, solid-liquid ratio(g/ml) 111. In this condition,the ratio of extracted wheat germ albumin in wheat germ protein is 29.2%. SDS-PAGE Electrophoresis of albumin contains

5、seven bands. Molecular weights are20.89、28.84、38.02、43.65、51.29、60.26、72.44Ku.By this way, wheat germ albumin is extracted sufficiently.Keywords:wheat germ；albumin；extraction efficiency；electrophoresis小麦胚芽占小麦籽粒的23，是小麦的生命源泉，是整个麦粒营养价值最高的部分1，被营养学家誉为“人类天然的营养宝库”2-3。麦胚中的总蛋白含量高达30左右，是一种完全蛋白，它含有人体必需的8种氨基酸4,

6、5，占总氨基酸的34.746，而且必需氨基酸的相互比值与FAO/WHO颁布的模式基本接近7,8。小麦胚芽各种蛋白质中，清蛋白评分最高，具有最高的蛋白质效率比(PER)、体外消化率(IVPD)和较好的氨基酸组成，是一种优质蛋白质9,10。小麦胚芽虽然具有高的营养价值，但因其高色泽和脂肪酶含量，混入面粉会降低面粉白度，不利于面粉贮藏，在制粉中被去除掉11,12，造成了资源的严重浪费。为充分地开发利用小麦胚芽清蛋白资源，朱科学、纪莹优化了清蛋白提取pH、料水比、温度、时间13，周惠明研究了水溶性蛋白中的糖蛋白性质14-15。本文对小麦胚芽清蛋白提取时的粉碎粒度、料水比、温度、时间进行了研究，并在此基

7、础上制得蛋白含量较高的清蛋白粗粉及精粉，通过SDS-PAGE凝胶电泳测定了组成清蛋白亚基分子量，为进一步开发清蛋白提供了参考。1 材料与方法1.1 实验材料与实验器材新鲜小麦胚芽 河南财鑫集团第二制糖厂;BM523蛋白电泳Marker 生工生物工程有限公司；硫酸铵、冰乙酸、氯化钠、Tris、Acr、Bis、SDS、TEMED、甘氨酸、过硫酸铵、蔗糖、巯基乙醇、溴酚蓝、考马斯亮蓝、甲醇。THZ-100B摇床 上海-恒科学仪器有限公司；L-55台式低速大容量离心机 湖南湘仪实验仪器开发有限公司；XY-200型高速多功能粉碎机 浙江省永康市松青五金工具厂；反渗透膜系统 福建赛普特膜技术有限公司；DY

8、Y-III型电泳槽和DYY-III2稳压稳流电泳仪 北京市六一仪器厂；23-10箱式电阻炉 北京市永光明医疗仪器厂；LGJ-10 台式冷冻干燥机 北京松源华兴科技发展有限公司；索氏提取仪、凯氏定氮仪。1.2 实验方法1.2.1 水分含量测定 按GB 5009.3-20101.2.2 灰分测定 按GB 5009.4-20101.2.3 蛋白质含量测定及提取率计算 蛋白质含量测定 按GB5009.5-2010 蛋白质提取率=提取液中蛋白质含量/小麦胚芽中蛋白含量 1.2.4 油脂含量测定 按GB/T10359-20081.2.5 小麦胚芽灭酶:小麦胚芽放于80烘箱10min灭酶。1.2.6 小麦胚

9、芽脱脂:小麦胚芽粉碎粒度至0.42mm，放入玻璃容器中，按料液比11加入正己烷，保鲜膜封口，浸提4小时，每30min搅拌一次。浸提结束，进行抽滤。抽滤后液体部分蒸发溶剂提油，脱脂麦胚平铺白色瓷盘，放入通风厨内脱溶12小时备用。1.2.7 清蛋白提取实验粉碎粒度对提取率影响：将脱脂麦胚粉（粉碎粒度0.42mm）继续粉碎至粒度0.178、0.125、0.096、0.074mm,按111料液比分别装入500mL三角瓶，调pH7.0。每个三角瓶装胚芽干基40g蒸馏水280mL，于30摇床100r/min提取30min，迅速抽滤，测定滤液蛋白质含量,，计算提取率。温度对提取率影响：取粒度为0.074mm

10、小麦胚芽粉，按111料液比分别装入500mL三角瓶，调pH7.0。每个三角瓶装胚芽干基40g,加蒸馏水280mL，于10,20,30,40,50摇床100r/min提取30min，迅速抽滤，测定滤液蛋白质含量，计算提取率。提取时间对提取率影响：取粒度为0.074mm小麦胚芽粉，按111料液比分别装入500mL三角瓶，调pH7.0。每个三角瓶装胚芽干基40g,加蒸馏水280mL，提取温度30，摇床100r/min，分别提取10,20,30,40,50min，迅速抽滤，测定滤液蛋白质含量，计算提取率。提取料液比对提取率影响：取粒度为0.074mm小麦胚芽粉，按17、19、111、113、115料液

11、比分别装入500mL三角瓶，调pH7.0。每个三角瓶装胚芽干基40g,，加蒸馏水280mL，提取温度30，摇床100r/min,提取30min,迅速抽滤，测定滤液蛋白质含量，计算提取率。1.2.8 正交实验：以粉碎粒度，提取温度，提取时间，提取料液比四因素，设计4因素3水平正交实验。因素与水平见表1：表1 小麦胚芽清蛋白提取工艺正交实验因素与水平表Table 1 Factors and level table of Orthogonal experimental of wheat germ albumin extraction technology水平A粒度/mmB温度/C时间/minD料液比

12、10.12510101:720.09620201:930.07430301:111.2.9 清蛋白粉制作：将清蛋白提取液进一步加工可得两种蛋白含量不同的清蛋白粉：反渗透膜脱盐至5%以下，喷雾干燥，得到清蛋白粗粉；加入一定量硫酸铵，配成硫酸铵饱和溶液，沉淀出清蛋白，4000r/min离心10min后，取沉淀，将沉淀在水中溶解后，用反渗透膜脱盐至5%以下，得到清蛋白浓缩液，冷冻干燥得清蛋白精粉。1.2.10 清蛋白电泳：对清蛋白提取液进行SDS-PAGE凝胶电泳分析，确定其分子量。2 实验结果与分析2.1 新鲜小麦胚芽灭酶脱脂前后成分见表2表2 小麦胚芽成分Table 2 Composition

13、of wheat germ成分水分含量灰分含量油脂含量蛋白含量脱脂前含量10.2%4.1%10%30.5%脱脂后含量11.2%4.5%1.2%33.2%2.2 不同粒度对小麦胚芽蛋白提取率的影响由提取率与粒度曲线图1知，随麦胚粉碎粒度减小，清蛋白提取率增加，是由于粉碎粒度越小，比表面积越大，清蛋白浸出越充分。粒度由0.125mm增大到0.42mm时，提取率下降明显，而由0.074mm增大到0.125mm时，提取率下降不明显。因为粉碎粒度越小，能耗越大，因此选取的粉碎粒度为0.125mm。图1 粒度对提取率影响Fig.1 Inflance of grain size to extraction

14、ratio2.3 不同温度对提取率影响由图2知提取温度从10升至30过程中，提取率显著增加。温度由30继续升高，提取率急剧下降，是因为超过30，接近了清蛋白变性温度，部分清蛋白变性沉淀而留于滤渣中。因此宜选取提取温度30。图2 提取温度对提取率影响Fig.2 Inflance of temprature to extraction ratio2.4 提取时间对提取率的影响图3 提取时间对提取率影响Fig.3 Inflance of time to extraction ratio由图3可知，前30min内，延长提取时间延长，蛋白提取率明显增加，超过30min,，提取时间继续延长，提取率几乎不变

15、。节约时间起见，宜选取提取时间为30min。2.5 料液比对提取率的影响由图4知，料液比由17到111过程中，清蛋白提取率增加明显。料液比继续增加，提取率增加不明显，逐渐保持不变。为节水起见，宜选用料液比111图4 提取料液比对提取率影响Fig.4 Inflance of solid-liquid ratio to extraction ratio2.6 正交实验设计根据表1因素与水平设计L9(34)正交表及实验数据如下：表3 小麦胚芽清蛋白提取工艺正交实验结果Table 3 Orthogonal experimental results of wheat germ albumin extra

16、ction technology 试验号ABCD提取率/%1111122.12122226.63133329.24212326.45223126.86231226.37313226.58321326.79332128.2K178.075.07577.1K279.580.181.379.5K381.383.782.582.2k126.025.025.025.7k226.526.727.126.5k327.127.927.527.4R1.12.92.51.7粒度/mm 温度/ 时间/h 料液比图5 小麦胚芽清蛋白提取正交实验直观图Fig.5 Visualized diagram of Orthog

17、onal experimental of wheat germ albumin extraction technology由正交实验表2和极差直观图5知，对清蛋白提取影响由大到小各因素排序为温度时间料液比粒度。由于粉碎粒度对提取率影响与其它三项相比不明显，且增加粉碎粒度需增加能耗和时间，因此粉碎粒度选择0.125mm。综合以上结果得到清蛋白提取的最佳因素配比为麦胚粉碎粒度0.125mm，提取温度30，提取时间30min，提取料液比111，提取率可达29.2%。2.7 清蛋白粗粉1kg脱脂小麦胚芽制得清蛋白粗粉290g,其中蛋白含量37%。其它成分大多为可溶性糖。2.8 清蛋白精粉1kg脱脂小麦

18、胚芽制得清蛋白精粉148.5g,其中蛋白含量高达72%。蛋白中包含30%糖蛋白，糖蛋白含糖基占糖蛋白总重的43%。2.9 清蛋白SDS-PAGE电泳 清蛋白 Marker图6 清蛋白SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳图Fig.6 Albumin SDS-PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis figure图7 清蛋白SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量对数与相对迁移率曲线图Fig.7 SDS electrophoretic relative molecular mass of the logarithmic and relative migratio

19、n rate curve fractions表4 SDS-PAGE标准曲线数据表Table 4 SDS-PAGE Standard curve data tableMarker /Ku14.43142.766.297.4分子量对数1.1581.491.631.8211.989相对迁移率/mm2749586573注：条带由下至上排列表5 SDS-PAGE清蛋白分子量表Table 5 SDS-PAGE albumin molecular weight table相对迁移率/mm21293844516072分子量对数1.321.461.581.641.711.781.86分子量/Ku20.8928.

20、8438.0243.6551.2960.2672.44注：条带由下至上排列由SDS-PAGE电泳图6可知，清蛋白共呈现7条谱带。由蛋白Marker分子量对数与相对迁移率（此处相对迁移率指电泳谱带到电泳前沿的距离，清蛋白谱带相对迁移率与之相同）数据表4作标准曲线图7，得分子量对数与相对迁移率关系式y=0.0179x+0.6441,，R2=0.9846。将清蛋白条带相对迁移率带入公式，得到清蛋白分子量对数，进而得到清蛋白分子量见表5。清蛋白7条谱带分子量由小到大排列分别为20.89、28.84、38.02、43.65、51.29、60.26、72.44Ku。3 结论通过单因素试验和正交试验优化了小

21、麦胚芽清蛋白提取最佳工艺条件，即粉碎粒度0.125mm。提取温度30min，提取时间30min，提取料液比111。此条件下清蛋白提取率达29.2%。将清蛋白提取液纯化喷雾干燥得清蛋白粗粉，清蛋白含量37%；对清蛋白提取液进一步提取纯化后真空冷冻干燥得清蛋白精粉，清蛋白含量72%。通过对清蛋白提取液进行SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳得到7条谱带，分子量由小到大分别为7.31、9.2、19.23、27.79、33.41、52.95、83.93Ku。 参考文献：1 Amado R,Arrigoni E.Nutritive and functional properties of wheat ge

22、rmJ.International Food Ingredients,1992,(4):30-35.2曲艺,王晓曦,雷宏.小麦胚芽及其脂类和蛋白质的研究现状J.粮食流通技术,2009,(1):31-35.3Carlo Giuseppe Rizzello, Luana Nionelli, Rossana Coda. Effect of sourdough fermentation on stabilization and chemical and nutritional characteristics of wheat germJ.Food Chemistry,2010,119(3):1079-

23、1089.4Chen Yun-hui, Wang Zhang, Xu Shi-ying. Antioxidant properties of wheat germ proteins hydrolysates evaluated in vitroJ.Journal of Central South University of Technology,2006,13(2):141-148. 5樊永华.小麦胚芽蛋白制备及应用J.粮食与油脂,2008,(11):11-13.6Zhu Ke-xue,Zhou Hui-ming,Qian Hai-feng.Comparative study of the c

24、hemical composition and physiochemical properties of defatted wheat germ flour and its protein isolateJ.Journal of Food Biochemistry,2006,30(3):329-341. 7Ge Y,Sun A,Ni Y,eta1.Some Nutritional and functional properties of defatted wheat germ proteinJ.Journal of Agricultural and Food Chemistry,2000,48

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