微生物试题3.docx

1、微生物试题3生化试验1、糖醇类代谢试验： （一) 糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F)试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（M.R.)试验 （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验2、氨基酸和蛋白质代谢试验： （一）靛基质（吲哚）试验 （二）H2S试验 （三) 尿素酶试验 （四）氨基酸脱羧酶试验 （五）苯丙氨酸脱氨酶试验 （六）明胶液化试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验： （一）枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验 （二）丙二酸盐利用试验4、呼吸酶类试验： （一）氧化酶试验 （二）过氧化氢酶类试验 （三）硝酸盐还原试验 （四）氰化钾试验5、毒性酶类试验： （一）溶血试验 （二）链激酶试验 （三

2、）卵磷脂酶试验 （四）血浆凝固酶试验六、三糖铁（TSI）试验1、概述（1）什么是生化试验？ 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。（2）检验细菌的生化试验范围 1、糖醇类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验 3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验 6、三糖铁（TSI)试验（3）生化试验的方法 1、培养物应加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的PH值变化。 2、培养物中应加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 3、根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 4、根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观

3、察细菌的生长情况。（4）生化试验的注意事项 1、待检菌应是新鲜培养物，培养18-24小时。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间，观察结果的时间，多为24小时或48小时。 4、应作必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2-3个待检的疑似菌落分别进行试验。2、糖醇类代谢试验（一) 糖醇类发酵试验 1、原理： 不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同。 有的能分解多种糖醇，有的能分解1-2种糖醇，有的分解糖醇能产酸产气，有的 分解糖醇只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。 2、试验方法： 用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接

4、种针穿刺接种。置361培养1-3天，每天观察结果。 3、结果观察与记录： 产酸不产气，阳性，以“+”表示； 产酸产气，阳性，以“”表示； 不产酸不产气，阴性，以“-”表示。（2）葡萄糖氧化发酵（O/F)试验 1、原理： 细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。 氧化性细菌在有氧条件下才能分解葡萄糖，无氧条件不能分解葡萄糖； 发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖。 不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。 根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。 2、试验方法： 取待检菌，以穿刺接种于两管葡萄糖半固体培养基上，在其中一管加入一层（约 1cm）灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在37培养2-4天，每天观察结果。 3、结果

5、观察与记录： 略（3）V-P试验 1、原理： 某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇；后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙酰，在-萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称为V-P（+）反应。 2、试验方法： 奥梅拉法 贝立脱法 快速法 3、结果观察与记录： 发酵管出现红色者，为阳性，记V-P+ 发酵管顶部出现黄色或铜绿色者，为阴性， 记V-P-（4）甲基红（M.R.)试验 1、原理： 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基PH值下降至PH4.5以下，使甲基

6、红试剂变红，为甲基红试验阳性；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液PH5.4，甲基红指示剂呈橘黄色，为甲基红试验阴性。 2、试验方法： 挑取新鲜的待试培养物少许，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于361或30（以30较好）培养3-5天，从第48h起，每次取培养液1ml，加入甲基红指示剂1-2滴，立即观察结果。 3、结果观察与记录： 呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为弱阳性，记MR+ 呈橘黄色或黄色为阴性，记MR-，迄至发现阴性并培养至第五天仍为阴性，即可判定结果。 （5）七叶苷水解试验 （6）甘油品红试验 三、氨基和蛋白质试验（一）靛基质试验（吲哚试验） 1、原理： 某些细菌含

7、有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可形成红色化合物，即玫瑰吲哚，以此鉴别细菌。 2、试验方法： 将待检菌接种于培养基中，于361培养24-48h后，加入柯凡克试剂数滴，轻摇试管，呈红色者为阳性，或沿试管壁缓慢加入欧波试剂约0.5ml覆盖液面，两液面接触处呈现玫瑰红色者为阳性反应，无红色者为阴性反应。 3、结果观察与记录： 呈现玫瑰红色，为阳性反应，记+ 无红色者，为阴性反应，记- （2）H2S试验 1、原理： 某些细菌可分解培养基中的含硫氨基酸或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅盐或铁盐可生成黑色沉淀物PbS或FeS，以此鉴别细菌。 2、试验方

8、法： 挑取待检菌，用穿刺接种法接种于三糖铁培养基上，于361培养24-48h,观察结果。 3、结果观察与记录： 培养基底部呈黑色，为阳性，记+ 培养基底部无黑色，为阴性，记-（3）尿素酶试验 1、原理： 某些细菌能产生尿素酶，将尿素分解产生氨，氨使培养基变为碱性，使培养基中的酚红指示剂呈粉红色，培养基由黄色变为红色，为阳性，以此鉴别细菌。 2、试验方法： 挑取大量培养18-24h的待检菌，浓密涂布接种于尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底部作变色对照。 培养2、4和24h分别观察一次结果，培养基变为粉红色为阳性，颜色不变为阴性。 如阴性继续培养至4天，作最终判定。 3、结果观察与记录： 培养基变

9、呈粉红色，为阳性，记+ 培养基颜色不变，为阴性，记-（四）氨基酸脱羧酶试验 1、原理： 某些细菌能产生氨基酸脱羧酶，可使赖氨酸、鸟氨酸进行脱羧作用，生成胺类物质和CO2。胺类物质使培养基呈碱性变紫色，为阳性，如呈黄色为阴性，以此鉴别细菌。 阳性反应试验管颜色变化： 紫色黄色紫色 原理：对照管呈黄色，说明细菌生长。 在培养的早期（10-12h），细菌发酵葡萄糖产酸使培养液PH下降，指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色，以后由于氨基酸脱羧生成胺，PH又回升至碱性，指示剂显紫色。 2、试验方法： 取待检菌，分别接种于含有氨基酸的培养基内和不含氨基酸的对照培养基内，在361培养1-4天，每天观察结果。 3、结

10、果观察与记录： 试验管呈紫色，对照管呈黄色，为阳性，记+ 试验管、对照管都呈黄色，为阴性，记-（5）苯丙氨酸脱氨酶试验 1、原理： 某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合物，以此鉴别细菌。 2、试验方法：略 3、结果观察与记录： 试验管立即出现绿色，为阳性，记+ 无色为阴性，记- （6）明胶液化试验 四、有机酸盐和铵盐的利用试验： （一）枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验 1、原理： 某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解枸橼（柠檬酸盐）生成碳酸盐，同时分解培养基的铵盐生成氨，是培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。

11、 2、试验方法： 挑取待检菌，在枸橼酸盐培养基涂面上密集划线接种在361培养1-4天，每天观察结果。 3、结果观察与记录： 斜面有菌苔生长，培养基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳性，记为+ 无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者，为阴性，记为- （二）丙二酸盐利用试验 1、原理： 某些细菌能利用培养基中的丙二酸盐作为唯一碳源，丙二酸盐被分解成碳酸钠，使培养基变为碱性，培养基由绿色变为蓝色，为阳性，以此鉴别细菌。 2、试验方法： 取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸盐培养基上，于361培养48h，观察结果。 3、结果观察与记录： 培养基由绿色变为蓝色，为阳性，记为+ 培养基无颜色变化，为阴性，记为-五、呼吸酶

12、类试验： （一）氧化酶试验 （二）过氧化氢酶类试验 （三）硝酸盐还原试验 1、原理： 某些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐可生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯环酸与-萘胺作用，生成红色化合物。 2、试验方法： 取待检菌新鲜纯培养物，在硝酸盐培养基上接种，在361培养1-4天，每天取2ml培养液，加入A、B试剂的等量混合物各两滴混匀，立即观察结果。 3、结果观察与记录： 呈红色，为阳性，记为+ 若无红色出现，为阴性，记为- （四）氰化钾试验 1、原理： 氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂，可与呼吸酶作用使酶失去活性，抑制细菌的生长

13、，但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生长，以此鉴别细菌。 2、试验方法： 取培养20-24h营养肉汤培养液或菌落一环，接种至对照培养基及氰化钾培养基内，立即以橡胶塞塞紧，于361培养24-28h。 3、结果观察与记录： 对照管有菌生长，试验管有菌生长，为阳性， 记为+。 对照管有菌生长，试验管无菌生长，为阴性，记为-。6、毒性酶类试验： （一）溶血试验 类型及现象： （甲型）溶血： 菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。 （乙型）溶血： 菌落周围出现较宽的透明的溶血环。 （丙型）溶血： 菌落周围无溶血环。 （二）链激酶试验 原理： A群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变

14、为纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解，为阳性反应。（此试验用于测定链球菌的致病性，阳性反应具有致病。） （三）卵磷脂酶试验（四）血浆凝固酶试验 1、原理： 致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的凝固蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块，或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象，为阳性。 2、试验方法： 玻片法： 取清洁干燥的载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别于生理盐水和血浆混匀，5min内，若血浆内出现团块或颗粒状凝块，而生理盐水中仍呈均匀混浊，则为阳性；如两者均匀混浊无凝块，则为阴性。 试管法：略 七

15、、三糖铁（TSI）试验 原理： 如果细菌可利用蔗糖或乳糖发酵产酸或产酸产气，培养基全部变黄，如果只可以利用葡萄糖，葡糖糖被分解产酸，可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸因接触空气而被氧化，加之细菌利用培养基含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部由于在厌氧状态下，酸类不被氧化，仍保持黄色。如果细菌又能分解含硫化合物，产生H2S，培养基底部变黑。 一、 抗原与抗体（一）抗原1、 抗原的概念是一类能刺激人或动物机体产生抗体或致敏淋巴细胞（免疫原性），并能与这些产物在体内或体外发生特异性反应的物质（免疫反应原性）。2、 抗原的特性免疫原性免疫反应性（二）抗体 概念：抗体是由抗原刺激人体或动

16、物的淋巴细胞，由淋巴细胞转化为浆细胞所产生的具有特异性的免疫球蛋白。 （三）抗原抗体反应 概念：是指抗原与抗体之间发生的特异性结合反应，可发生于体内，也可发生于体外。2、血清学反应 （一）概念 指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，所出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。 （二）反应的特点 1、具有特异性与交叉性； 2、具有敏感性； 3、具有定理特性； 4、反应的两个阶段性； 5、反应的稳定性与可逆性； 6、最适比和现象。 （三）影响因素 1、抗原 2、抗体 3、环境因素： 电解质：0.85%NaCl; 温度：37或56; PH值：7.0 ; 反应时间; 振荡：适当的机械振荡。 （四）反应的种类 1

17、、凝集反应 2、沉淀反应 3、中和反应 4、标志抗体技术 （五）凝集试验 1、方法 直接凝集法 间接凝集法抗球蛋白试验 玻片凝集法：（直接凝集试验的一种） （1）原理： 用已知抗体作为诊断血清，来检测未知抗原，以此来鉴定相应抗原。 （2）方法步骤： 于洁净玻片的一端加诊断血清一滴、另一端加生理盐水作为阴性对照。 用接种环取待检菌或血细胞悬液分别涂于诊断血清和生理盐水中。 轻轻转动玻片，使其充分混匀，静置数分钟，观察结果。 （3）试验结果： 若诊断血清一端有凝集现象，生理盐水一端无凝集，为阳性。 若两端均无凝集现象，为阴性。鲜血者 红细胞 受血者血清O型（抗A、抗B)A型（抗 B）B型（抗 A）

18、AB型（无）O型-A型+-+-B型+-AB型+- 例 “+”表 注： 注: “+”表示有凝集反应，“-”表示无凝集反应。 （4）诊断血清及类型 诊断血清：将已知的抗原注射于动物体，使其产生相应的抗体，采出动物的血液，分离出含有大量抗体的血清，称为诊断血清。 抗O血清： 用菌体抗原（O抗原）免疫动物后所得的血清。 抗H血清： 用鞭毛抗原（H抗原）免疫动物后所得的血清。 表面抗原血清： 用含有表面抗原的菌体免疫动物后所得的血清。 多价诊断血清： 用含有两种（型）的菌体免疫动物后所得的血清。 单价诊断血清： 只含有一种（型）特异性抗体的血清。 因子诊断血清： 把含有多种抗体的混合免疫血清，用具有共同

19、抗原成分的有关细菌将其共同抗体吸收，只留下一种或几种所需的特异性抗体的血清。复习题1、什么是生化试验？2、做生化试验要注意哪些事项？3、简述糖醇类试验的原理，写出其试验方法和结果的记录。4、简述甲基红试验的原理，写出其试验方法和结果的记录。5、葡萄糖氧化发酵试验的原理。6、VP试验的原理。7、简述靛基质试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项。8、简述硫化氢试验的原理，写出其试验结果的记录和注意事项。9、简述尿素酶试验的原理，写出其试验方法、结果的记录。10、简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出试验结果的记录、阳性试管颜色变化过程和原理。11、简述氰化钾试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项。12、写出溶血试验的溶血类型及现象。13、简述链激酶试验的原理。14、简述血浆凝固酶试验的原理，并写出玻片法的试验方法。15、简述三糖铁（TSI）试验的原理。16、影响血清学试验的因素有哪些?17、血清学试验常用的电解质有哪些,有什麽作用?18、写出血清学试验中玻片凝集法的原理和试验的方法步骤.