1、血液部分血液标本全血:用于细胞计数、分类、形态观察;血浆:全血去除血细胞,用于血栓止血检测;血清:全血自然凝固后析出的液体,用于生物化学、免疫学检测等。血液标本采集方法:一、毛细血管采血法:用于微量检测 部位:耳垂或手指末梢,主要是中指或无名指尖内侧,半岁以下拇指或足部,特殊人员视情况而定 所用器材:采血针、吸管二、静脉采血法:用于血沉、免疫、生化等检测项目 部位:主要是肘静脉。还可以在:手背部手腕部等部位采血,幼儿可采用颈外静脉采血。 采血器材:一次性注射器,检验用真空定量采血装置。抗凝:用物理或化学方法除去或抑制血 液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固,称为抗凝。一、草酸盐,抗凝原理:
2、与血液中钙离子形成沉淀;使用方法:草酸钠0.1mol/L和血液1:9。优点:溶解性好,价廉。缺点:对凝血因子保护功能差,影响凝血因子;形成草酸钙沉淀物,影响自动凝血仪器的使用。使用范围:逐步被淘汰。二、柠檬酸钠(枸橼酸钠),抗凝原理:与钙离子生成可溶性的鳌合物。使用方法:配成109mmol/L的浓度和血液1:9(用于凝血试验);106mmol/L的浓度和血液1:4(用于血沉)。优点:对凝血因子有很好的保护作用。缺点:血液中溶解度低,抗凝作用较弱。使用范围:止血学检验、血沉、输血保养液(毒性小)。三、乙二胺四乙酸(EDTA)盐,抗凝原理:与钙离子生成可溶性的鳌合物。使用方法:15g/L EDTA
3、和血液1:10。优点:对红细胞和白细胞形态影响小。缺点:影响血小板的聚集。使用范围:全血细胞分析和血细胞比容测定,但不适用于出凝血实验和血小板功能。四、肝素,抗凝原理:加强抗凝血酶作用,阻止凝血酶形成。使用方法:肝素钠1g/L与血液1:10。优点:抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。缺点:引起白细胞聚集,使白细胞计数降低,不利于制备血涂片,价格昂贵。使用范围:血浆生化/免疫项目,红细胞脆性实验,科学研究等。亚铁血红素:血红蛋白色素部分,由铁原子及原卟啉区组成。 血涂片的制备1、用途:血细胞形态学检验、网织红、异常细胞检验、寄生虫检验。2、制备步骤:(手工推片法)将推玻片向1的方向
4、稍抽回,当血液充满推玻片的宽度后,以一定均匀的速度向2的方向滑动。3、质量评价:均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧注意:血滴大,速度快、角度大-血膜厚瑞氏染色法原理:分两相进行,第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合;碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下形成紫色的天青B-伊红复合物,结果使白细胞核染色质成紫色(疟原虫的染色质成红色),中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。试剂1. Wright染液:瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml甲醇:有强大的脱水力,可将细胞固定为一定形态,并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等
5、结构,增加细胞与染料接触表面积,提高对染料的吸附作用,增强染色效果。2.磷酸盐缓冲液(PBS):磷酸二氢钾(无水)0.3g,磷酸氢二钠(无水)0.2g, 蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH(6.4-6.8),塞紧瓶口备用。方法:a. 用蜡笔在血膜两头划线,平放于染色架上。b. 加瑞氏染液覆盖血膜,固定1min。c. 滴加等量或稍多的缓冲液,混匀,染色5-10分钟。d. 用清水冲洗,待干后镜检。红细胞计数:测定单位体积血液中红细胞的数量【技数方法】显微镜计数法:用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后,滴入血细胞计数盘,然后于显微镜下,计数一定范围内的红细胞数,经过换算即可求得每升血液中
6、的红细胞数。【参考值】成年男性:(4. 0 5. 5) 1012/L成年女性:(3. 5 5. 0) 1012/L新生儿:(6. 0 7. 0) 1012/L低于3.51012/L可诊断为贫血,低于1.51012/L应考虑输血。网织红细胞网织红细胞是未完全成熟的红细胞,是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的过渡型(未成熟)红细胞。【计数方法】显微镜计数法:(活体染色) 染料煌焦油兰:常用,染色效果好,但沉渣较多。 新亚甲兰:WHO推荐的,染色效果好,但试剂昂贵。试验方法试管法:染色时间长(30min),效果好,易重复计数。玻片法:染色时间短,水分易蒸发,结果偏低。制薄片,不复染,油镜下计数
7、1000个RBC中Ret数(缩小视野法或Miller窥盘)。【参考值】成人:0.0050.015或(24-84)109/L儿童:0.020.06血红蛋白(Hb)是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含色素辅基的结合蛋白质,是红红细胞内的运输蛋白。【检测原理】血液在血红蛋白转化液中溶血后,除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi),Hi与氰化钾的氰根(CN-)生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCN),HiCN在540nm有吸收峰。在特定的实验条件下,可测得吸光度并计算Hb(G/L)。但在实际工作中,一般实验室的分 光光度计达不到WHO规定的标准条件,所以利用Hb参考
8、液制备标准曲线,换算出Hb(G/L)。【参考值】成年男性:120-160 g/L成年女性:110-150 g/L新生儿:170-200 g/L70岁以上老年男性:94.2-122.2 g/L70岁以上老年女性:86.5-111.8 g/L贫血:单位容积循环血液中红细胞、血红蛋白、血细胞比积低于参考值下限,称为贫血。临床上通常以血红蛋白为标准:轻度贫血:男性120g/L,女性90g/L中度贫血:9060 g/L重度贫血:6030 g/L极度贫血:3个/HP,称为。血红蛋白尿:血管内溶血时,血浆游离血红蛋白增多,超过珠蛋白结合能力(约1.3g/L),可通过肾小球滤出而形成的暗红、棕红甚至酱油色的尿液,称为。肌红蛋白尿:当肌肉组织广泛损伤、变性时血浆肌红蛋白含量增高,经肾脏排出,产生的粉红色或暗红色尿液。乳糜尿:由于泌尿系统淋巴管破裂火神不淋巴管阻塞致使乳糜液或淋巴液进入尿液,尿液呈乳白色浑浊,称为。脓细胞:在炎症过程中被破坏、变性或坏死的中性粒细胞。其外形多变不规则,胞质内常充满颗粒,胞核模糊不清,常聚集成团,边界不清。脓尿:由于含有大量白细胞,外观呈黄白色或白色的尿液。1、镜
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