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1、推荐下载关于库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究键入文字关于库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。论文网为您提供医药论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。关于库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究作者：肖凤霞，邓少东，田青，邓超明 1，周改莲【摘要】 目的 建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法 采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5?羟色胺(5?HT)、5?羟吲哚乙酸(5?HI

2、AA)，采用 Phenomenex C18 反相色谱柱(150 mm 4.60 mm，5 m)，流动相为缓冲液?乙腈(体积比 8713)，流速为 1 mL min-1，柱温为 35 。结果 4 种单胺类神经递质的最低检测限为 0.015 150.018 15 ng ,回收率为 85.3 %100.5 %。结论 该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点，可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。1键入文字【关键词】 高效液相色谱法;单胺类神经递质;库仑阵列电化学检测器(1.School of TCM,Guangzhou University of Traditional Chinese M

3、edicine,GuangzhouGuangdong 510006,China; 2.Taishan Medical University,Taian,Shandong271016,China)Abstract:Objective To establish a rapid method for determining monoamineneurotransmitters in rats brain tissue by HPLC with coularray detector.Methods HPLC wasperformed on a Phenomenex C18 column(150 4.6

4、0 mm,5 micron). The mobilephase,consisted of acetonitrile?water phase(1387),was at a flow?rate of 1 mL min-1. Thecolumn temperature was kept at 35 . The levels of NE,DA,5?HT and 5?HIAA weredetermined.Results The minimum measurement limit was 0.015 15-0.018 15 ng. The averagerecoveries were 85.3 %-10

5、0.5%.Conclusion This method is rapid,accurate,highly sensitiveand easy to operate. The procedure is suitable for determining the monoamineneurotransmitters in rats brain tissue.Key words:HPLC; monoamine neurotransmitters; coularray detector单胺类物质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5?羟色胺(5?HT)、五羟吲哚乙酸(5?HIAA)等物质，是哺乳动

6、物和人类中枢神经重要的信息传递物质。研究该类物质及其代谢产物在体内的含量变化，对于阐明药物在体内的作用机制，提供了有力的依据。尤其在老年痴呆症、抑郁症、儿童多动症、儿童多动秽语综合征等疾病与神经递2键入文字质含量关系、药物治疗效果等方面的研究中，可提供非常有用的信息1。目前文献报道此类物质常见的检测方法主要有高效液相色谱?电化学检测器测定法(HPLC?ECD)、荧光法、放射酶学分析法等2。其中以 HPLC?ECD 测定法报道的较多，但现有的HPLC?ECD 测定法存在流动相成分复杂3、重现性差、检测时间长、样品前处理不彻底等问题。本研究改进了现有的测定方法，建立起一种流动相单一、重现性好、检测

7、时间短、样品处理完全,并可同时测定 4 种单胺类物质及其代谢产物的检测方法。1 仪器与试药1.1 仪器库仑阵列电化学高效液相色谱仪Model 5600A?16 通道检测器(美国 ESA 公司)，Model 582 solvent Delivery System，Model 542 自动进样器，CoularrayWin 工作站，Dionex Tcc?100 型柱温箱(美国戴安公司);Thermo D?37520 型高速冷冻离心机(德国Heraeus 公司);pHS?25 型 pH 计(上海精密科学仪器有限公司);GenPure 超纯水系统(德国TKA 公司);KQ?500 型超声波清洗器(昆山市

8、超声仪器有限公司，功率 500 W,频率 40kHz);3 K 超滤管(PALL 公司);BP211D 电子天平 (德国 Sartorious);佳美 SK?1 快速混匀器(江苏金坛市佳美仪器厂);玻璃匀浆器。1.2 试药3键入文字去甲肾上腺素(NE，批号 100169?199402)、多巴胺(DA，批号 100070?200405)、5?羟色胺(5?HT，批号 111656?200401)、5?羟基吲哚乙酸(5?HIAA，批号 140737?200501)均购自中国药品生物制品检定所;水为超纯水，乙腈为色谱纯(德国默克公司)，其余试剂均为分析纯。1.3 动物SPF 级 SD 大鼠 12 只，

9、雌雄各半,体质量(180 20) g，由广州中医药大学实验动物中心提供许可证号：SCXK(粤)2008?0020。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Luna C18 柱(Phenomenex，150 mm 4.60 mm，5 m)，Alltima C18 预柱(Alltech,7.5 mm 4.6 mm，5 流动相：缓冲液每 1 L 超纯水中含乙二胺四乙酸二钠(EDTA)37.2 mg、NaH2PO4 31.2 g、辛烷磺酸钠 1 g，pH 值 4.0乙腈=8713，流速：1 mL min-1;柱温箱：35 ;自动进样器温度：4 ;检测电压：350 mV;进样量：15L。4键入文字2.2

10、溶液的制备2.2.1 蛋白沉淀工作液的制备 取 HCLO4 4.29 mL，加水稀释至 500 mL，得到 0.1mol L-1 HCLO4 溶液，用 0.22 m 滤膜滤过，即得。2.2.2 混合对照品贮备液的制备 精密称取 NE、DA、5?HT、5?HIAA 对照品各 1 000g，用 0.1 mol L-1 HCLO4 定容至 2 mL 容量瓶中，使其质量浓度均为 500 g mL-1。取以上 4 种对照品溶液各 500 L 混匀，配制成各对照品质量浓度均为 125 g mL-1 的混合对照品贮备液。2.2.3 缓冲液的制备 取 EDTA 37.2 mg(0.1 mmol L-1)、Na

11、H2PO431.2 g(0.2 mol L-1)、辛烷磺酸钠 1 g 溶解于 1 L 超纯水中,H3PO4 调 pH 值至 4.0。2.2.4 供试品溶液的制备 取大鼠禁食 12 h 后，断头处死,在冰台上迅速分离出大脑组织。将标本称质量后,锡纸包好，脑组织作为实验样品保存于-80 冰箱中。称取脑组织 0.2 g，加入 0.1 mol L-1 HCLO4 溶液 1 mL，冰浴匀浆。匀浆液涡旋混匀后置 4 高速冷冻离心机中 12 000 r min-1 离心 10 min，取上清液置 3 K 超滤管中进行二次离心，超滤后清液作为供试品溶液。5键入文字2.3 系统适应性试验精密吸取蛋白沉淀工作液、

12、混合对照品贮备液、供试品溶液各 15 L，按 2.1 项下色谱条件进行测定，结果见图 1。脑组织样品中的 NE、DA、5?HIAA 和 5?HT 得到了良好的分离,保留时间分别为 2.91、4.36、5.02 和 8.34 min，其他杂质不干扰测定结果。2.4 线性关系考察tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！ 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。论文网为您提供医药论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。浅谈硒、维生素 C 对高氟诱导脂质过氧化影响的研究进展6键入文字【摘要】 我国是世界上地方性

13、氟中毒比较严重的国家之一,大约有 1 亿人口受到不同程度的影响,因此地氟病的防治研究已引起许多研究者的关注。近年来的一些研究表明，硒和维生素 C 的摄入能影响高氟诱导的脂质过氧化。本文就硒和维生素 C 对高氟诱导脂质过氧化的影响及其作用机制进行综述，并对进一步的研究提出展望。【关键词】 硒;维生素 C;高氟;脂质过氧化(School of Public Health,Guangdong Pharmaceutical College,Guangzhou,Guangdong510310,China)Abstract:China is one of countries entangled by th

14、e severe endemic fluorosis inthe world,with about one million people affected in different degrees; therefore preventionand treatment of endemic fluorosis has caused the attention of many researchers. Some recentstudies had shown that selenium and vitamin C intake could affect the fluoride?induced l

15、ipidperoxidation. Selenium and vitamin C on lipid peroxidation induced by fluoride and itsmechanism were reviewed in this paper,and the further research was prospected.Key words:selenium; vitamin C; high fluoride; lipid peroxidation氟是人和动物生长发育必需的微量元素。适宜剂量的氟对人类和动物有益，而高剂量的氟则会产生毒性1。在一些地区，由于受特定的地质、地理和气候等

16、自然因素的影响，使环境中含有大量的氟，导致饮水、食物中氟含量过高。在这种特定地区生活7键入文字的人和动物由于长期摄入过量的氟并在体内蓄积，会出现慢性中毒，即地方性氟中毒(简称地氟病)。地氟病是世界上广泛分布的一种地方病，我国是该病流行最严重的国家之一。据报道，除上海市、海南省外，地氟病在我国其他省、自治区、直辖市均有流行，严重威胁着病区群众的身体健康2。地氟病分为 3 种类型，即饮水型、燃煤污染型和饮茶型，其中饮水型是我国地氟病中最主要的类型，它主要是由于饮水中含氟量过高，造成人体摄氟量过多，从而导致儿童的牙齿和成人的骨骼发生病变，在临床上分别称为氟斑牙和氟骨症3。关于营养物质与氟中毒的关系一

17、直备受人们的关注。近年来的一些研究表明，硒和维生素 C 的摄入能影响高氟诱导的脂质过氧化，对机体起到保护作用。以下就硒和维生素 C 对高氟诱导脂质过氧化的影响及其作用机制进行综述。1 硒对高氟诱导脂质过氧化影响的研究1.1 人群研究自 20 世纪 80 年代中后期提出氟中毒存在氧化损伤后，作为具有抗氧化功能的微量元素硒与氟的关系开始受到人们的关注4。Chen 等发现，高氟地区高硒水平人群与高氟地区低硒水平人群相比，MDA 含量及 GSH?Px、SOD、CAT 活性的差异具有统计学意义，表明高硒可以减弱氟的脂质氧化作用5。边建朝等人发现，梁山县氟病村、非氟病村内外环境硒水平均低于正常对照村，与

18、2 处对照村健康人群比较，氟中毒患者8键入文字的血、尿氟含量升高，血中 GSH?Px、SOD 降低,LPO 升高,GSH?Px/LPO、SOD/LPO 降低。结论为梁山县氟中毒病区为低硒高氟地区;高氟使体内微量元素平衡紊乱，抗氧化酶类受损，脂质过氧化代谢异常6。同时边建朝等在梁山县外环境低硒的氟病区让 74例氟骨症患者和 40 例氟斑牙患者口服亚硒酸钠，结果发现，服硒组和对照组相比，尿氟排泄量增加，尿氟下降，血 GSH?Px 增加，SOD 活性升高，LPO 浓度下降。提示在低硒高氟区补硒后，可提高氟中毒患者机体的抗氧化能力，减轻过氧化物对机体的损伤，同时能拮抗体内的高氟。1.2 动物实验研究李

19、贤相等研究发现，加硒可增强染氟大鼠机体的抗氧化功能，提高全血 GSH?Px 活性,降低 LPO 含量7。另一项研究表明，氟暴露大鼠的血清氟离子浓度明显升高，且随实验期的延长而增加，饮水中同时给予一定浓度的硒则使血清氟离子浓度增高得更为明显。有研究用低、中、高 3 个剂量(0，33，770 g/kg)的亚硒酸钠灌胃与低、中、高3 种浓度(0,50,100 mg/L)的氟化钠饮水两两组合经口给予大白鼠 5 个月，发现在低硒和高硒水平时,随饮水氟浓度的增加大鼠氟斑牙的发生率升高，体质量增长减慢;在低硒水平时，肝、肾组织中硒含量减少而氟含量增加，股骨氟量也增加;这些变化在中硒水平时则不明显。还有研究采

20、用 20 只大鼠，通过饮水加氟 150 mg/L 和加硒 0.5、2、4mg/L 的方法，研究氟和硒对大鼠股四头肌的组织化学活性变化的影响。结果表明：氟组以及硒 0.5 mg/L+氟 150 mg/L 组的 LDH 活性都较强，并且硒 2 mg/L+氟 150 mg/L 组的该酶活性最强,但在硒 4 mg/L+氟 150 mg/L 组该酶的活性又开始下降。9键入文字2 维生素 C 对高氟诱导脂质过氧化影响的研究2.1 人群研究地氟病的发生及严重程度与营养状况有直接的关系8。维生素是人体的必需营养素9。臧增元等发现,生活水平较低的氟中毒病区居民维生素的摄入量明显低于推荐量，氟中毒的患病率也较高1

21、0。王忠霞等人为了解长期接触氟作业工人的慢性毒性及维生素 C 的拮抗效果，让研究对象每日口服不同剂量(0、50、100、150 和 200 mg)的维生素 C 30 d 后,生化指标及各种临床症状均有所改善。张聪格报道，氟骨症患者血浆维生素 C 的含量明显低于健康者，从而影响体内胶原蛋白的合成。田玉慧等研究发现，大学生中不同维生素 C 水平其尿氟含量不同，维生素 C 营养充足组的尿氟显著低于维生素 C 不足组;当维生素 C 缺乏时，维生素 C 水平与尿氟的排出量呈显著性负相关。另外也有实验表明：补充维生素 C 对氟骨症病人尿氟的排泄没有影响11。上官存民等为验证维生素 C 治疗氟骨症的确切疗效

22、，在陕西省宝鸡病区对 316 例氟骨症进行治疗后发现：治疗组的临床总有效率仅 12.84%，与对照组比较差异无显著性;治疗组肌电图的恢复率为 20.00%，与对照组比较差异无显著性;生化及 X 线的检查也没有发现疗效显著的证据;说明维生素 C 治疗氟骨症的临床疗效并不显著。因此，他们对维生素 C 治疗氟骨症的价值提出了质疑。2.2 动物实验10键入文字20 世纪 50 年代 Vankateswarlu 等发现,维生素 C 可使猴子的氟中毒病情减轻12。在维生素 C 对氟中毒大鼠不同组织抗氧化酶活性影响的研究中，将 Wistar 大鼠通过饮水染氟建立氟中毒模型，并灌胃给予维生素 C 50 mg/

23、kg(低剂量组)、100 mg/kg(中剂量组)、150 mg/kg(高剂量组)。9 月后处死大鼠，取肝、肾、脑组织测定 SOD、GSH?Px、CAT 活性和脂质过氧化物丙二醛含量。结果发现：低剂量组 SOD 和 CAT 的活性显著增强，中剂量组 CAT 的活性反而降低，但高剂量组 CAT 的活性又显著升高13。氟对体外培养淋巴细胞抗氧化酶活性的影响以及维生素 C 的保护作用的研究发现：50 mol/L 的氟化钠可对淋巴细胞内的三种抗氧化酶有不同程度的抑制作用，10mol/L 的维生素 C 可不同程度地拮抗氟化钠对 SOD 和 CAT 的抑制作用，在维生素 C浓度达到 40 mol/L 时，能

24、拮抗氟化钠对 GSH?Px 的抑制作用14。在维生素 C 拮抗氟致大鼠雄性生殖损害的研究中，1.0 mg/mL 的维生素 C 对雄性大鼠饮用 150 mg/L 氟化钠饮水所致的睾丸组织 LPO 含量升高、附睾三磷酸腺苷酶活性抑制等损害作用具有明显的拮抗作用，与饮水中加入 2.0 mg/L 亚硒酸钠的拮抗效果类似，但不能显著改善睾丸和附睾组织中 GSH?Px 的活性。3 硒、维生素 C 对高氟诱导脂质过氧化影响的机制研究近年来研究者们对氟中毒的机制提出了许多假说,较公认的是自由基学说15。该学说认为:氟是化学性质极活泼的元素,机体摄入过量氟后,氟可能直接攻击氧,干扰氧代谢，导致氧自由基增多;氟也

25、可能攻击构成抗氧化酶的微量元素,使抗氧化酶活性下降,同样导致氧自由基生成过多。自由基可攻击不饱和脂肪酸的共价键,造成脂质过氧化，导致机体内 LPO 含量升高,机体生物膜因此受到损害则引发氟中毒16，17。11键入文字硒作为人体的一种必需微量元素，其抗氧化性质已经得到证实18。硒本身是一种自由基清除剂，可以直接清除自由基和脂质过氧化自由基，从而起到保护作用19。硒也可能以 GSH?Px 的方式起作用,催化 H2O2 分解成 H2O,发挥抗氧化作用,从而保护细胞及组织免受过氧化物的损害。肾脏作为氟的主要排泄器官，是过量氟负荷时重要的非骨相靶器官。根据氟诱导自由基导致脂质过氧化发生的机制，有人曾研究

26、硒对氟致肾损害的拮抗作用,发现其拮抗机制之一是硒可促进尿氟的排泄。用氟中毒动物模型证明，加硒能提高 GSH?Px 的活性,减少脂质过氧化产物,稳定细胞膜,即可拮抗氟引起的脂质过氧化。但是在高硒氟中毒动物模型中却表现为氟、硒的协同作用,这可能与机体内微量元素失衡有关。因为机体的抗氧化酶不但能协同地防止活性氧引起的损伤效应,而且相互间起着保护作用,一旦某一过氧化物酶受到损害,可能导致整个酶活性保护系统全线崩溃16。维生素 C 是食物中主要的抗氧化物质19，是机体内一种很强的抗氧化剂。它可直接与氧化剂作用，以保护其他物质免受氧化损伤。它也可还原氟化钠以及其它活性氧化剂，这类氧化剂影响着 DNA 的转

27、录，或损伤 DNA、蛋白质或膜结构;维生素 C 还可使双硫键(?S?S?)还原为巯基，在体内与其他抗氧化剂一起清除自由基，在体内氧化防御系统中起着重要作用20。许多研究均证实维生素具有解毒作用。当给氟中毒大鼠投以维生素 C 后,维生素 C 可通过某种作用机制,减轻或消除氟对能量代谢的影响,促使氟在体内代谢,加速氟的排除。4 硒、维生素 C 对高氟所致脂质过氧化影响研究的展望 关于硒、维生素 C 与其他元素联合作用对氟致脂质过氧化的影响，近年来已开始研究。有研究发现，氟、镉可12键入文字引起大鼠睾丸脂质过氧化作用增强,抗氧化酶活性降低,而硒的作用甚微。当三者中任意二者联合时，可降低脂质过氧化作用

28、,三者联合时作用更强21。有实验研究碘及碘硒联用对氟致小鼠脑组织抗氧化能力下降的影响，发现适当浓度的碘或碘硒联用能使小鼠脑内 SOD 活性显著升高、脂褐素含量显著下降，而碘浓度过高则产生协同毒性作用22。克里木等研究发现：用 100 mg/kg 的维生素 C、50 mg/kg 的维生素 E 联合干预 9个月，可明显拮抗氟诱导的大鼠的脂质过氧化，显著增强大鼠肝组织内 SOD、GSH?Px和 CAT 的活性12。关于硒和维生素 C 联合作用对氟致脂质过氧化影响的研究至今还未见报道。维生素C 和硒为地方性氟中毒抗氧化治疗的主要成分23，两种物质联合作用对氟致脂质过氧化影响的研究是人们极为关注的问题，

29、研究结果将对指导地方性氟中毒病区的日常膳食和治疗，开展综合预防和治疗提供科学依据。【参考文献】tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！取混合对照品贮备液适量，置 6 个容量瓶中，分别加入 0.1 mol L-1 HCLO4 稀释成不13键入文字同质量浓度的系列混合对照品溶液，使所含各对照品的质量浓度分别为 0.004、0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 g mL-1,分别精密吸取 15 L 进样。以各组分的质量浓度( )为横坐标,各组分的峰面积(A)为纵坐标进行线性回归,4 种单胺类神经递质的线性关系考察结果见表 1。表 1 4 种单胺类神经递质的线性关系考察结果2.5

30、 精密度试验分别配制低(0.02 g mL-1)、中(0.5 g mL-1)、高(2.5 g mL-1)3 种不同质量浓度的混合对照品溶液,分装后贮存于-80 冰箱内。日内连续测 5 次,计算日内精密度;每份样本每日测 5 次,连续测定 5 日,计算日间精密度，见表 2。2.6 稳定性试验取供试品溶液，分别于 0、4、8、12、24 h 进样 10 L，计算各组分峰面积积分值RSD 值，分别为 1.18%(NE)、3.55%(DA)、1.19%(5?HIAA)、0.87%(5?HT)，表明供试品溶液在 4 条件下放置 24 h 稳定性良好。2.7 加样回收率实验14键入文字取大鼠脑组织,经预处理后测定峰面积。再取上述脑组织分别加入低(0.02 g mL-1)、中(0.5 g mL-1)、高(2.5 g mL-1)3 种浓度的混合对照品溶液，按照 2.2.4 项下方法制备加样回收供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见