RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程.docx

1、RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程 SXYJ-GZ-02071 目的 深低温长期（10年）保存RhD阴性红细胞2 适用范围 4保存的6天以内的RhD阴性红细胞或全血3 职责 操作者负责依据此程序进行RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作4 材料与设备 试剂及耗材 ACP215型甘油化、细胞洗涤系统耗材、红细胞低温保护剂（160ml/袋）、9%高渗盐溶液（80ml/袋）、无菌生理盐水（1000ml/袋）、废液袋、800ml/1000ml无菌空袋、分浆夹、离心机、无菌接管机、冰冻保存纸盒、-80冰箱等（注：手工操作时需准备输血器）。5 操作方法 5.1

2、甘油化5.1.1 检测合格的4保存的6天以内的RhD阴性全血或红细胞悬液。从供血科取预冻存血液，核对后，经CAABB系统内部搬运、接收、处理、转换、复制条码。5.1.2 将血液配平后， 2500g18离心12min（离心机程序12）。5.1.2.1 红细胞悬液用无菌接管机与废液袋连接，去除保养液，不去白膜层。5.1.2.2 全血分离血浆后，经CAABB系统内部搬运至包装组，以下操作与红细胞悬液相同。5.1.3 开启电源，设备自检。离心机盖需反复开关三次进入选择程序屏幕 选择甘油化程序（按“MODIFY PROGRAM”键使箭头指向“甘油化（GLYCEROLIZATION）”，再按“YES”键确

3、认） 安装耗材（见下图）。1. 甘油穿刺器2. 带栓泵管3. 0.2 微米细菌滤器4. 抽血压监测器（DPM）接头5. 与红细胞袋无菌连接的热合软管5.1.3.1 安装甘油化管路：a 用锁合轧口夹住管道段的穿刺针连接部位；b 把两个蓝色泵固定栓之间的管道段从前到后装入血液（前）泵中；c 把两个泵固定栓之间的泵管段从前到后装入血液泵上；d 把管道固定在每个管道引导装置中，使每个泵固定栓位于管道引导装置右侧；e 顺时针旋转泵，使泵头槽口抓住管道，把它完全拉入泵中；旋转泵头1/4圈，确保管道在泵中的位置正确，泵应能自由旋转。5.1.3.2 装入BLAD管道和DPM接头：a 把泵排出管（无色管道）装入

4、BLAD，把细菌滤器垂直悬挂在ACP215全自动细胞处理系统前面的泵道上；b 管道装入BLAD后，核实泵固定栓位置紧靠管道引导装置；c 把抽血压监测器接头连接在位于ACP215全自动细胞处理系统前面的压力感知器上；d 把滤器紧压在DPM上，同时顺时针旋转1/4圈以确保密封。5.1.3.3 连接溶液和血液制品：a 把甘油挂在盐水架上，把甘油管路穿刺针插入甘油袋接口中；b 用无菌连接装置把甘油化管路的热封端与红细胞袋管道对接c 挤压对接部位并滚动这个部位到完全张开状态，确保无菌对接没有闭塞甘油化管路；d 用磁体把红细胞袋固定在摇床平台上；e 放开甘油管路上的锁合轧口 5.1.4 检查耗材安装，按“

5、是”（YES）开始耗材核对表5.1.4.1 核实细菌滤器正确位于血液泵与红细胞袋之间，按“是”（YES）继续5.1.4.2 核实耗材与红细胞袋无菌对接，按“是”（YES）继续5.1.4.3 核实滴注器上孔的红色小片已打开，按“是”（YES）继续5.1.4.4 核实甘油袋已被插入，滴注器已预冲，按“是”（YES）继续5.1.4.5 核实红细胞袋已固定在摇床上，按“是”（YES）继续5.1.4.6 键入操作人员。按向上/向下键(YES/NO)键入姓名代号，按“保存”（SAVE PROGRAM）认可。输入正确时，按“是”(YES)继续；若输入错误，按“否”（NO）重新键入，回到上一屏，重复本步骤。5

6、.1.4.7 进入“修改参数”程序（甘油化参数见此操作规程附件2） 按START键系统甘油化程序开始。5.1.5 甘油化过程：按ACP215全自动细胞处理系统START键启动摇床和血液泵。处理完成计算的甘油容量后，泵停止工作，30秒后摇床停止工作。5.1.6 机器发出嘟嘟声，确认打印机已联机，按“是”（YES）继续。5.1.7 确认打印结果，按“是”（YES）继续。5.1.8 甘油化程序结束（GLYCEROLIZATION COMPLETE），拆除耗材，关机5.1.9 将甘油化红细胞室温静置30分钟后，于41250g离心5min（离心机程序13），去除上清后充分混匀。5.1.10 将甘油化的红

7、细胞移入800ml/1000ml空袋内，核对献血条码，称重并记录后，放入纸盒固定，-65以下冻存。5.2 去甘油化5.2.1 将预复苏血液1或2单位（同一人份）从-65以下冰箱中取出，在40水浴中轻轻摇动使之快速解冻，手触外包装袋有温感。5.2.2 取出去甘油化耗材，关闭每个管路的滑动夹具，并检查管路是否密闭。5.2.3 开启电源，设备自检。离心机盖需反复开关三次进入选择程序屏幕 选择去甘油化程序（按“MODIFY PROGRAM”键使箭头指向“去甘油化（DE- GLYCEROLIZATION）”，再按“YES”键确认） 安装耗材（见下图）。1. 溶液管路2. 0.2 微米细菌滤器3. 抽血压

8、监测器（DPM）接头4. 与融化红细胞袋无菌连接的热合软管5. 成品收集袋6. BMB离心杯（275ml）7. 系统压监测器（SPM）接头8. 废液袋5.2.3.1 取出最终制品袋，把它悬挂在前面板左侧的小袋钉上。5.2.3.2 取出两个袋管道，把红细胞袋管道装入红色标记阀，把最终制品袋印刷管道装入白色标记阀。5.2.3.3 取出制品废液袋和绿色管道，把制品废液袋悬挂在前面板右侧的大袋钉上，把绿色管道装入绿色标记阀。5.2.3.4 取出溶液管道，暂时放在机盖上，安装离心杯：a. 打开离心机盖，将离心杯装入卡盘（离心杯管座正确定向，使流出口向右）；b. 紧压离心杯肩部，直到离心杯不再向下移动，确

9、保离心杯正确安装； c. 关严离心机盖，使离心机盖开关处于锁定状态。5.2.3.5 把两个蓝色泵固定栓之间的管道段从前到后装入血液（前）泵中：a. 把两个泵固定栓之间的泵管道段环绕在泵头的凹形肩上；b. 把管道固定在每个管道引导装置中，使每个固定栓位于管道引导装置右侧；c. 顺时针旋转泵，使泵头槽口抓住管道，把它完全拉入泵中；d. 旋转泵头1/4圈，确保管道在泵中的位置正确，泵应能自由旋转。 5.2.3.6 装入BLAD管道和DPM接头：a. 把泵排出管（无色管道）装入BLAD，把细菌滤器垂直悬挂在ACP215全自动细胞处理系统前面的泵道上；b. 管道装入BLAD后，核实泵固定栓位置紧靠管道引

10、导装置；c. 把抽血压监测器（DPM）接头连接在位于ACP215全自动细胞处理系统前面的压力感知器（DPM）上；d. 把滤器紧压在DPM上，同时顺时针旋转1/4圈以确保密封。相同方法把系统压力监测器（SPM）接头连接到SPM上。5.2.3.7 把蓝、白色泵固定栓之间的管道段从前到后装入溶液（后）泵中，安装与4.3.3.5中的ad方法相同。5.2.3.8 把溶液泵与溶液管路的“Y”形三通接头之间的无色管道穿入溶液管路气泡监测器（SLAD）。5.2.3.9 把相应的管道段装入其余3个阀中，3个管道段各有与阀的颜色相配的色条：橙色为添加液管路（现处于不用状态）；黄色为等渗盐水管路；蓝色为高渗盐水管路

11、。5.2.3.10 连接溶液和血液制品：a. 把9%NaCl溶液袋与蓝色管路连接；b. 把0.9% NaCl溶液袋与黄色管路连接；c. 用无菌连接装置把红色管路与红细胞袋管道对接，挤压对接部位并滚动这个部位到完全张开状态，确保无菌对接管路没有渗漏及闭塞；d. 用磁体固定红细胞袋于摇床平台上；e. 打开所有的滑动夹具，检查无菌连接熔接点是否完全张开，管道无扭结。5.2.4 安装完毕后，按“是”（YES）继续。5.2.4.1 机器询问是否校准流出线传感器。按“否”（NO）避开校准（常规选项），继续下一步骤。5.2.4.2 离心杯安装测试a. 确定转筒安装适当，（建议安装时总是要向下压离心杯肩部），

12、确定离心机盖已锁住，按“是”（YES）机器自动“检验离心机”。b. 若你在试验期间没有听到从转筒发出异常噪声，按“否”（NO）继续下一步骤c. 若听到异常噪声，按“是”（YES）。d. 重新安装耗材，按“是”（YES）继续e. 向下压紧离心杯，确认离心杯安装到位。按“是”（YES）继续f. 重复a、b步骤5.2.4.3 耗材装入后，机器即引导用户通过一组核查问题以确保耗材正确装入，按“YES”键继续5.2.4.4 核实蓝色管道正确安装在蓝色阀中，按“是”（YES）继续a. 核实黄色管道正确安装在黄色阀中，按“是”（YES）继续b. 核实橙色管道正确安装在橙色阀中，按“是”（YES）继续c. 核

13、实红色管道正确安装在红色阀中，按“是”（YES）继续d. 核实透明管道正确安装在白色阀中，按“是”（YES）继续e. 核实绿色管道正确安装在绿色阀中，按“是”（YES）继续f. 核实管道正确安装在感知器槽内，盖上盖子，按“是”（YES）继续g. 核实蓝色条纹管道与80/160ml 9%NaCl溶液正确连接，按“是”（YES）继续h. 核实黄色条纹管道与0.9% NaCl溶液袋正确连接，按“是”（YES）继续i. 核实溶液管道正确安装在溶液管路气泡监测器中，按“是”（YES）继续j. 核实溶液管路正确安装在溶液泵中，按“是”（YES）继续k. 核实血液管道正确安装在血液泵中，按“是”（YES）继

14、续l. 核实血液管道正确安装在血液管路气泡监测器中，按“是”（YES）继续m. 核实离心杯正确安装在离心机中，按“是”（YES）继续n. 核实红细胞袋与耗材红色条纹管道无菌连接，按“是”（YES）继续o. 核实红细胞正确固定在摇床上，按“是”（YES）继续p. 键入操作人员。按向上/向下键(YES/NO)键入你的姓名代号。按“保存”（SAVE PROGRAM）认可。输入正确时，按“是”(YES)继续；若输入错误，按“否”（NO）重新键入，回到上一屏，重复本步骤。q. 按“修改程序”（MODIFY PROGRAM）键修改程序参数（去甘油化参数见此操作规程附件3） 按START键系统去甘油化程序开

15、始。5.2.5 去甘油化过程：按START键启动去甘油化步骤。核实无菌连接，如果按照特定标准不能保持压力水平，屏幕显示：请检查血液袋中空气，如果观察到血袋中空气过多，则改变血袋位置，确保空气转移到血液袋的顶部，然后按“Yes”键继续 屏幕显示重复无菌连接检验，如果检验顺利写成，则步骤继续正常进行。如果检验再次不成功，则屏幕显示：通知操作人员系统有泄漏，按“Yes”键继续 制品使用期限于24小时，按“Yes”键继续 屏幕显示“制品使用期限于24小时”信息时，操作人员可选择中断步骤，或者选择继续进行步骤，并了解制品试用期减至24小时，按“START”键继续 。5.2.6 结束：确认废液上清液颜色是

16、否可接受，接受按“是”（YES）继续；不接受按“否”（NO）继续。5.2.6.1 确认机器发出嘟嘟声，确认打印机已联机，按“是”（YES）继续。5.2.6.2 确认打印结果，按“是”（YES）继续。5.2.6.3 去甘油程序结束（DE-GLYCEROLIZATION COMPLETE），拆除耗材，关机。5.2.6.4 如果制备的冰冻解冻去甘油红细胞为1单位，用无菌导管连接器连接一200ml转移袋，2500g4离心8min(离心机程序14)后，去除净重100g。5.2.6.5 质量标准：血液制品容量标准（ml）重量范围（g）冰冻解冻去甘油红细胞1单位20010189231冰冻解冻去甘油红细胞2单

17、位400103994625.2.6.6 取下产品袋，用热合机热合管道，留取配血用样本，建立搬运筐搬运血液至包装组。5.2.7 微机管理流程打开CAABB2程序 产品 成分转化（源成分选择冰冻红细胞，目的成分选择去甘油红细胞） 输入献血编号 保持期选“自当前日期24小时” 转化 确定内部搬运新建 目的机构（包装组） 献血编号 容器选“包装待检冰箱”开始搬运结束任务 退出程序5.3 修改当前库存冰冻红细胞的状态5.3.1 每次对RhD阴性血液冻存及去甘油后均要对当前库存表进行及时修改。5.3.2 复苏时若患者抗体筛选结果为阴性，则按冻存先后顺序取RhD阴性血液进行去甘油操作；若患者存在Rh系统特异

18、性抗体时，则选择Rh分型相同或相合的RhD阴性血液进行去甘油操作。5.3.3 冻存RhD阴性血液发出后，后序血液向前移动相应位置，当前电子表格位置删除，右侧单元格左移。5.3.4 新增冻存RhD阴性血液添加到ABO同型位置最后单元格内。5.3.5 每次修改保存后均重新打印，参见JL-SXYJ-0123当前库存表格。6 应急预案6.1 异常情况发生后需立即确认的两种情况6.1.1 发生任何异常情况，在血液未被吸入ACP215离心杯内时，只需重新根据上述异常情况数据修改操作即可，可连通管道，用止血钳夹住导管，并将所有夹片处于闭合状态。6.1.2 异常情况发生于洗涤操作步骤中，血液已被吸入ACP21

19、5离心杯内时，需要手工将ACP215离心杯内的血液转入冰冻红细胞保存袋内，再重新根据上述异常情况数据修改操作即可。6.1.3 洗涤过程发生异常情况终止程序时，关机后重新安装管路，只需将9%高渗盐溶液换成生理盐水，其它程序不变。6.2 手工操作6.2.1 甘油化6.2.1.1 从供血科取预冻存血液，核对后，经CAABB系统接收、处理、转换后，复制献血条码。6.2.1.2 将血液配平后， 2500g18离心12min（离心机程序12），用无菌接管机与废液袋连接，去除保养液，不去白膜层。6.2.1.3 用无菌接管机连接甘油和输血器，加入57.1%甘油(每单位红细胞加160ml),在410分钟内完成（

20、注意：边加边轻摇）。6.2.1.4 核对条码、血型无误后，热合，置室温平衡30分，于41250g离心5min（离心机程序13），去除上清后充分混匀。6.2.1.5 将甘油化的红细胞移入空袋内，核对献血条码，称重并记录后，放入纸盒固定，-65以下冻存。6.2.2 去甘油化（1单位）6.2.2.1 根据临床申请选择适合的冻存血液。6.2.2.2 在40水浴中快速解冻（约3分钟）。6.2.2.3 加9%NaCl 80ml（6080滴）边加边轻摇。平衡3分钟后，加HES100ml，开始稍慢后成流（约2分加完）离心1250g8分钟，弃上清。6.2.2.4 加HES150ml（成细流）边加边摇，使细胞充分

21、悬浮均匀，加0.9%NaCl 100ml（80100滴）2500g10分钟，弃上清。6.2.2.5 成细流加50mlHES后，再加0.9%NaCl 150ml,边加边摇,2500g离心10分钟，弃上清。6.2.2.6 成流加0.9%NaCl 150ml， 2500g离心10分钟，弃上清。加入0.9%无菌盐水100ml，悬浮红细胞，过滤并倒入另一个空袋中，核对条码，贴标签，进行微机转换，搬运至包装室待检冰箱。7 注意事项7.1 要求操作全程戴乳胶手套。7.2 甘油化及去甘油化耗材建立电子档案，实施动态管理，参见血型参比实验室耗材接收使用记录（JL-SXYJ-0508）。冰冻保存空袋（四川南格尔生

22、物医学股份有限公司）有效期为4年，甘油化使用期限为1年，冰冻保存期限为3年。（例如：批号091229，失效期2013年11月的空袋，甘油化在2010年11月前使用，去甘油化在2013年11月前完成。）7.3 去甘油操作时，提前10分钟开机，血液水浴融化时至手摸有点温度为好。7.4 去甘油两次回吸过程中，不要调整泵速，第一次回吸时，将血袋下拉至低于震荡器位置；第二次回吸时将血袋挂在机器液体架上。8 依据 全国临床检验操作规程（第3版）中华人民共和国卫生部医政司及ACP215型细胞洗涤系统操作规程。9 相关记录冰冻细胞当前库存状态分布表（JL-SXYJ-0123）血型参比实验室耗材接收使用记录（J

23、L-SXXJ-0508-1）附件1：RhD阴性血液甘油化及去甘油化流程图图1：甘油化流程图 离心 (1)离心 (2)离心力：2500g离心力：2500g时 间：12 min时 间：5 min温 度：18温 度：4 图2：去甘油化流程图1单位冻融洗涤后离心1单位冻融上清成品净重：离心力：2500g去除净重：100g1单位：189231g时 间：8 min2单位：399462g温 度：4附件2：ACP215甘油化程序参数说明英文原文参数单位默认设置Unit Weight红细胞重量克185RBC Unit Hematocrit红细胞压积%75RBC Unit Osmolarity红细胞摩尔渗透压Os

24、m/kgH2O 320Glycerol Concentration甘油百分比浓度%57Glycerol Conc. Target甘油目标浓度%40Glycerol Osmolarity甘油毫摩尔渗透压Osm/kgH2O 7230Target Osmolarity Rate目标毫摩尔渗透压比率Osm/kgH2O/分钟500Max Glycerol Flow Rate最大甘油混入率毫升/分钟70Constant Flow持续混入-NoGlycerol Flow Rate甘油混入率毫升/分钟60附件3：ACP215去甘油程序参数说明ACP215去甘油程序参数,按“MODIFY PROGRAM”键核对

25、并修改英文原文中文解释数值2u红细胞1u红细胞Thawde Unit Weight解冻红细胞重量(g)修改(称重去尾数后-10)Thawde Unit Hct解冻红细胞压积(%)5070Min Flow Rate最小流速(ml/min)5050Bowl Volume离心杯容量(ml)275275Centrifuge Speed 离心机转速(rpm)80008000Thawde Unit Osmolarity解冻红细胞渗透压47005100Hyper Soln Volume浓盐水量(ml)16080Hyper Soln Flow Rate浓盐水流速(ml/min)15080Hyper Equal

26、ize Delay 浓盐水混匀时间(s)150150Dilution To Wash Delay稀释至洗涤混匀时间(s)6060Osmolarity Rate 渗透压300500Num Saline Dilutions生理盐水稀释次数22Nacl Dilution Vol(#1)生理盐水稀释量(#1,ml)340340Nacl Dilution Vol(#2)生理盐水稀释量(#2,ml)400400Constant Dilution Rate是否以恒定速率稀释NONONacl Rinse Vol(#1)生理盐水冲洗量(ml)6050Max Bowl Fill Rate最大进杯流速(ml/min

27、)150150Min Bowl Fill Rate最小进杯流速(ml/min)5050Num Wash Cycles洗涤次数35Wash Soln Vol(#1)洗涤用生理盐水量(#1,ml)10060Wash Soln Vol(#2)洗涤用生理盐水量(#2,ml)30070Wash Soln Vol(#3)洗涤用生理盐水量(#3,ml)800100Wash Soln Vol(#4)洗涤用生理盐水量(#4,ml)150Wash Soln Vol(#5)洗涤用生理盐水量(#5,ml)300Wash Flow Rate(#1)洗涤流速(#1,ml/min)5050Wash Flow Rate(#2

28、)洗涤流速(#2,ml/min)7550Wash Flow Rate(#3)洗涤流速(#3,ml/min)10075Wash Flow Rate(#4)洗涤流速(#4,ml/min)75Wash Flow Rate(#5)洗涤流速(#5,ml/min)100Equilibration Time混匀时间(s)4545Re-Centrifugation Time再离心时间(s)6060Num Resuspension重新悬浮次数01Preservative Soln Vol保存液量(ml)240Preservative Soln Rate保存液流速(ml/min)120Bowl Empty Rat

29、e离心杯排空流速(ml/min)200200附件4： ACP215全自动血液处理仪制备冰冻红细胞操作方法开机后，设备进行系统自检： 安装完耗材后，按“YES”键继续 无异常，按“YES”键继续如果所有的*都变为P，表示自检通过 将离心机盖旋钮旋至关闭位置 连接复方甘油溶液，按“YES”键继续将离心机盖旋钮旋至开启位置重复一次后，进入选择程序屏幕 将红细胞袋通过无菌导管连接器与保存耗材连接后置于摇床上，按“YES”键继续 选择甘油化（按“MODIFY PROGRAM”键使箭头指向“甘油化”，再按“YES”键确认） 字母选定后按“SAVE PROGRAM”确定 通过按“YES”或“NO”键输入甘油浓度（如57，输入57），按“MODIFY”继续修改确认后，按“YES”继续 通过按“YES”或“NO”键输入目标甘油浓度（如40，输入40），按“MODIFY”继续修改按”MODIFY”键,通过按“YES”或“NO”键输入 通过按“YES”或“NO”键输入目标甘油浓度血液的净重（克），按“MODIFY”继续修改 （如40，输入40），按“MODIFY”继续修改 通过按“YES”或“NO”键输入红细胞比积 通过按“YES”或“NO”键输入甘油渗透压（如75，输入75），按“MODI继续修改 （默认值：