RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程.docx
《RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程.docx(38页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程
RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程SXYJ-GZ-0207
1目的深低温长期(10年)保存RhD阴性红细胞
2适用范围4℃保存的6天以内的RhD阴性红细胞或全血
3职责操作者负责依据此程序进行RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作
4材料与设备试剂及耗材ACP215型甘油化、细胞洗涤系统耗材、红细胞低温保护剂(160ml/袋)、9%高渗盐溶液(80ml/袋)、无菌生理盐水(1000ml/袋)、废液袋、800ml/1000ml无菌空袋、分浆夹、离心机、无菌接管机、冰冻保存纸盒、-80℃冰箱等(注:
手工操作时需准备输血器)。
5操作方法
5.1甘油化
5.1.1检测合格的4℃保存的6天以内的RhD阴性全血或红细胞悬液。
从供血科取预冻存血液,核对后,经CAABB系统内部搬运、接收、处理、转换、复制条码。
5.1.2将血液配平后,2500g18℃离心12min(离心机程序12)。
5.1.2.1红细胞悬液用无菌接管机与废液袋连接,去除保养液,不去白膜层。
5.1.2.2全血分离血浆后,经CAABB系统内部搬运至包装组,以下操作与红细胞悬液相同。
5.1.3开启电源,设备自检。
离心机盖需反复开关三次-→进入选择程序屏幕→选择甘油化程序(按“MODIFYPROGRAM”键使箭头指向“甘油化(GLYCEROLIZATION)”,再按“YES”键确认)-→安装耗材(见下图)。
1.甘油穿刺器
2.带栓泵管
3.0.2微米细菌滤器
4.抽血压监测器(DPM)接头
5.与红细胞袋无菌连接的热合软管
5.1.3.1安装甘油化管路:
a.用锁合轧口夹住管道段的穿刺针连接部位;
b.把两个蓝色泵固定栓之间的管道段从前到后装入血液(前)泵中;
c.把两个泵固定栓之间的泵管段从前到后装入血液泵上;
d.把管道固定在每个管道引导装置中,使每个泵固定栓位于管道引导装置右侧;
e.顺时针旋转泵,使泵头槽口抓住管道,把它完全拉入泵中;旋转泵头1/4圈,确保管道在泵中的位置正确,泵应能自由旋转。
5.1.3.2装入BLAD管道和DPM接头:
a.把泵排出管(无色管道)装入BLAD,把细菌滤器垂直悬挂在ACP215全自动细胞处理系统前面的泵道上;
b.管道装入BLAD后,核实泵固定栓位置紧靠管道引导装置;
c.把抽血压监测器接头连接在位于ACP215全自动细胞处理系统前面的压力感知器上;
d.把滤器紧压在DPM上,同时顺时针旋转1/4圈以确保密封。
5.1.3.3连接溶液和血液制品:
a.把甘油挂在盐水架上,把甘油管路穿刺针插入甘油袋接口中;
b.用无菌连接装置把甘油化管路的热封端与红细胞袋管道对接
c.挤压对接部位并滚动这个部位到完全张开状态,确保无菌对接没有闭塞甘油化管路;
d.用磁体把红细胞袋固定在摇床平台上;
e.放开甘油管路上的锁合轧口
5.1.4检查耗材安装,按“是”(YES)开始耗材核对表
5.1.4.1核实细菌滤器正确位于血液泵与红细胞袋之间,按“是”(YES)继续
5.1.4.2核实耗材与红细胞袋无菌对接,按“是”(YES)继续
5.1.4.3核实滴注器上孔的红色小片已打开,按“是”(YES)继续
5.1.4.4核实甘油袋已被插入,滴注器已预冲,按“是”(YES)继续
5.1.4.5核实红细胞袋已固定在摇床上,按“是”(YES)继续
5.1.4.6键入操作人员。
按向上/向下键(YES/NO)键入姓名代号,按“保存”(SAVEPROGRAM)认可。
输入正确时,按“是”(YES)继续;若输入错误,按“否”(NO)重新键入,回到上一屏,重复本步骤。
5.1.4.7进入“修改参数”程序(甘油化参数见此操作规程附件2)-→按START键系统甘油化程序开始。
5.1.5甘油化过程:
按ACP215全自动细胞处理系统START键启动摇床和血液泵。
处理完成计算的甘油容量后,泵停止工作,30秒后摇床停止工作。
5.1.6机器发出嘟嘟声,确认打印机已联机,按“是”(YES)继续。
5.1.7确认打印结果,按“是”(YES)继续。
5.1.8甘油化程序结束(GLYCEROLIZATIONCOMPLETE),拆除耗材,关机
5.1.9将甘油化红细胞室温静置30分钟后,于4℃1250g离心5min(离心机程序13),去除上清后充分混匀。
5.1.10将甘油化的红细胞移入800ml/1000ml空袋内,核对献血条码,称重并记录后,放入纸盒固定,-65℃以下冻存。
5.2去甘油化
5.2.1将预复苏血液1或2单位(同一人份)从-65℃以下冰箱中取出,在40℃水浴中轻轻摇动使之快速解冻,手触外包装袋有温感。
5.2.2取出去甘油化耗材,关闭每个管路的滑动夹具,并检查管路是否密闭。
5.2.3
开启电源,设备自检。
离心机盖需反复开关三次-→进入选择程序屏幕→选择去甘油化程序(按“MODIFYPROGRAM”键使箭头指向“去甘油化(DE-GLYCEROLIZATION)”,再按“YES”键确认)-→安装耗材(见下图)。
1.溶液管路
2.0.2微米细菌滤器
3.抽血压监测器(DPM)接头
4.与融化红细胞袋无菌连接的热合软管
5.成品收集袋
6.BMB离心杯(275ml)
7.系统压监测器(SPM)接头
8.废液袋
5.2.3.1取出最终制品袋,把它悬挂在前面板左侧的小袋钉上。
5.2.3.2取出两个袋管道,把红细胞袋管道装入红色标记阀,把最终制品袋印刷管道装入白色标记阀。
5.2.3.3取出制品废液袋和绿色管道,把制品废液袋悬挂在前面板右侧的大袋钉上,把绿色管道装入绿色标记阀。
5.2.3.4取出溶液管道,暂时放在机盖上,安装离心杯:
a.打开离心机盖,将离心杯装入卡盘(离心杯管座正确定向,使流出口向右);
b.紧压离心杯肩部,直到离心杯不再向下移动,确保离心杯正确安装;
c.关严离心机盖,使离心机盖开关处于锁定状态。
5.2.3.5把两个蓝色泵固定栓之间的管道段从前到后装入血液(前)泵中:
a.把两个泵固定栓之间的泵管道段环绕在泵头的凹形肩上;
b.把管道固定在每个管道引导装置中,使每个固定栓位于管道引导装置右侧;
c.顺时针旋转泵,使泵头槽口抓住管道,把它完全拉入泵中;
d.旋转泵头1/4圈,确保管道在泵中的位置正确,泵应能自由旋转。
5.2.3.6装入BLAD管道和DPM接头:
a.把泵排出管(无色管道)装入BLAD,把细菌滤器垂直悬挂在ACP215全自动细胞处理系统前面的泵道上;
b.管道装入BLAD后,核实泵固定栓位置紧靠管道引导装置;
c.把抽血压监测器(DPM)接头连接在位于ACP215全自动细胞处理系
统前面的压力感知器(DPM)上;
d.把滤器紧压在DPM上,同时顺时针旋转1/4圈以确保密封。
相同方法把系统压力监测器(SPM)接头连接到SPM上。
5.2.3.7把蓝、白色泵固定栓之间的管道段从前到后装入溶液(后)泵中,安装与4.3.3.5中的a~d方法相同。
5.2.3.8把溶液泵与溶液管路的“Y”形三通接头之间的无色管道穿入溶液管路气泡监测器(SLAD)。
5.2.3.9把相应的管道段装入其余3个阀中,3个管道段各有与阀的颜色相配的色条:
橙色为添加液管路(现处于不用状态);黄色为等渗盐水管路;蓝色为高渗盐水管路。
5.2.3.10连接溶液和血液制品:
a.把9%NaCl溶液袋与蓝色管路连接;
b.把0.9%NaCl溶液袋与黄色管路连接;
c.用无菌连接装置把红色管路与红细胞袋管道对接,挤压对接部位并滚动这个部位到完全张开状态,确保无菌对接管路没有渗漏及闭塞;
d.用磁体固定红细胞袋于摇床平台上;
e.打开所有的滑动夹具,检查无菌连接熔接点是否完全张开,管道无扭结。
5.2.4安装完毕后,按“是”(YES)继续。
5.2.4.1机器询问是否校准流出线传感器。
按“否”(NO)避开校准(常规选项),继续下一步骤。
5.2.4.2离心杯安装测试
a.确定转筒安装适当,(建议安装时总是要向下压离心杯肩部),确定离心机盖已锁住,按“是”(YES)机器自动“检验离心机”。
b.若你在试验期间没有听到从转筒发出异常噪声,按“否”(NO)继续下一步骤
c.若听到异常噪声,按“是”(YES)。
d.重新安装耗材,按“是”(YES)继续
e.向下压紧离心杯,确认离心杯安装到位。
按“是”(YES)继续
f.重复a、b步骤
5.2.4.3耗材装入后,机器即引导用户通过一组核查问题以确保耗材正确装入,按“YES”键继续
5.2.4.4核实蓝色管道正确安装在蓝色阀中,按“是”(YES)继续
a.核实黄色管道正确安装在黄色阀中,按“是”(YES)继续
b.核实橙色管道正确安装在橙色阀中,按“是”(YES)继续
c.核实红色管道正确安装在红色阀中,按“是”(YES)继续
d.核实透明管道正确安装在白色阀中,按“是”(YES)继续
e.核实绿色管道正确安装在绿色阀中,按“是”(YES)继续
f.核实管道正确安装在感知器槽内,盖上盖子,按“是”(YES)继续
g.核实蓝色条纹管道与80/160ml9%NaCl溶液正确连接,按“是”(YES)继续
h.核实黄色条纹管道与0.9%NaCl溶液袋正确连接,按“是”(YES)继续
i.核实溶液管道正确安装在溶液管路气泡监测器中,按“是”(YES)继续
j.核实溶液管路正确安装在溶液泵中,按“是”(YES)继续
k.核实血液管道正确安装在血液泵中,按“是”(YES)继续
l.核实血液管道正确安装在血液管路气泡监测器中,按“是”(YES)继续
m.核实离心杯正确安装在离心机中,按“是”(YES)继续
n.核实红细胞袋与耗材红色条纹管道无菌连接,按“是”(YES)继续
o.核实红细胞正确固定在摇床上,按“是”(YES)继续
p.键入操作人员。
按向上/向下键(YES/NO)键入你的姓名代号。
按“保存”(SAVEPROGRAM)认可。
输入正确时,按“是”(YES)继续;若输入错误,按“否”(NO)重新键入,回到上一屏,重复本步骤。
q.按“修改程序”(MODIFYPROGRAM)键修改程序参数(去甘油化参数见此操作规程附件3)-→按START键系统去甘油化程序开始。
5.2.5去甘油化过程:
按START键启动去甘油化步骤。
核实无菌连接,如果按照特定标准不能保持压力水平,屏幕显示:
请检查血液袋中空气,如果观察到血袋中空气过多,则改变血袋位置,确保空气转移到血液袋的顶部,然后按“Yes”键继续-→屏幕显示重复无菌连接检验,如果检验顺利写成,则步骤继续正常进行。
如果检验再次不成功,则屏幕显示:
通知操作人员系统有泄漏,按“Yes”键继续-→制品使用期限于24小时,按“Yes”键继续-→屏幕显示“制品使用期限于24小时”信息时,操作人员可选择中断步骤,或者选择继续进行步骤,并了解制品试用期减至24小时,按“START”键继续。
5.2.6结束:
确认废液上清液颜色是否可接受,接受按“是”(YES)继续;不接受按“否”(NO)继续。
5.2.6.1确认机器发出嘟嘟声,确认打印机已联机,按“是”(YES)继续。
5.2.6.2确认打印结果,按“是”(YES)继续。
5.2.6.3去甘油程序结束(DE-GLYCEROLIZATIONCOMPLETE),拆除耗材,关机。
5.2.6.4如果制备的冰冻解冻去甘油红细胞为1单位,用无菌导管连接器连接一200ml转移袋,2500g4℃离心8min(离心机程序14)后,去除净重100g。
5.2.6.5质量标准:
血液制品
容量标准(ml)
重量范围(g)
冰冻解冻去甘油红细胞1单位
200±10%
189~231
冰冻解冻去甘油红细胞2单位
400±10%
399~462
5.2.6.6取下产品袋,用热合机热合管道,留取配血用样本,建立搬运筐搬运血液至包装组。
5.2.7微机管理流程
打开CAABB2程序→产品→成分转化(源成分选择冰冻红细胞,目的成分选择去甘油红细胞)→输入献血编号→保持期选“自当前日期24小时”→转化→确定
内部搬运〔新建→目的机构(包装组)→献血编号→容器选“包装待检冰箱”→开始搬运〕→结束任务→退出程序
5.3修改当前库存冰冻红细胞的状态
5.3.1每次对RhD阴性血液冻存及去甘油后均要对当前库存表进行及时修改。
5.3.2复苏时若患者抗体筛选结果为阴性,则按冻存先后顺序取RhD阴性血液进行去甘油操作;若患者存在Rh系统特异性抗体时,则选择Rh分型相同或相合的RhD阴性血液进行去甘油操作。
5.3.3冻存RhD阴性血液发出后,后序血液向前移动相应位置,当前电子表格位置删除,右侧单元格左移。
5.3.4新增冻存RhD阴性血液添加到ABO同型位置最后单元格内。
5.3.5每次修改保存后均重新打印,参见JL-SXYJ-0123当前库存表格。
6应急预案
6.1异常情况发生后需立即确认的两种情况
6.1.1发生任何异常情况,在血液未被吸入ACP215离心杯内时,只需重新根据上述异常情况数据修改操作即可,可连通管道,用止血钳夹住导管,并将所有夹片处于闭合状态。
6.1.2异常情况发生于洗涤操作步骤中,血液已被吸入ACP215离心杯内时,需要手工将ACP215离心杯内的血液转入冰冻红细胞保存袋内,再重新根据上述异常情况数据修改操作即可。
6.1.3洗涤过程发生异常情况终止程序时,关机后重新安装管路,只需将9%高渗盐溶液换成生理盐水,其它程序不变。
6.2手工操作
6.2.1甘油化
6.2.1.1从供血科取预冻存血液,核对后,经CAABB系统接收、处理、转换后,复制献血条码。
6.2.1.2将血液配平后,2500g18℃离心12min(离心机程序12),用无菌接管机与废液袋连接,去除保养液,不去白膜层。
6.2.1.3用无菌接管机连接甘油和输血器,加入57.1%甘油(每单位红细胞加160ml),在4—10分钟内完成(注意:
边加边轻摇)。
6.2.1.4核对条码、血型无误后,热合,置室温平衡30分,于4℃1250g离心5min(离心机程序13),去除上清后充分混匀。
6.2.1.5将甘油化的红细胞移入空袋内,核对献血条码,称重并记录后,放入纸盒固定,-65℃以下冻存。
6.2.2去甘油化(1单位)
6.2.2.1根据临床申请选择适合的冻存血液。
6.2.2.2在40℃水浴中快速解冻(约3分钟)。
6.2.2.3加9%NaCl80ml(60—80滴)边加边轻摇。
平衡3分钟后,加HES100ml,开始稍慢后成流(约2分加完)离心1250g8分钟,弃上清。
6.2.2.4加HES150ml(成细流)边加边摇,使细胞充分悬浮均匀,加0.9%NaCl100ml(80—100滴)2500g10分钟,弃上清。
6.2.2.5成细流加50mlHES后,再加0.9%NaCl150ml,边加边摇,2500g离心10分钟,弃上清。
6.2.2.6成流加0.9%NaCl150ml,2500g离心10分钟,弃上清。
加入0.9%无菌盐水100ml,悬浮红细胞,过滤并倒入另一个空袋中,核对条码,贴标签,进行微机转换,搬运至包装室待检冰箱。
7注意事项
7.1要求操作全程戴乳胶手套。
7.2甘油化及去甘油化耗材建立电子档案,实施动态管理,参见《血型参比实验室耗材接收使用记录》(JL-SXYJ-0508)。
冰冻保存空袋(四川南格尔生物医学股份有限公司)有效期为4年,甘油化使用期限为1年,冰冻保存期限为3年。
(例如:
批号091229,失效期2013年11月的空袋,甘油化在2010年11月前使用,去甘油化在2013年11月前完成。
)
7.3去甘油操作时,提前10分钟开机,血液水浴融化时至手摸有点温度为好。
7.4去甘油两次回吸过程中,不要调整泵速,第一次回吸时,将血袋下拉至低于震荡器位置;第二次回吸时将血袋挂在机器液体架上。
8依据《全国临床检验操作规程》(第3版)中华人民共和国卫生部医政司及ACP215型细胞洗涤系统操作规程。
9相关记录
冰冻细胞当前库存状态分布表(JL-SXYJ-0123)
血型参比实验室耗材接收使用记录(JL-SXXJ-0508-1)
附件1:
RhD阴性血液甘油化及去甘油化流程图
图1:
甘油化流程图
离心
(1)
离心
(2)
离心力:
2500g
离心力:
2500g
时间:
12min
时间:
5min
温度:
18℃
温度:
4℃
图2:
去甘油化流程图
1单位冻融洗涤后离心
1单位冻融上清
成品净重:
离心力:
2500g
去除净重:
100g
1单位:
189~231g
时间:
8min
2单位:
399~462g
温度:
4℃
附件2:
ACP215甘油化程序参数说明
英文原文
参数
单位
默认设置
UnitWeight
红细胞重量
克
185
RBCUnitHematocrit
红细胞压积
%
75
RBCUnitOsmolarity
红细胞摩尔渗透压
Osm/kgH2O
320
GlycerolConcentration
甘油百分比浓度
%
57
GlycerolConc.Target
甘油目标浓度
%
40
GlycerolOsmolarity
甘油毫摩尔渗透压
Osm/kgH2O
7230
TargetOsmolarityRate
目标毫摩尔渗透压比率
Osm/kgH2O/分钟
500
MaxGlycerolFlowRate
最大甘油混入率
毫升/分钟
70
ConstantFlow
持续混入
-
No
GlycerolFlowRate
甘油混入率
毫升/分钟
60
附件3:
ACP215去甘油程序参数说明
ACP215去甘油程序参数,按“MODIFYPROGRAM”键核对并修改
英文原文
中文解释
数值
2u红细胞
1u红细胞
ThawdeUnitWeight
解冻红细胞重量(g)
修改(称重去尾数后-10)
ThawdeUnitHct
解冻红细胞压积(%)
50
70
MinFlowRate
最小流速(ml/min)
50
50
BowlVolume
离心杯容量(ml)
275
275
CentrifugeSpeed
离心机转速(rpm)
8000
8000
ThawdeUnitOsmolarity
解冻红细胞渗透压
4700
5100
HyperSolnVolume
浓盐水量(ml)
160
80
HyperSolnFlowRate
浓盐水流速(ml/min)
150
80
HyperEqualizeDelay
浓盐水混匀时间(s)
150
150
DilutionToWashDelay
稀释至洗涤混匀时间(s)
60
60
OsmolarityRate
渗透压
300
500
NumSalineDilutions
生理盐水稀释次数
2
2
NaclDilutionVol(#1)
生理盐水稀释量(#1,ml)
340
340
NaclDilutionVol(#2)
生理盐水稀释量(#2,ml)
400
400
ConstantDilutionRate
是否以恒定速率稀释
NO
NO
NaclRinseVol(#1)
生理盐水冲洗量(ml)
60
50
MaxBowlFillRate
最大进杯流速(ml/min)
150
150
MinBowlFillRate
最小进杯流速(ml/min)
50
50
NumWashCycles
洗涤次数
3
5
WashSolnVol(#1)
洗涤用生理盐水量(#1,ml)
100
60
WashSolnVol(#2)
洗涤用生理盐水量(#2,ml)
300
70
WashSolnVol(#3)
洗涤用生理盐水量(#3,ml)
800
100
WashSolnVol(#4)
洗涤用生理盐水量(#4,ml)
150
WashSolnVol(#5)
洗涤用生理盐水量(#5,ml)
300
WashFlowRate(#1)
洗涤流速(#1,ml/min)
50
50
WashFlowRate(#2)
洗涤流速(#2,ml/min)
75
50
WashFlowRate(#3)
洗涤流速(#3,ml/min)
100
75
WashFlowRate(#4)
洗涤流速(#4,ml/min)
75
WashFlowRate(#5)
洗涤流速(#5,ml/min)
100
EquilibrationTime
混匀时间(s)
45
45
Re-CentrifugationTime
再离心时间(s)
60
60
NumResuspension
重新悬浮次数
0
1
PreservativeSolnVol
保存液量(ml)
240
PreservativeSolnRate
保存液流速(ml/min)
120
BowlEmptyRate
离心杯排空流速(ml/min)
200
200
附件4:
ACP215全自动血液处理仪制备冰冻红细胞操作方法
开机后,设备进行系统自检:
安装完耗材后,按“YES”键继续
无异常,按“YES”键继续
如果所有的*都变为P,表示自检通过
将离心机盖旋钮旋至关闭位置连接复方甘油溶液,按“YES”键继续
将离心机盖旋钮旋至开启位置
重复一次后,进入选择程序屏幕
将红细胞袋通过无菌导管连接器与保
存耗材连接后置于摇床上,按“YES”键继续
选择甘油化
(按“MODIFYPROGRAM”键使箭头指
向“甘油化”,再按“YES”键确认)
字母选定后按“SAVEPROGRAM”确定通过按“YES”或“NO”键输入甘油浓度
(如57%,输入57),按“MODIFY”继续修改
确认后,按“YES”继续通过按“YES”或“NO”键输入目标甘油浓
度(如40%,输入40),按“MODIFY”继续修改
按”MODIFY”键,通过按“YES”或“NO”键输入通过按“YES”或“NO”键输入目标甘油浓度
血液的净重(克),按“MODIFY”继续修改(如40%,输入40),按“MODIFY”继续修改
通过按“YES”或“NO”键输入红细胞比积通过按“YES”或“NO”键输入甘油渗透压
(如75%,输入75),按“MODI继续修改(默认值: