RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程.docx
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RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程
RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作规程SXYJ-GZ-0207
1目的深低温长期（10年）保存RhD阴性红细胞
2适用范围4℃保存的6天以内的RhD阴性红细胞或全血
3职责操作者负责依据此程序进行RhD阴性红细胞甘油化及去甘油化操作
4材料与设备试剂及耗材ACP215型甘油化、细胞洗涤系统耗材、红细胞低温保护剂（160ml/袋）、9%高渗盐溶液（80ml/袋）、无菌生理盐水（1000ml/袋）、废液袋、800ml/1000ml无菌空袋、分浆夹、离心机、无菌接管机、冰冻保存纸盒、-80℃冰箱等（注：
手工操作时需准备输血器）。
5操作方法
5.1甘油化
5.1.1检测合格的4℃保存的6天以内的RhD阴性全血或红细胞悬液。
从供血科取预冻存血液，核对后，经CAABB系统内部搬运、接收、处理、转换、复制条码。
5.1.2将血液配平后，2500g18℃离心12min（离心机程序12）。
5.1.2.1红细胞悬液用无菌接管机与废液袋连接，去除保养液，不去白膜层。
5.1.2.2全血分离血浆后，经CAABB系统内部搬运至包装组，以下操作与红细胞悬液相同。
5.1.3开启电源，设备自检。
离心机盖需反复开关三次－→进入选择程序屏幕→选择甘油化程序（按“MODIFYPROGRAM”键使箭头指向“甘油化（GLYCEROLIZATION）”，再按“YES”键确认）－→安装耗材（见下图）。
1.甘油穿刺器
2.带栓泵管
3.0.2微米细菌滤器
4.抽血压监测器（DPM）接头
5.与红细胞袋无菌连接的热合软管
5.1.3.1安装甘油化管路：
a．用锁合轧口夹住管道段的穿刺针连接部位；
b．把两个蓝色泵固定栓之间的管道段从前到后装入血液（前）泵中；
c．把两个泵固定栓之间的泵管段从前到后装入血液泵上；
d．把管道固定在每个管道引导装置中，使每个泵固定栓位于管道引导装置右侧；
e．顺时针旋转泵，使泵头槽口抓住管道，把它完全拉入泵中；旋转泵头1/4圈，确保管道在泵中的位置正确，泵应能自由旋转。
5.1.3.2装入BLAD管道和DPM接头：
a．把泵排出管（无色管道）装入BLAD，把细菌滤器垂直悬挂在ACP215全自动细胞处理系统前面的泵道上；
b．管道装入BLAD后，核实泵固定栓位置紧靠管道引导装置；
c．把抽血压监测器接头连接在位于ACP215全自动细胞处理系统前面的压力感知器上；
d．把滤器紧压在DPM上，同时顺时针旋转1/4圈以确保密封。
5.1.3.3连接溶液和血液制品：
a．把甘油挂在盐水架上，把甘油管路穿刺针插入甘油袋接口中；
b．用无菌连接装置把甘油化管路的热封端与红细胞袋管道对接
c．挤压对接部位并滚动这个部位到完全张开状态，确保无菌对接没有闭塞甘油化管路；
d．用磁体把红细胞袋固定在摇床平台上；
e．放开甘油管路上的锁合轧口
5.1.4检查耗材安装，按“是”（YES）开始耗材核对表
5.1.4.1核实细菌滤器正确位于血液泵与红细胞袋之间，按“是”（YES）继续
5.1.4.2核实耗材与红细胞袋无菌对接，按“是”（YES）继续
5.1.4.3核实滴注器上孔的红色小片已打开，按“是”（YES）继续
5.1.4.4核实甘油袋已被插入，滴注器已预冲，按“是”（YES）继续
5.1.4.5核实红细胞袋已固定在摇床上，按“是”（YES）继续
5.1.4.6键入操作人员。
按向上/向下键（YES/NO）键入姓名代号，按“保存”（SAVEPROGRAM）认可。
输入正确时，按“是”（YES）继续；若输入错误，按“否”（NO）重新键入，回到上一屏，重复本步骤。
5.1.4.7进入“修改参数”程序（甘油化参数见此操作规程附件2）－→按START键系统甘油化程序开始。
5.1.5甘油化过程：
按ACP215全自动细胞处理系统START键启动摇床和血液泵。
处理完成计算的甘油容量后，泵停止工作，30秒后摇床停止工作。
5.1.6机器发出嘟嘟声，确认打印机已联机，按“是”（YES）继续。
5.1.7确认打印结果，按“是”（YES）继续。
5.1.8甘油化程序结束（GLYCEROLIZATIONCOMPLETE），拆除耗材，关机
5.1.9将甘油化红细胞室温静置30分钟后，于4℃1250g离心5min（离心机程序13），去除上清后充分混匀。
5.1.10将甘油化的红细胞移入800ml/1000ml空袋内，核对献血条码，称重并记录后，放入纸盒固定，-65℃以下冻存。
5.2去甘油化
5.2.1将预复苏血液1或2单位（同一人份）从-65℃以下冰箱中取出，在40℃水浴中轻轻摇动使之快速解冻，手触外包装袋有温感。
5.2.2取出去甘油化耗材，关闭每个管路的滑动夹具，并检查管路是否密闭。
5.2.3
开启电源，设备自检。
离心机盖需反复开关三次－→进入选择程序屏幕→选择去甘油化程序（按“MODIFYPROGRAM”键使箭头指向“去甘油化（DE-GLYCEROLIZATION）”，再按“YES”键确认）－→安装耗材（见下图）。
1.溶液管路
2.0.2微米细菌滤器
3.抽血压监测器（DPM）接头
4.与融化红细胞袋无菌连接的热合软管
5.成品收集袋
6.BMB离心杯（275ml）
7.系统压监测器（SPM）接头
8.废液袋
5.2.3.1取出最终制品袋，把它悬挂在前面板左侧的小袋钉上。
5.2.3.2取出两个袋管道，把红细胞袋管道装入红色标记阀，把最终制品袋印刷管道装入白色标记阀。
5.2.3.3取出制品废液袋和绿色管道，把制品废液袋悬挂在前面板右侧的大袋钉上，把绿色管道装入绿色标记阀。
5.2.3.4取出溶液管道，暂时放在机盖上，安装离心杯：
a.打开离心机盖，将离心杯装入卡盘（离心杯管座正确定向，使流出口向右）；
b.紧压离心杯肩部，直到离心杯不再向下移动，确保离心杯正确安装；
c.关严离心机盖，使离心机盖开关处于锁定状态。
5.2.3.5把两个蓝色泵固定栓之间的管道段从前到后装入血液（前）泵中：
a.把两个泵固定栓之间的泵管道段环绕在泵头的凹形肩上；
b.把管道固定在每个管道引导装置中，使每个固定栓位于管道引导装置右侧；
c.顺时针旋转泵，使泵头槽口抓住管道，把它完全拉入泵中；
d.旋转泵头1/4圈，确保管道在泵中的位置正确，泵应能自由旋转。
5.2.3.6装入BLAD管道和DPM接头：
a.把泵排出管（无色管道）装入BLAD，把细菌滤器垂直悬挂在ACP215全自动细胞处理系统前面的泵道上；
b.管道装入BLAD后，核实泵固定栓位置紧靠管道引导装置；
c.把抽血压监测器（DPM）接头连接在位于ACP215全自动细胞处理系
统前面的压力感知器（DPM）上；
d.把滤器紧压在DPM上，同时顺时针旋转1/4圈以确保密封。
相同方法把系统压力监测器（SPM）接头连接到SPM上。
5.2.3.7把蓝、白色泵固定栓之间的管道段从前到后装入溶液（后）泵中，安装与4.3.3.5中的a～d方法相同。
5.2.3.8把溶液泵与溶液管路的“Y”形三通接头之间的无色管道穿入溶液管路气泡监测器（SLAD）。
5.2.3.9把相应的管道段装入其余3个阀中，3个管道段各有与阀的颜色相配的色条：
橙色为添加液管路（现处于不用状态）；黄色为等渗盐水管路；蓝色为高渗盐水管路。
5.2.3.10连接溶液和血液制品：
a.把9%NaCl溶液袋与蓝色管路连接；
b.把0.9%NaCl溶液袋与黄色管路连接；
c.用无菌连接装置把红色管路与红细胞袋管道对接，挤压对接部位并滚动这个部位到完全张开状态，确保无菌对接管路没有渗漏及闭塞；
d.用磁体固定红细胞袋于摇床平台上；
e.打开所有的滑动夹具，检查无菌连接熔接点是否完全张开，管道无扭结。
5.2.4安装完毕后，按“是”（YES）继续。
5.2.4.1机器询问是否校准流出线传感器。
按“否”（NO）避开校准（常规选项），继续下一步骤。
5.2.4.2离心杯安装测试
a.确定转筒安装适当，（建议安装时总是要向下压离心杯肩部），确定离心机盖已锁住，按“是”（YES）机器自动“检验离心机”。
b.若你在试验期间没有听到从转筒发出异常噪声，按“否”（NO）继续下一步骤
c.若听到异常噪声，按“是”（YES）。
d.重新安装耗材，按“是”（YES）继续
e.向下压紧离心杯，确认离心杯安装到位。
按“是”（YES）继续
f.重复a、b步骤
5.2.4.3耗材装入后，机器即引导用户通过一组核查问题以确保耗材正确装入，按“YES”键继续
5.2.4.4核实蓝色管道正确安装在蓝色阀中，按“是”（YES）继续
a.核实黄色管道正确安装在黄色阀中，按“是”（YES）继续
b.核实橙色管道正确安装在橙色阀中，按“是”（YES）继续
c.核实红色管道正确安装在红色阀中，按“是”（YES）继续
d.核实透明管道正确安装在白色阀中，按“是”（YES）继续
e.核实绿色管道正确安装在绿色阀中，按“是”（YES）继续
f.核实管道正确安装在感知器槽内，盖上盖子，按“是”（YES）继续
g.核实蓝色条纹管道与80/160ml9%NaCl溶液正确连接，按“是”（YES）继续
h.核实黄色条纹管道与0.9%NaCl溶液袋正确连接，按“是”（YES）继续
i.核实溶液管道正确安装在溶液管路气泡监测器中，按“是”（YES）继续
j.核实溶液管路正确安装在溶液泵中，按“是”（YES）继续
k.核实血液管道正确安装在血液泵中，按“是”（YES）继续
l.核实血液管道正确安装在血液管路气泡监测器中，按“是”（YES）继续
m.核实离心杯正确安装在离心机中，按“是”（YES）继续
n.核实红细胞袋与耗材红色条纹管道无菌连接，按“是”（YES）继续
o.核实红细胞正确固定在摇床上，按“是”（YES）继续
p.键入操作人员。
按向上/向下键（YES/NO）键入你的姓名代号。
按“保存”（SAVEPROGRAM）认可。
输入正确时，按“是”（YES）继续；若输入错误，按“否”（NO）重新键入，回到上一屏，重复本步骤。
q.按“修改程序”（MODIFYPROGRAM）键修改程序参数（去甘油化参数见此操作规程附件3）－→按START键系统去甘油化程序开始。
5.2.5去甘油化过程：
按START键启动去甘油化步骤。
核实无菌连接，如果按照特定标准不能保持压力水平，屏幕显示：
请检查血液袋中空气，如果观察到血袋中空气过多，则改变血袋位置，确保空气转移到血液袋的顶部，然后按“Yes”键继续－→屏幕显示重复无菌连接检验，如果检验顺利写成，则步骤继续正常进行。
如果检验再次不成功，则屏幕显示：
通知操作人员系统有泄漏，按“Yes”键继续－→制品使用期限于24小时，按“Yes”键继续－→屏幕显示“制品使用期限于24小时”信息时，操作人员可选择中断步骤，或者选择继续进行步骤，并了解制品试用期减至24小时，按“START”键继续。
5.2.6结束：
确认废液上清液颜色是否可接受，接受按“是”（YES）继续；不接受按“否”（NO）继续。
5.2.6.1确认机器发出嘟嘟声，确认打印机已联机，按“是”（YES）继续。
5.2.6.2确认打印结果，按“是”（YES）继续。
5.2.6.3去甘油程序结束（DE-GLYCEROLIZATIONCOMPLETE），拆除耗材，关机。
5.2.6.4如果制备的冰冻解冻去甘油红细胞为1单位，用无菌导管连接器连接一200ml转移袋，2500g4℃离心8min（离心机程序14）后，去除净重100g。
5.2.6.5质量标准：
血液制品
容量标准（ml）
重量范围（g）
冰冻解冻去甘油红细胞1单位
200±10％
189～231
冰冻解冻去甘油红细胞2单位
400±10％
399～462
5.2.6.6取下产品袋，用热合机热合管道，留取配血用样本，建立搬运筐搬运血液至包装组。
5.2.7微机管理流程
打开CAABB2程序→产品→成分转化（源成分选择冰冻红细胞，目的成分选择去甘油红细胞）→输入献血编号→保持期选“自当前日期24小时”→转化→确定
内部搬运〔新建→目的机构（包装组）→献血编号→容器选“包装待检冰箱”→开始搬运〕→结束任务→退出程序
5.3修改当前库存冰冻红细胞的状态
5.3.1每次对RhD阴性血液冻存及去甘油后均要对当前库存表进行及时修改。
5.3.2复苏时若患者抗体筛选结果为阴性，则按冻存先后顺序取RhD阴性血液进行去甘油操作；若患者存在Rh系统特异性抗体时，则选择Rh分型相同或相合的RhD阴性血液进行去甘油操作。
5.3.3冻存RhD阴性血液发出后，后序血液向前移动相应位置，当前电子表格位置删除，右侧单元格左移。
5.3.4新增冻存RhD阴性血液添加到ABO同型位置最后单元格内。
5.3.5每次修改保存后均重新打印，参见JL-SXYJ-0123当前库存表格。
6应急预案
6.1异常情况发生后需立即确认的两种情况
6.1.1发生任何异常情况，在血液未被吸入ACP215离心杯内时，只需重新根据上述异常情况数据修改操作即可，可连通管道，用止血钳夹住导管，并将所有夹片处于闭合状态。
6.1.2异常情况发生于洗涤操作步骤中，血液已被吸入ACP215离心杯内时，需要手工将ACP215离心杯内的血液转入冰冻红细胞保存袋内，再重新根据上述异常情况数据修改操作即可。
6.1.3洗涤过程发生异常情况终止程序时，关机后重新安装管路，只需将9%高渗盐溶液换成生理盐水，其它程序不变。
6.2手工操作
6.2.1甘油化
6.2.1.1从供血科取预冻存血液，核对后，经CAABB系统接收、处理、转换后，复制献血条码。
6.2.1.2将血液配平后，2500g18℃离心12min（离心机程序12），用无菌接管机与废液袋连接，去除保养液，不去白膜层。
6.2.1.3用无菌接管机连接甘油和输血器，加入57.1%甘油（每单位红细胞加160ml）,在4—10分钟内完成（注意：
边加边轻摇）。
6.2.1.4核对条码、血型无误后，热合，置室温平衡30分，于4℃1250g离心5min（离心机程序13），去除上清后充分混匀。
6.2.1.5将甘油化的红细胞移入空袋内，核对献血条码，称重并记录后，放入纸盒固定，-65℃以下冻存。
6.2.2去甘油化（1单位）
6.2.2.1根据临床申请选择适合的冻存血液。
6.2.2.2在40℃水浴中快速解冻（约3分钟）。
6.2.2.3加9%NaCl80ml（60—80滴）边加边轻摇。
平衡3分钟后，加HES100ml，开始稍慢后成流（约2分加完）离心1250g8分钟，弃上清。
6.2.2.4加HES150ml（成细流）边加边摇，使细胞充分悬浮均匀，加0.9%NaCl100ml（80—100滴）2500g10分钟，弃上清。
6.2.2.5成细流加50mlHES后，再加0.9%NaCl150ml,边加边摇,2500g离心10分钟，弃上清。
6.2.2.6成流加0.9%NaCl150ml，2500g离心10分钟，弃上清。
加入0.9%无菌盐水100ml，悬浮红细胞，过滤并倒入另一个空袋中，核对条码，贴标签，进行微机转换，搬运至包装室待检冰箱。
7注意事项
7.1要求操作全程戴乳胶手套。
7.2甘油化及去甘油化耗材建立电子档案，实施动态管理，参见《血型参比实验室耗材接收使用记录》（JL-SXYJ-0508）。
冰冻保存空袋（四川南格尔生物医学股份有限公司）有效期为4年，甘油化使用期限为1年，冰冻保存期限为3年。
（例如：
批号091229，失效期2013年11月的空袋，甘油化在2010年11月前使用，去甘油化在2013年11月前完成。
）
7.3去甘油操作时，提前10分钟开机，血液水浴融化时至手摸有点温度为好。
7.4去甘油两次回吸过程中，不要调整泵速，第一次回吸时，将血袋下拉至低于震荡器位置；第二次回吸时将血袋挂在机器液体架上。
8依据《全国临床检验操作规程》（第3版）中华人民共和国卫生部医政司及ACP215型细胞洗涤系统操作规程。
9相关记录
冰冻细胞当前库存状态分布表（JL-SXYJ-0123）
血型参比实验室耗材接收使用记录（JL-SXXJ-0508-1）
附件1：
RhD阴性血液甘油化及去甘油化流程图
图1：
甘油化流程图
离心
（1）
离心
（2）
离心力：
2500g
离心力：
2500g
时间：
12min
时间：
5min
温度：
18℃
温度：
4℃
图2：
去甘油化流程图
1单位冻融洗涤后离心
1单位冻融上清
成品净重：
离心力：
2500g
去除净重：
100g
1单位：
189~231g
时间：
8min
2单位：
399~462g
温度：
4℃
附件2：
ACP215甘油化程序参数说明
英文原文
参数
单位
默认设置
UnitWeight
红细胞重量
克
185
RBCUnitHematocrit
红细胞压积
%
75
RBCUnitOsmolarity
红细胞摩尔渗透压
Osm/kgH2O
320
GlycerolConcentration
甘油百分比浓度
%
57
GlycerolConc.Target
甘油目标浓度
%
40
GlycerolOsmolarity
甘油毫摩尔渗透压
Osm/kgH2O
7230
TargetOsmolarityRate
目标毫摩尔渗透压比率
Osm/kgH2O/分钟
500
MaxGlycerolFlowRate
最大甘油混入率
毫升/分钟
70
ConstantFlow
持续混入
-
No
GlycerolFlowRate
甘油混入率
毫升/分钟
60
附件3：
ACP215去甘油程序参数说明
ACP215去甘油程序参数,按“MODIFYPROGRAM”键核对并修改
英文原文
中文解释
数值
2u红细胞
1u红细胞
ThawdeUnitWeight
解冻红细胞重量（g）
修改（称重去尾数后-10）
ThawdeUnitHct
解冻红细胞压积（%）
50
70
MinFlowRate
最小流速（ml/min）
50
50
BowlVolume
离心杯容量（ml）
275
275
CentrifugeSpeed
离心机转速（rpm）
8000
8000
ThawdeUnitOsmolarity
解冻红细胞渗透压
4700
5100
HyperSolnVolume
浓盐水量（ml）
160
80
HyperSolnFlowRate
浓盐水流速（ml/min）
150
80
HyperEqualizeDelay
浓盐水混匀时间（s）
150
150
DilutionToWashDelay
稀释至洗涤混匀时间（s）
60
60
OsmolarityRate
渗透压
300
500
NumSalineDilutions
生理盐水稀释次数
2
2
NaclDilutionVol（#1）
生理盐水稀释量（#1,ml）
340
340
NaclDilutionVol（#2）
生理盐水稀释量（#2,ml）
400
400
ConstantDilutionRate
是否以恒定速率稀释
NO
NO
NaclRinseVol（#1）
生理盐水冲洗量（ml）
60
50
MaxBowlFillRate
最大进杯流速（ml/min）
150
150
MinBowlFillRate
最小进杯流速（ml/min）
50
50
NumWashCycles
洗涤次数
3
5
WashSolnVol（#1）
洗涤用生理盐水量（#1,ml）
100
60
WashSolnVol（#2）
洗涤用生理盐水量（#2,ml）
300
70
WashSolnVol（#3）
洗涤用生理盐水量（#3,ml）
800
100
WashSolnVol（#4）
洗涤用生理盐水量（#4,ml）
150
WashSolnVol（#5）
洗涤用生理盐水量（#5,ml）
300
WashFlowRate（#1）
洗涤流速（#1,ml/min）
50
50
WashFlowRate（#2）
洗涤流速（#2,ml/min）
75
50
WashFlowRate（#3）
洗涤流速（#3,ml/min）
100
75
WashFlowRate（#4）
洗涤流速（#4,ml/min）
75
WashFlowRate（#5）
洗涤流速（#5,ml/min）
100
EquilibrationTime
混匀时间（s）
45
45
Re-CentrifugationTime
再离心时间（s）
60
60
NumResuspension
重新悬浮次数
0
1
PreservativeSolnVol
保存液量（ml）
240
PreservativeSolnRate
保存液流速（ml/min）
120
BowlEmptyRate
离心杯排空流速（ml/min）
200
200
附件4：
ACP215全自动血液处理仪制备冰冻红细胞操作方法
开机后，设备进行系统自检：
安装完耗材后，按“YES”键继续
无异常，按“YES”键继续
如果所有的*都变为P，表示自检通过
将离心机盖旋钮旋至关闭位置连接复方甘油溶液，按“YES”键继续
将离心机盖旋钮旋至开启位置
重复一次后，进入选择程序屏幕
将红细胞袋通过无菌导管连接器与保
存耗材连接后置于摇床上，按“YES”键继续
选择甘油化
（按“MODIFYPROGRAM”键使箭头指
向“甘油化”，再按“YES”键确认）
字母选定后按“SAVEPROGRAM”确定通过按“YES”或“NO”键输入甘油浓度
（如57％，输入57），按“MODIFY”继续修改
确认后，按“YES”继续通过按“YES”或“NO”键输入目标甘油浓
度（如40％，输入40），按“MODIFY”继续修改
按”MODIFY”键,通过按“YES”或“NO”键输入通过按“YES”或“NO”键输入目标甘油浓度
血液的净重（克），按“MODIFY”继续修改（如40％，输入40），按“MODIFY”继续修改
通过按“YES”或“NO”键输入红细胞比积通过按“YES”或“NO”键输入甘油渗透压
（如75％，输入75），按“MODI继续修改（默认值：
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