组织培养实验器材.docx

1、组织培养实验器材植 物 组 织 培 养 设 备：1、 高压消毒锅：用于培养基、蒸馆水和接种器械的灭菌消毒。2、 超净工作台：用于培养物的无菌操作。3、 接种工具：包括双筒实体显微镜、镶子、剪刀、解剖刀、酒精灯或接 种灭菌器（电热消毒器）等。4、 培养设备：包括空调机、定时器、温度控制器、增湿机或去湿机、培 养架、摇床、恒温培养箱、人工培养箱等。5、 化学实验及分析设备：包括分析天平，天平、酸度计、蒸馆水器、烘箱 或玻璃仪器烘干器、电炉、药品柜、冰箱、晾干架等。6、 封口膜，培养瓶，试管，培养皿，专用记号笔，托盘，手术接种剪， 直镶，枪型接种镶，手术刀柄，超净工作台，接种灭菌器，不锈钢接种盘，

2、组织培养架，光照培养箱，人工气候箱，生化培养箱，恒温恒湿箱，照度计, PH计，酸度计，电导率仪，干湿温度计，玻璃棒温度计，电子天平，精密电 子秤，磁力搅拌器，生物显微镜，高压灭菌锅，纯水器，组培推车，三角烧 瓶，烧杯，量筒，试管架，试管刷，容量瓶，酒精灯，干燥器，吸球及移液管（ 20ML）,容量瓶，试剂瓶（含棕色试剂瓶）。组培试剂类：.植物生长调节剂类 Plant growth regulator :6-节氨基喋吟（6-BA） 6-Benzylaminopurine ;6-糠氨基喋吟（KT;激动素）6-Furfurylaminopurine（Kinetin） ;腺喋吟（腺素）Adenine;氯

3、毗苯月尿（KT-30 ; CPPU）Forchlorfenuron ;反玉米素 Trans-zeatin ;塞苯隆(TDZ)Thidiazuron ;生物素Biotin ;也-荼乙酸(NAA)I-Naphthylacetic acid ;3- 口引噪乙酸(IAA) 3-Indole acetic acid ;3- 口引噪丁酸(IBA) 3-Indole butyric acid ;2,4-二氯苯氧乙酸(2 , 4-D)2,4-Dichlorophenoxyacetic acid 赤霉素 GA3 Gibberellic acid ;奈乙酰胺(NAD 2- (1-Naphthyl ) acetam

4、ide ;6 -奈氧乙酸 6 -Naphthoxyacetic acid ;对氯苯氧乙酸(防落素)4-Chlorphenoxyacetic acid ;对漠苯氧乙酸 4-Bromophenoxyacetic acid ;对碘苯氧乙酸 4-Iodophenoxyacetic acid ;24-表油菜素内脂 24-Epibrassinolide ;芸苔素内酯Brassinolide ;赤霉素 GA4+7 (GA4:GA7=1:2)Gibberellin A4+7 ;青鲜素 Maleic hydrazide ;丁酰腓(比久)Daminozide ;口引噪-3-丙酸 Indole-3-propanoi

5、c acid口引噪-3-丙烯酸 3-Indole-propenoic acid口引噪-3-甲醇 3-Indole-methanol ;口引噪-3-甲醛 Indole-3-carboxylic acid口引噪-3-甲酸 Indole-3-carboxylic acid三十烷醇 Triacontanol ;多效哇（PP333）Paclobutrazol ;2, 4-D钠盐；缩节胺 Mepiquat chloride ;矮壮素 Chlormequat;乙烯利Ethephon。.有机物类 Organic matter :烟酸 Nicotinic acid ;肌醇 myo-Inositol ;盐酸硫胺（

6、VB1） Thiamine HCL,VB1;盐酸毗哆辛（VB Pyridoxin HCL,VB6 ;甘氨酸Glycine ;叶酸 Folic acid ;核黄素（VB2）Riboflavin,VB2 ;抗坏血酸（VC）Ascorbic acid,VC ;正丁酸 n-Butyric acid ;柠檬酸 Citric acid monohydrate ;蔗糖 Sucrose;DL-精氨酸 DL-Arginine ;腺喋吟硫酸盐 Adenine sulfate ;葡萄糖 Glucose（Dextrose）;蛋白月东Peptone;水解酪蛋白 Casein acid hydrolysate ;水解孚L

7、蛋白 Lactoalbumin hydrolysate 。.无机物类：硫酸铁 Ferric sulfate ;乙二胺四乙酸二钠盐 Ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt ;乙二胺 四乙酸铁钠盐 Ethylenediamine tetraacetic acid monosodium ferric salt ； 硼酸 Boric acid ;氯化钻 Cobalt Chloride ;碘化钾 Potassium lodide ;钳酸钠 Sodium molybdate ;无水氯化钙 Calcium choloride anhydrous ;二水氯

8、化钙 Calcium choloride ;干燥氯化钙 Calcium choloride (for drying );硝酸钙 Calcium nitrate ;D-泛酸钙 Calcium D-pantothenate ;磷酸三钙 Tri-Calcium phosphate ;硫酸铜 Cupric sulfate ;硝酸胺 Ammonium Nitrate ;硝酸钾 Potassium Nitrate ;结晶硫酸镁 Magnesium sulfate ;硫酸亚铁 Ferrous Sulfate磷酸二氢车甲 Potassium dihydrogen phosphate ;硫酸锭 Manganes

9、e Sulfate ;硫酸锌 Zinc sulfate ;磷酸二氢钠 Sodium phosphate monobasic ;三氧化字目 Molybdenum Trioxide ;氯化车甲 Potassium chloride ;氢氧化钾 Potassium hydroxide ;硫酸铉 Ammonium sulfate ;二氧化钛 Titanlum dioxide 。.日用耗材 Consumptive material of daily expenses :琼脂粉Agar;冷凝脂 Fungible Agar ;活性炭粉 Carbon Activated ;超细活性炭粉 Wispy Carbo

10、n Activated 。消毒试剂类：甲醛（福尔马林溶液）Formalin ;高锭酸钾 Potassium permanganate ;新基尔灭（苯扎漠铉溶液）Benzalkonium Bromide Solution安替福民（次氯酸钠溶液）；过氧化氢30%（双氧水）Hydrogen Peroxide氯化汞。一、实验室设计1.准备室:(1)进行药品的保存、配置、消毒、分装等。(2)器具的洗涤、干燥、消毒。(3)生理生化指标的测定等。2.接种室：进行材料的接种，内置超净工作台或接种箱。外设缓冲间 -放置拖鞋、工作服、工作帽等。3.培养室：植物材料的无菌培养，室内主要有培养架和控制温度及光照的设备

11、。4.细胞学观察实验室：进行培养材料的组织学、细胞学、观察照相等。二、玻璃器皿的选择和清洗1.玻璃器皿的选择*试管-适合于用少量培养基及试验各种不同配方时选用。*三角锥瓶-适用于各种培养(如固体培养、液体培养、大规模培养或一般*L形管和T形管-为专用的旋转式液体培养试管。*培养皿-适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。*角形培养瓶和圆形培养瓶-适用于液体培养用，如单细胞和原生质体的浅层培养。*果酱瓶-常用作试管苗大量繁殖用的培养瓶。药品试剂：MS培养基的配制步骤这样每次使用时，取其总量的 1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需

12、的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素(母液I ) mg / L33 00038 000CaCl2 - 2H2O 8 800MgSO 7H2O 7 400KHPO 3 400微量元素（母液U ）KI 166H3BO 1 240MnSO 4H2O 4 460ZnSO - 7H2O 1 720N&MoO 2H2O 50CuSO 5H2O 5CoCl2 - 6H2O 5铁盐（母液m）FeSO - 7H2O 5 560N&- EDTA 2H2O 7 460有机成分(母液IV ) IV A20 000IV B100盐酸毗哆醇(维生素B6)100盐酸硫胺素(维生素B1)100甘氨酸400以上各种营养成

13、分的用量，除了母液I为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成 1 L的贮备液。其中，母液I、母液皿及母液IV的配制方法是 ：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸僻水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到 1L。母液川的配制方法是 ：将称好的FeSO4 7H2O和Na2-EDTA 2H2。分别放到450 mL蒸僻水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将 pH调至55,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存， 并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培养基中还需要加入：2,4-二氯

14、苯氧乙酸(2 , 4-D)、(NAA)、6-节基喋吟(6-BA) 等植物生长调节物质，并且分别配成母液 (01 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg,将2, 4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将 6-BA用少量 (1 mL)的物质的量浓度为 mol/L的NaOH容液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后 分别定容至100 mL,即得质量浓度为 01 mg/mL的母液。配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量 ：母液I为50mL,母液皿、川、IV A和IV B各5 mL。再取 2, 4D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一 起放入烧杯中。MS培养

15、基配制培养液时的注意事项配制培养液时应注意 ：1在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶 子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进 行配制；2用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管 润洗2次；3量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取 1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂 9 g、蔗糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入 750 mL用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸僻水定容至 1 000

16、 mL ,搅拌均匀。需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中， 操作者千万不能离开，否则沸腾的外溢，就需要重新称量、制备。此外， 如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水 ，否则加热时烧杯 容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调pH用滴管吸取物质的量浓度为 1 mol/L的NaOH容液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的 pH试纸测培养基的 pH, 一直到培养基的pH为为止(培养基的pH必须严格控制在。培养基的分装 溶化的培养基应该趁 热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中， 然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶 (50 mL或100 mL)中。注意不要让培养

17、基沾到瓶口和瓶壁上 。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装 2530瓶。培养基分装完毕后， 应及时封盖瓶口。用 2块硫酸纸(每块大小约为9 cm 9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封 盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。B5培养基配方成分使用浓度(mg/L)大里兀系硝酸钾 KNO32500MgSO4 7H2O250CaCl2 2H2O150(NH4)2SO4134彳商里儿条KIH3BO4MnSO4 4H2O10ZnSO4 7H2ONa2MoO 4 2H2OCoCl2 6H2O铁盐CuSO4 5H2ONa2-EDTAFeSO4 7H2O有机成分肌

18、醇100烟酸盐酸毗哆醇盐酸硫铉10M卵养基配方：成分分子量使用浓度(mg/L)硝酸钾 KNO3 1900硝酸铉 NH4NO3 1650大量元素磷酸二氢钾 KH2PO4 170硫酸镁 370氯化钙 440碘化钾 KI硼酸 H3BO3硫酸镒微量元素硫酸锌 H2O钥酸钠 H2O硫酸铜 H2O氯化钻铁盐乙二胺四乙酸二钠硫酸亚铁肌醇100甘氨酸2有机成分盐酸硫胺素 VB1盐酸毗哆醇 VB6烟酸 VB5或VPP蔗糖 sucrose 30g/LB5培养基的组成和配方组成成分 数量(mg/l )KNO3 2500大量元素 CaCl2 2H2O 150MgSO 4 7H2O 250(NH4)2SO4 134KI

19、H3BO4MnSO44H2O 10微量元素ZnSO4 7H2ONa2MoO 42H2OCoCl2 6H2OCuSO4 5H2O铁盐 Na2-EDTAFeSO4 7H2O肌醇 100烟酸有机成分盐酸毗哆醇盐酸硫铉 10N6培养基配方组成成分 数量(mg/l )硝酸钾(KN03) 2830硫酸铉(NH4SO4) 463大量元素氯化钙(CaCl2 - 2HzO) 166硫酸镁(MgSO4 7H20) 185磷酸二氢钾(KH2PO4) 400硫酸亚铁(FeS04 - 7H20)硫酸镒(MnS04 4H20)微量元素硫酸锌(ZnSO4 7H20)硼酸(H2BO3)碘化钾(KI)甘氨酸 2有机成分烟酸盐酸硫胺素(维B1)盐酸毗哆素(维B6)