组织培养实验器材.docx
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组织培养实验器材
植物组织培养设备：
1、高压消毒锅：
用于培养基、蒸馆水和接种器械的灭菌消毒。
2、超净工作台：
用于培养物的无菌操作。
3、接种工具：
包括双筒实体显微镜、镶子、剪刀、解剖刀、酒精灯或接种灭菌器（电热消毒器）等。
4、培养设备：
包括空调机、定时器、温度控制器、增湿机或去湿机、培养架、摇床、恒温培养箱、人工培养箱等。
5、化学实验及分析设备：
包括分析天平，天平、酸度计、蒸馆水器、烘箱或玻璃仪器烘干器、电炉、药品柜、冰箱、晾干架等。
6、封口膜，培养瓶，试管，培养皿，专用记号笔，托盘，手术接种剪，直镶，枪型接种镶，手术刀柄，超净工作台，接种灭菌器，不锈钢接种盘，组织培养架，光照培养箱，人工气候箱，生化培养箱，恒温恒湿箱，照度计,PH计，酸度计，电导率仪，干湿温度计，玻璃棒温度计，电子天平，精密电子秤，磁力搅拌器，生物显微镜，高压灭菌锅，纯水器，组培推车，三角烧瓶，烧杯，量筒，试管架，试管刷，容量瓶，酒精灯，干燥器，吸球及移液
管（20ML）,容量瓶，试剂瓶（含棕色试剂瓶）。
组培试剂类：
.植物生长调节剂类Plantgrowthregulator:
6-节氨基喋吟（6-BA）6-Benzylaminopurine;
6-糠氨基喋吟（KT;激动素）6-Furfurylaminopurine（Kinetin）;
腺喋吟（腺素）Adenine;
氯毗苯月尿（KT-30;CPPU）Forchlorfenuron;
反玉米素Trans-zeatin;
塞苯隆（TDZ）Thidiazuron;
生物素Biotin;
也-荼乙酸（NAA）I-Naphthylaceticacid;
3-口引噪乙酸（IAA）3-Indoleaceticacid;
3-口引噪丁酸（IBA）3-Indolebutyricacid;
2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）2,4-Dichlorophenoxyaceticacid赤霉素GA3Gibberellicacid;
奈乙酰胺（NAD2-（1-Naphthyl）acetamide;
6-奈氧乙酸6-Naphthoxyaceticacid;
对氯苯氧乙酸（防落素）4-Chlorphenoxyaceticacid;
对漠苯氧乙酸4-Bromophenoxyaceticacid;
对碘苯氧乙酸4-Iodophenoxyaceticacid;
24-表油菜素内脂24-Epibrassinolide;
芸苔素内酯Brassinolide;
赤霉素GA4+7（GA4:
GA7=1:
2）GibberellinA4+7;
青鲜素Maleichydrazide;
丁酰腓（比久）Daminozide;
口引噪-3-丙酸Indole-3-propanoicacid
口引噪-3-丙烯酸3-Indole-propenoicacid
口引噪-3-甲醇3-Indole-methanol;
口引噪-3-甲醛Indole-3-carboxylicacid
口引噪-3-甲酸Indole-3-carboxylicacid
三十烷醇Triacontanol;
多效哇（PP333）Paclobutrazol;
2,4-D钠盐；
缩节胺Mepiquatchloride;
矮壮素Chlormequat;
乙烯利Ethephon。
.有机物类Organicmatter:
烟酸Nicotinicacid;
肌醇myo-Inositol;
盐酸硫胺（VB1）ThiamineHCL,VB1;
盐酸毗哆辛（VB©PyridoxinHCL,VB6;
甘氨酸Glycine;
叶酸Folicacid;
核黄素（VB2）Riboflavin,VB2;
抗坏血酸（VC）Ascorbicacid,VC;
正丁酸n-Butyricacid;
柠檬酸Citricacidmonohydrate;
蔗糖Sucrose;
DL-精氨酸DL-Arginine;
腺喋吟硫酸盐Adeninesulfate;
葡萄糖Glucose（Dextrose）;
蛋白月东Peptone;
水解酪蛋白Caseinacidhydrolysate;
水解孚L蛋白Lactoalbuminhydrolysate。
.无机物类：
硫酸铁Ferricsulfate;
乙二胺四乙酸二钠盐Ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalt;
乙二胺四乙酸铁钠盐Ethylenediaminetetraaceticacidmonosodiumferricsalt；硼酸Boricacid;
氯化钻CobaltChloride;
碘化钾Potassiumlodide;
钳酸钠Sodiummolybdate;
无水氯化钙Calciumcholorideanhydrous;
二水氯化钙Calciumcholoride;
干燥氯化钙Calciumcholoride（fordrying）;
硝酸钙Calciumnitrate;
D-泛酸钙CalciumD-pantothenate;
磷酸三钙Tri-Calciumphosphate;
硫酸铜Cupricsulfate;
硝酸胺AmmoniumNitrate;
硝酸钾PotassiumNitrate;
结晶硫酸镁Magnesiumsulfate;
硫酸亚铁FerrousSulfate
磷酸二氢车甲Potassiumdihydrogenphosphate;
硫酸锭ManganeseSulfate;
硫酸锌Zincsulfate;
磷酸二氢钠Sodiumphosphatemonobasic;
三氧化字目MolybdenumTrioxide;
氯化车甲Potassiumchloride;
氢氧化钾Potassiumhydroxide;
硫酸铉Ammoniumsulfate;
二氧化钛Titanlumdioxide。
.日用耗材Consumptivematerialofdailyexpenses:
琼脂粉Agar;
冷凝脂FungibleAgar;
活性炭粉CarbonActivated;
超细活性炭粉WispyCarbonActivated。
消毒试剂类：
甲醛（福尔马林溶液）Formalin;
高锭酸钾Potassiumpermanganate;
新基尔灭（苯扎漠铉溶液）BenzalkoniumBromideSolution
安替福民（次氯酸钠溶液）；
过氧化氢30%（双氧水）HydrogenPeroxide氯化汞。
一、实验室设计
1.准备室:
（1）进行药品的保存、配置、消毒、分装等。
（2）器具的洗涤、干燥、消毒。
（3）生理生化指标的测定等。
2.接种室：
进行材料的接种，内置超净工作台或接种箱。
外设缓冲间-放
置拖鞋、工作服、工作帽等。
3.培养室：
植物材料的无菌培养，室内主要有培养架和控制温度及光照的
设备。
4.细胞学观察实验室：
进行培养材料的组织学、细胞学、观察照相等。
二、玻璃器皿的选择和清洗
1.玻璃器皿的选择
*试管-适合于用少量培养基及试验各种不同配方时选用。
*三角锥瓶-适用于各种培养（如固体培养、液体培养、大规模培养或一般
*L形管和T形管-为专用的旋转式液体培养试管。
*培养皿-适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。
*角形培养瓶和圆形培养瓶-适用于液体培养用，如单细胞和原生质体的浅
层培养。
*果酱瓶-常用作试管苗大量繁殖用的培养瓶。
药品试剂：
MS培养基的配制步骤
这样每次使用时，取其总量的1/20（50mL）或1/200（5mL），加水稀释，制成
培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素（母液I）mg/L
33000
38000
CaCl2-2H2O8800
MgSO•7H2O7400
KHPO3400
微量元素（母液U）
KI166
H3BO1240
MnSO・4H2O4460
ZnSO-7H2O1720
N&MoO•2H2O50
CuSO•5H2O5
CoCl2-6H2O5
铁盐（母液m）
FeSO-7H2O5560
N&-EDTA2H2O7460
有机成分（母液IV）IVA
20000
IVB
100
盐酸毗哆醇
（维生素B6）
100
盐酸硫胺素
（维生素B1）
100
甘氨酸
400
以上各种营养成分的用量，
除了母液I为
20倍浓缩液外，其余的均为
200倍
浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。
其中，
母液I、母液皿及母液IV的配制方法是：
每种母液中的几种成分称量完毕后，
分别用少量的蒸僻水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1L。
母液川的配制方法是：
将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2。
分别放到450mL蒸僻水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至
55,最后定容到1L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入：
2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、（NAA）、6-节基喋吟（6-BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（01mg/mL）。
其配制方法是：
分别称取这
3种物质各10mg,将2,4-D和NAA用少量（1mL）无水乙醇预溶，将6-BA用少量（1mL）的物质的量浓度为mol/L的NaOH容液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100mL,即得质量浓度为01mg/mL的母液。
配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：
母液I为50
mL,母液皿、川、IVA和IVB各5mL。
再取2,4D5mL、NAA1mL,与各种母液一起放入烧杯中。
MS培养基配制培养液时的注意事项
配制培养液时应注意：
1在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；
2用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；
3量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉
1种，以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9g、蔗糖30g,放入1000mL
的搪瓷量杯中，再加入750mL用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈
半透明状。
然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸僻水定容至1000mL,搅拌均匀。
需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否
则沸腾的外溢，就需要重新称量、制备。
此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代
替。
但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，
造成烫伤。
调pH用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOH容液，逐滴滴入溶化
的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸〜测培养基的pH,一直到培养
基的pH为为止（培养基的pH必须严格控制在。
培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。
分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶（50mL
或100mL）中。
注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。
锥形瓶中培养基的量约为锥
形瓶容量的1/5〜1/4。
每1000mL培养基，可分装25〜30瓶。
培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。
用2块硫酸纸（每块大小约为9cm<9cm）中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。
最后在锥形瓶外壁贴上标签。
B5培养基配方
成分
使用浓度（mg/L）
大里兀系
硝酸钾KNO3
2500
MgSO47H2O
250
CaCl2•2H2O
150
（NH4）2SO4
134
彳商里儿条
KI
H3BO4
MnSO44H2O
10
ZnSO47H2O
Na2MoO42H2O
CoCl2•6H2O
铁盐
CuSO45H2O
Na2-EDTA
FeSO47H2O
有机成分
肌醇
100
烟酸
盐酸毗哆醇
盐酸硫铉
10
M卵养基配方：
成分分子量使用浓度（mg/L）
硝酸钾KNO31900
硝酸铉NH4NO31650
大量元素磷酸二氢钾KH2PO4170
硫酸镁370
氯化钙440
碘化钾KI
硼酸H3BO3
硫酸镒
微量元素硫酸锌H2O
钥酸钠H2O
硫酸铜H2O
氯化钻
铁盐乙二胺四乙酸二钠
硫酸亚铁
肌醇100
甘氨酸2
有机成分盐酸硫胺素VB1
盐酸毗哆醇VB6
烟酸VB5或VPP
蔗糖sucrose30g/L
B5培养基的组成和配方
组成成分数量（mg/l）
KNO32500
大量元素CaCl2・2H2O150
MgSO47H2O250
（NH4）2SO4134
KI
H3BO4
MnSO44H2O10
微量元素ZnSO47H2O
Na2MoO42H2O
CoCl2•6H2O
CuSO45H2O
铁盐Na2-EDTA
FeSO47H2O
肌醇100
烟酸
有机成分盐酸毗哆醇
盐酸硫铉10
N6培养基配方
组成成分数量（mg/l）
硝酸钾（KN03）2830
硫酸铉（NH4SO4）463
大量元素氯化钙（CaCl2-2HzO）166
硫酸镁（MgSO47H20）185
磷酸二氢钾（KH2PO4）400
硫酸亚铁（FeS04-7H20）
硫酸镒（MnS04・4H20）
微量元素硫酸锌（ZnSO4・7H20）
硼酸（H2BO3）
碘化钾（KI）
甘氨酸2
有机成分烟酸
盐酸硫胺素（维B1）
盐酸毗哆素（维B6）
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