补体实验报告Word文档下载推荐.docx

1、二、试验方法补体结合试验的改良方法较多，较常用的有全量法（3ml）、半量法（1.5ml）、小量法（0.6ml）和微量法（塑板法）等。目前以后两种方法应用较为广泛，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。以下叙述以小量法为例，即抗原、抗体、溶血素、羊红细胞各加0.1ml，补体加0.2ml，总量为0.6ml。（一）试剂1抗原试验中用于检测抗体的抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强。如使用粗制抗原时，须经同样处理的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成分的非特异性反应。2抗原和抗本的滴定补体结合试验中，抗原与抗体按一定比例结合，因而应通过试验选择适宜的浓度比例。多采用

2、方阵法进行滴定，选择抗原与抗体两者都呈强阳性反应（100不溶血）的最高稀释度作为抗原和抗体的效价（单价）。滴定方法举例如表14-4。在试管中加入不同稀释度的抗原，配加不同稀释度的抗血清，另作不加抗原的抗体对照管和不加抗血清的抗原对照管。按照试验方法加补体和指示系统，温育后观察结果。在表14-4中可见1:64抗原和1:32抗体各作为1个单位。在正式试验中，抗原一般采用24个单位（1:641:32），抗体采用4个单位（1:8）。表14-4抗原和抗体的方阵滴定抗原 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 抗体对照抗血清稀释倍数 1:4 4 4 4 4 4 4

3、 3 0 01:8 4 4 4 4 4 2 1 0 016 4 4 4 4 4 1 0 0 032 4 4 4 4 0 0 0 064 4 4 3 3 2 0 0 0 0128 4 3 2 1 0 0 0 0256 3 2 2 0 0 0 0 0512 2 1 0 0 0 0 0 0抗原对照 0 0 0 0 0 0 0 0注：1、2、3、4分别表示溶血反应强度、；0为不溶血。3补体滴定按表14-5逐步加入各试剂，温育后观察最少量补体能产生完全溶血者，确定为1个实用单位，正式试验中使用2个实用单位。如形14-5中的结果为1:60的补体0.12ml可产生完全溶血，按比例公式0.122:600.2:

4、x计算，x50；即实际应用中的2个补体实用单位应为1:50稀释的补体0.2ml。表14-5补体的滴定管号60补体（ml） 缓冲液（ml）稀释抗原（ml）致敏srbc （ml）1 2 3 4 5 60.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.140.26 0.24 0.22 0.20 0.18 0.160.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1浴30min 37水 置 放0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2不溶血 不溶血 微溶血 微溶血 全溶血 全溶血 结果 （二）血清标本采集血液标本后及时分离血清，及时检验或将血清保存于20。血清在试验前应先加热5630min（或603

5、min）以破坏补体和除去一些非特异因素。血清标本遇有抗补本现象时可做下列处理之一：加热提高12；20冻融后离心去沉淀；以3mmol/l盐酸处理；加入少量补体后再加热灭活；以白陶土处理；通入co2；以小白鼠肝粉处理；用含10新鲜鸡蛋清的生理盐水稀释补体。（三）正式试验以小量法测定抗体的补体结合试验为例。按表14-6逐步加入各种试剂，温育后先观察各类对照管，应与预期的结果吻合。阴性、阳性对照管中应分别为明确的溶血与不溶血；抗体或抗原对照管、待检血清对照管、阳性和阴性对照的对照管都应完全溶血。绵羊红细胞对照管不应出现自发性溶血。补体对照管应呈现2u为全溶，1u为全溶略带有少许红细胞，0.5u应不溶。

6、如0.5u补体对照出现全溶表明补体用量过多；如2u对照管不出现溶血，说明补体用量不够，对结果都有影响，应重复进行试验。补体结合试验结果，受检血清不溶血为阳性，溶血为阴性。表14-6测定抗体的补体结合试验操作程序反应物（ml） 待检血清管测定稀释血清 抗原 缓冲液 2u补体 1u补体 0.5u补体 致敏红 细胞混匀，置3730min后观察结果0.1 0.1 0.2 0.2对照 0.1 0.1 0.2 0.2阳性对照管 测定 0.1 0.1 0.2 0.2阴性对照管 测定 0.1 0.1 0.2 0.2抗原对补体对照管 照管 0.1 0.1 0.2 0.22u 0.1 0.1 0.2 0.21u

7、0.1 0.1 0.2 0.20.5u 0.1 0.1 0.2 0.2 0.4 0.2红细胞对照管混匀，置371h或41618h三、应用和评价补体结合试验是一种传统的免疫学技术，能够沿用至今说明它本身有一定的优点：灵敏度高。补体活化过程有放大作用，比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定0.05g/ml的抗体，可与间接凝集法的灵敏度相当。特异性强。各种反应成分事先都经过滴定，选择了最佳比例，出现交叉反应的机率较小，尤其用小量法或微量法时。应用面广，可用于检测多种类型的抗原或抗体。易于普及，试验结果显而易见；试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用光电比色计即可。补体结合试验可应用在以下几方面：传

8、染病诊断。病原性抗原及相应抗体的检测。其他抗原的检测。例如肿瘤相关抗原、血迹中的蛋白质鉴定、hla分型等。自身抗体检测。但是补体结合试验参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁并且要求十分严格，稍有疏忽便会得出不正确的结果，所以在多种测定中已被其他更易被接受的方法所取代。但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很好的试验。篇二：医学免疫学CDC实验报告CDC实验一.实验原理细胞表面抗原与相应的抗体（IgG13或IgM）特异性结合形成的免疫复合物，可通过经典途径激活补体形成攻膜复合体而导致细胞膜穿孔。因此，水溶性染料如台盼蓝可进入受损细胞，染成蓝色，为阳性反应；不带抗原的细胞，未损伤，不染色，为阴

9、性反应。 二. 实验步骤 1.胸腺细胞悬液制备 颈椎脱臼法处死小鼠暴露胸腔，分离出胸腺镊子夹住胸腺反复轻轻研磨单个细胞PBS洗次，1000rpm，10min加入5%小牛血清PBS制备细胞悬液 调节细胞浓度至3-4107/ml三.结果判断细胞膜穿孔的细胞呈蓝色，细胞膜完整的活细胞不着色。 细胞毒性作用的判断标准如下： 阴性反应 （ ） 死细胞占0-10% 可疑阳性反应 （ ） 死细胞占11-20% 弱阳性反应 （ + ） 死细胞占21-50% 阳性反应 （ + ） 死细胞占51-80% 强阳性反应 （+ ） 死细胞占81-100%四.结果记录 1.表格记录 2.照片展示 五.讨论 .第组成阳性的

10、原因：实验中加入抗原、抗体、补体、LC。抗原抗体能形成抗原抗体免疫复合物，通过经典途径激活补体，形成攻膜复合物，从而导致细胞膜穿孔，细胞受损，台盼蓝进入细胞，染成蓝色，呈阳性反应。说明CDC实验必须要有抗原、抗体、补体共同参与。.第组成阴性的原因：实验中加入抗体、LC。因为无抗原和补体，不能形成抗原抗体免疫复合物，也无补体，因此不能形成攻膜复合物，不能使细胞膜穿孔，细胞无损伤，台盼蓝无法进入细胞，不能被染成蓝色，呈阴性反应。说明CDC实验必须要有补体的参与。.第组呈阴性的原因：试验中加入LC和补体，因为无抗原抗体，所以没有抗原抗体免疫复合物的形成，补体不能被激活，不能形成攻膜复合物，细胞无受损

11、，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反应。说明CDC实验必须要有抗原、抗体的参与。.第组呈阴性的原因：实验中只加入LC，既无抗原抗体免疫复合物的形成，也无补体，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反应。说明CDC实验必须要有抗原、抗体、补体的共同参与。篇三：实验三 补体溶血实验实验三 补体溶血实验 一、实验目的：了解溶血反应的原理，掌握溶血反应的基本操作方法 二、实验原理：将绵羊红细胞做抗原注射家兔体内，经一定潜伏期，家兔血清中即出现特异 性抗体，此种抗体称溶血素，它可以与绵羊红细胞结合，此时若加入补体，即可激活补体的经典途径，则呈现溶血现象。 三、实验材料 1、溶血素（1：1000）、补体（1：30）、绵羊红细胞（1%）、生理盐水 2、试管、吸管、试管架等 四、实验方法 1、 按下表将试管4支排成一排， 2、震荡混匀，37水浴30分钟。 五、实验结果 实验管因发生溶血而变红色透明，其余管为红细胞悬液。 六、注意事项 1、取样品的吸管不可混用；加样力求准确；2、SRBC吹匀后再加； 3、补体稳定性差：T、pH、连续吹打等都使活性下降，所以置于冰浴中，用时再取；加入补体后轻轻吹打。