性病诊断彩色图文报告系统Word文档格式.docx

1、其培养所需要的时间为24-72小时，对于急性的感染，容易错失治疗的最好时机。单克隆荧光抗体染色法检测的是病原体的抗体，结果与金标准法结果对比完全一样，而检测所需的时间只45分钟，比培养法更方便、快速。性病类 淋病（荧光法、涂片法或培养法） 梅毒（FTA-ABS法或暗视野检查法） 非淋菌性尿道炎（支原体、衣原体抗原荧光检测） 尖锐湿疣（组织病理学检测、醋酸白试验） 软下疳（涂片法、培养法） 细菌性阴道炎（加特纳菌抗原荧光检测） 白色念珠菌（湿片镜检、念珠菌抗原荧光检测、培养法） 滴虫（湿片镜检）（以上方法为卫生部推荐检查方法）其他类 染色体及性别鉴别 TB（结核）系列 OKT系统（主要用于T细胞

2、亚群） 肺炎支原体 红斑狼疮（一）荧光显微基本技术1、 荧光显微镜基本知识（1）全色光谱的波长不同，折射率不同，波长越长折射率越小，紫光波长最短，折射率最大。（2）激发滤光片只有蓝紫光透过，照射标本上反射标本上反射出绿色或红色荧光及激发光，经过压制滤光片只有绿光透过。（3）分色镜（干涉分光滤镜）对光可选择性的反射和透射2、 落射式荧光显微镜的工作原理（1）滤色系统 是荧光显微镜的重要部分，常用滤光片为蓝色光激发光片（400mm）、紫蓝光激发滤光片（300490mm）、紫外蓝光激发滤光片（300450nm）以及选择性很强的金属膜干涉滤片。（2）压制滤光片：主要阻挡激发光通过，要根据荧光显微镜及荧

3、光素的荧光波长选择压制滤光片。（二）、免疫荧光标记及抗原片制备1、直接荧光染色技术原理荧光标记抗原或抗体，直接与相对应抗体和抗原结合，则抗原和抗体结合部位发出亮绿的荧光，为特异性结合。试剂和材料（1） 荧光标记抗体（或抗原）（2） 0.01mol/LpH7.2PBS（3） 湿盒（4） 泡洗缸（5） 荧光显微镜方法（1） 抗原底片从冰箱取出时，应立即电风扇吹干，无水乙醇固定，或丙酮固定，或不固定，要根据不同抗原性质。（2） 将荧光标记抗体（抗原），滴于抗原（抗体）膜上，放湿盒内，室温或37温箱30min。（3） 用0.01mol/LpH7.2PBS冲洗150min，中间换水两次。（4） pH7.

4、2缓冲甘油封片，荧光显微镜观察。特点（1） 免疫荧光直接法，特异性强。（2） 只能检测一种抗原或抗体。（3） 适用于细菌抗原和病毒抗原检查。2、间接荧光染色技术间接荧光染色分双层法和夹层法，双层法主要是定位于抗原和鉴定未知抗体。夹层法主要是示踪细胞内的免疫球蛋白，它的关系如下：双层法：抗原+抗体1抗原，抗体复合物+荧光标记抗体2。（1） 抗原底物：可以是各种动物组织冰浇灌切片，也可是涂片，也可是培养细胞（玻片培养）等抗原片，从冰箱取出后，必须立即风干。（2） 固定：无水乙醇或丙酮，固定5-10min。（3） 将被检血清用0.01mol/LpH7.2PBS稀释1：5，滴加在抗原膜上，放湿盒中，室

5、温或37温箱30min。（4） 冲洗：用0.01mol/LpH7.2PBS冲去抗原膜上的血清，放在PBS冲洗缸内，浸泡冲洗15min，中间换两次PBS。（5） 荧光标记抗体染色：将冲洗后的标本片取出，晾潮干，开始滴加荧光标记抗人IgG工作液，放湿盒30min同上。（6） 冲洗：同上。（7） 晾干后缓冲甘油封片：荧光显微镜观察。（1） 双抗体的作用：1抗体病人血清，它可以显示抗原万分和鉴定未知抗体，同时对第二步的荧光抗体又起抗原作用。荧光标记抗体可以示踪抗原和抗体结合位置，显示了方法的敏感性，因为一个抗原单位可以结合很多抗体单位，如果每个抗原单位可结合5个抗体单位，而每个抗体单位又可结合5个荧光

6、抗体单位的话，则细胞内的抗原是以25倍的荧光物质显示出来。（2） 既可定位和鉴定抗原，还可测未知抗体，这就扩大了免疫荧光技术的应用范围。（三）几种荧光实验及方法简介1、 抗核抗体（ANA）病人血清中存在抗细胞核抗体，可以特异与核抗原成分结合，形成抗原抗体复合物（主要是IgG），再与荧光标记的抗人IgG结合，在荧光显微镜下可观察到特异亮绿色荧光为阳性。用大白鼠肝冰冻切片或人工培养细胞做抗原底物，间接荧光抗体法（双层法）。常见ANA荧光染色模型种类镜下荧光染色模型 核材 抗体成分 抗体名称核膜型（周边） 鼠肝、细胞 dsDNA 抗dsDNA抗体均质型 鼠肝、细胞 DNP抗体 抗DNP抗体 斑点型

7、鼠肝、细胞 ENA 抗ENA抗体散点型 细胞 DNA蛋白结合体 抗着丝点抗体核仁型 鼠肝、细胞 4-6S RNA 抗核小体抗体PCNA型 细胞 DNA聚合酶 抗PCNA体纺锤体型 细胞 纺锤体 抗纺锤本抗体核膜型（Lamin型） 细胞 60-80KD多肽 抗Lamin抗体斑点型（La型，Sm型） 细胞 抗La,抗Sm抗体斑点型（SPII型） 细胞 不明 抗SPII抗体斑点型（NSP1） 细胞 抗NSP1抗体中心粒型 细胞 抗中心粒抗体 抗核抗体阳性时，可进一步做血清对倍稀释，测其抗体滴度。注意事项（1） 抗原片需保存在2-8，-40可保存1年。（2） 抗原片从冰箱中取出时需立即风干。临床意义（

8、1） 正常健康人1：5稀释为阴性，但高龄老人有时会出现低滴度阳性。（2） 活动期SLE病人ANA阳性，阳性率达100%，非活动期SLE病人阳性率可达80%以上。（3） 其它胶原性疾病：硬皮病、皮肌炎、混合性结缔组织病、干燥综合症、类风湿关节炎、慢性活动性肝炎等可出现ANA阳性。2、 抗双链DNA抗体（抗ds DNA抗体）间接荧光法TE-IF法马疫锥虫（简称TE），虫体结构中核和动基体纯双链DNA，用马疫锥虫作抗原底物，测抗双链DNA抗体，阳性时可见到核和动基体发出亮绿荧光。阴性则无物特异荧光。（1） 疫锥虫接种小白鼠的腹部皮下，4天后，从尾部取一点血在镜下观察，高倍镜每视野30-40条虫子，即

9、可放血制片。（2） 将感染的小白鼠尾部剪断，取血涂成直径0.50.5cm大小圆点，晾干，放冰箱待用。（3） 使用时从冰箱取出必须立即风干，放蒸馏水中30s-1min溶解血红蛋白，晾干。（4） 以下步骤同（ANA）抗dsDNA抗体是SLE的重要抗体。ANA荧光染色模型为均质膜型，马疫锥虫活动基体、核、呈亮绿荧光。活动期SLE，特别是肾性活动期，部分狼疮肾患者抗dsDNA抗体大多为阳性，而非活动期SLE病人，dsDNA抗体阳性率低，其它胶原病则阳性率委低。3、 阴道加德纳菌（Gardnerella vagionalis）的检测用途（1） 疾病诊断：检出病变部位（如女性阴道、男性尿道）阴道加德纳菌，

10、以确诊细菌性阴道病和尿道炎。（2） 用于阴道加德纳菌的鉴定。使用程序（1） 于每支阴道加德纳菌荧光抗体试剂中加入0.5ml无菌生理盐水溶解；（2） 将无菌棉拭子伸入阴道或尿道口3cm处旋转，采集阴道或尿道分泌物和上皮细胞涂片，火焰固定；（3） 用记号笔在涂有标本的玻片背面划一小区，于小区内标本上加荧光抗体试剂10ul，将玻片放入湿盒内密盖，37孵育30分钟，用缓冲液浸泡5-10分钟，蒸馏水冲洗甩干。滴加缓冲甘油，加盖玻片封片，再滴加缓冲甘油作为镜油，于荧光显微镜下检查。结果报告标本镜下查见成堆发亮绿色荧光的小杆菌，可报告“阴道加德纳菌荧光染色阳性”。4、 支原体荧光单克隆抗体的检测本试剂盒用于

11、快速诊断支原体所致生殖泌尿系统感染，亦可用于健康检查和婚前检查。生殖泌尿系统感染支原体后，经1-3周潜伏期。开始出现临床症状。男性表现为：非淋菌性尿道炎、附睾炎、前列腺炎、直肠炎；女性表现为阴道炎、宫颈炎、盆腔炎、输卵管炎、直肠炎等。此时采集尿道或宫颈标本，经支原体特异性荧光单克隆抗体染色，在荧光显微镜下可查见支原体。取材与涂片用无菌棉拭子插入尿道或宫颈2-3厘米，稍转动，停留片刻后取出，将采集到的分泌物和上皮细胞涂在干净的特制功玻片圆孔内。涂片在空气中充干燥。在圆孔内加入适量丙酮固定10分钟待完全挥发后即可进行染色。如涂片在10日内染色，贮于4冰箱内干燥保存即可。使用方法（1） 按试剂盒要求

12、和所提供的试剂，配制缓冲液；（2） 在荧光抗体冻干粉试剂中加入0.5毫升生理盐水，使之完全溶解，试剂一旦溶解，不宜再作冻融；（3） 标本玻片圆孔内加入10微升荧光抗体溶液，玻片放入湿盒内密盖，37孵育30分钟，缓冲液浸泡5-10分钟，蒸馏水冲流甩干。滴加缓冲甘油，加盖玻片封干，于荧光显微镜下检查，玻片甩干后，或直接于高倍镜下检查。结果判断标本镜下查见亮绿色，具有典型大小，边界清晰的梨状圆形颗粒，可报告为“支原体荧光抗体染色阳性”。5、 衣原体荧光单克隆抗体的检测本试剂盒用于快速诊断衣体所致结膜炎（沙眼），生殖泌尿系统感染及部分鹦鹉热衣原体感染等。工作原理本试剂盒使用的抗衣原体单克隆抗体是异硫酸

13、盐荧光素标记的EVI-HI，单克隆抗体（FITC-EVI-HI-McAb），属性特异，通过直接免疫荧光法可以检测标本涂片中存在的已知所有15种人类沙眼衣原体血清型抗原（即A-K、Ba、L1、L2、L3）以及鹦鹉热衣原体抗原（BPIC、6BC、Mn等）。有关参数蛋白浓度_mg/ml荧光素（FITO）浓度：_mg/mlF/P克分子比值：_特异生结合部位：衣原体表面脂多糖中KDO（2-酮基-3-去氧辛酮糖酸）部分。试剂盒组成50人份单克隆抗体工作液1ml抗体稀释液2ml封片液5ml采集衣原体标本用纯棉拭子（可以自备）。试剂盒使用方法（1） 按产品介绍将0.5ml抗体稀释液加入冻干的单克隆抗体瓶中，轻

14、轻摇动，使粉末溶解；（2） 在每张标本片的圆孔加10ul上述抗体工作液；（3） 湿盒内孵育30分钟，室温下；（4） 在蒸馏水中轻轻摇动玻片冲洗 10分钟，空气干燥；（5） 在圆孔内加一滴封片液，放盖玻片，荧光显微镜下判读结果；（6） 每张标本涂片至少有10个完整上皮细胞及10个典型原体颗粒才判断为阳性。注意（1）单抗工作液保存期： 液态冻干4三个月一年-20一年以上（3） 稀释液，封片液均可保存于2-8时，可存放六个月。标本采取方法a、 结膜标本（1） 将患眼用1%的可卡因麻醉；（2） 用小拭子在上下眼脸及穹隆部进行采样，如果取双眼标本，应先选感染轻的眼，以免加重感染。b、 男性尿道标本（1）

15、 取样前1小时病人不排尿；（2） 将小拭子插入尿道2-4cm（至少2cm,不超过4cm。轻轻转动后，停留1-2，退出，涂片。c、 女性宫颈标本（1） 用大拭子擦去宫颈外口多余粘液；（2） 用小拭子插入宫颈管内直至大部分拭子头看不到为止，轻轻转动5-10；（3） 退出拭子，不能接触阴道壁。涂片方法（1） 轻轻转动拭子一侧涂在玻片圆孔（8mm）上半部，再轻轻转动拭子另一侧涂在下半部，应涂满全孔而不超过孔界；（2） 透过光线看到圆孔内呈均一不透明状，即表示涂片满意；（3） 将涂片在空气中充分干燥（此步骤很重要）；（4） 放平玻片，在孔中加0.5ml丙酮固定10，使之完全挥发；（5） 如涂片在7日内染

16、色，则贮于4；如超过7日，则应置于-20保存，上述两种情况下，标本盒内均应放干燥剂（如变色硅胶等）；（6） 染色前从冰箱内取出标本盒，应在室温放置30，使标本完全升至室温。再打开标本盒检查硅胶是否变色；如已变色，表明标本保存不好，染色将受影响，阴阳性对照片的处理方法相同。6、 梅毒FTA-ABS的检测检出各期梅毒病人体液中抗梅毒螺旋体的特异IgG和GgM抗体，确定梅毒感染诊断和监测疗效；（2） 供血者和婚前及各种健康体检。原理：（1） FTA试验：以梅毒密螺旋体为抗原，固定于载玻片上，加待检血清，如血清中含有抗螺旋体抗体，即与片上的抗原结合，再加抗人免疫球蛋白荧光抗体，螺旋体被感染成发荧光的螺

17、旋体，为阳性。（2） FTA-ABS试验：为了排除FTA试验的交叉反应，彩无毒密螺旋体培养液吸收血清中群我叉抗体，使用权血清在1：5稀释时不产生叉瓜，可作确诊。 试剂盒提供材料（1） 抗原；（2） 抗人IgGFA（1:10）50ul；（3） 人阳性血清50ul；（4） 吐温-80；（5） 吸引剂；（6） 封片剂；（7） PBST（0.5%Tween-80）,加蒸馏水600ml，加吐温-80：300ulFAT试验程序抗原混匀后以接种环涂制抗原片，晾干后，丙酮10分钟或火焰固定；5630分钟灭活血清标本，PBS190ul加血清标本10ul，1：20稀释后取10ul于抗原片上；抗原片置室内3730分

18、钟，以PST浸泡5分钟，提拉数次，取出吹干；以PBST0.5ml稀释抗人IgG荧光抗体，10ul/孔滴加抗原片；重复步骤3；以封片剂封片。阳性标本可进一步做FTA-ABS试验。FTA-ABS试验程序：吸收剂20ul稀释灭活血清标本5ul（1：5），滴加在抗原片上，然后重复3、4、5、6步骤。报告结果标本于镜下呈亮绿色螺旋体，形态典型，强度在1+ - 4+之间，报告为阳性。7、 单纯疱疹病毒荧光单克隆抗体检测本试剂盒用于快速诊断单纯疮疹病毒所致生殖系统感染。单纯疱疹病毒（HSV）分HSV-2两 个血清型。HSV-1主要引起唇疱疹、咽炎、角膜结膜炎和散发性脑炎；而生殖器的炎症状和疱疹主要由HSV-

19、2所引起，少数由HSV-1所引起。生殖器疱疹的临床表现主要是在生殖器部位出现小丘疹、水疱、糜烂和溃疡性损伤，女性感染可导致流产、胎儿畸形、死亡，HSV-2与宫颈癌的发生关系密切。采集疱液或溃疡基底层分泌物、宫颈和阴道分泌物，经与单纯疱疹病毒型共同型单克隆抗体和荧光标记二抗（染色间接法）后，在荧光显微镜下可查见HSV，特异敏感快速地为临床提供诊断结果。用刮片或无菌棉拭子取疱液（穿破）、溃疡基层分泌物及宫颈阴道分泌物，将标本涂在干净的特制载玻片园孔内，空气中充分干燥后，置标本缸内，用冷丙酮固定10分钟，吹干，蒸馏水洗一次，吹干后可进行染色。（1） 按试剂盒要求和所提供试剂配制缓冲液；（2） 在单疱

20、病毒单体（一抗）和荧光标记二抗冻干粉剂中，各加入0.5ml生理盐水，充分溶解。试剂溶解后，不宜再冻融；（3） 标本园玻孔内，加10微升一抗溶液，玻片放湿盒内，密盖。37度孵育40分钟，用缓冲液振洗2次，每次3-5分钟，再用蒸馏水振洗一次，吹干。（4） 园孔内滴加封片液，盖玻片填充片，荧光显微镜下用高倍镜或油镜观察。标本在镜下见到暗红色的细胞上，胞膜及核周围，胞浆处有黄绿色颗粒状荧光，可报告为单纯疱疹病毒阳性。四、几种常见致病菌的普通镜检与荧光镜检方法（参考全国规范性病检测）1、 淋球菌 普通光镜检：用染色法检测淋球菌。美兰单染可观察到蓝色双球菌，革兰氏染色可观察到G（红色）双球菌2、 梅毒（1

21、） 普通光镜检：暗场观察梅毒螺旋体血清学方法（2） 荧光检测：FTA试验：a） 抗原混匀后以接种环涂制抗原片，晾干，丙酮10分钟或火定；b） 56摄氏度30分钟灭活血清标本，PBS190ul，1比20稀释后取10ul于抗原片；c） 抗原片置湿盒37摄氏度30分钟，以BPST浸泡5分钟，提拉数次取出吹干；d） 以PBST稀释抗人IgG荧光抗体，10ul/孔滴加抗原片；e） 抗原片置湿盒37摄氏度30分钟，以PBST浸泡5分钟，提拉数次取出吹干；f） 以封片剂封干，荧光镜检，如阳性可进一步做FTA-ABS试验FTA-ABS试验：a） 吸收剂20ul稀释灭活血清标本5ul（1比5），滴加在抗原片上；

22、b） 抗原片置湿盒37摄氏度30分钟，以PBST浸泡5分钟，提拉数次取出吹干；c） 以PBST稀释抗人IgG荧光抗体，10ul/孔滴加抗原片；d） 抗原片置湿盒37摄氏度30分钟，以PBST浸泡5分钟，提拉数次取出吹干；e） 以封片剂封干，荧光镜检。报告结果：3、 非淋菌性尿道炎沙眼衣原体，直接涂片僮检，在细胞内寻找支原体包涵体。将标本涂片，以甲醇固定10分钟，抗加衣原体20ul，放入湿盒37摄氏度30分钟，缓冲液冲洗，甩干，滴加缓冲甘油，封片，再滴加一滴缓冲甘油作为镜油，荧光镜检。报告结果标本于镜下查见呈亮绿色、具有典型大小、边界清晰的圆型颗粒，柱状细胞内可见亮绿色涵体，报告为阳性。4、 尖

23、锐湿疣醋酸白试验 组织病理检查5、 软下疳涂片超微检查杜克雷氏嗜血杆菌6、 单纯疱疹（1） 涂片细胞学检查直接免疫荧光法（3） 7、 性病性淋巴肉芽肿检查方法同非淋菌性尿道炎，同属沙眼衣原体感染。8、 阴道滴虫病念珠菌感染普通光镜检：悬滴法 革兰氏染色9、 细菌性阴道病线索细胞检测 胺试验荧光检测所需部分自备试剂及器材：固定剂：甲醛、丙酮、乙醇洗脱剂：PBS PBST蒸馏水，吸管，酒精灯，棉签，载玻片，盖玻片荧光显微镜，染色湿盒，恒温箱（或37 恒温水浴箱） 附：衣原体异性诊断试剂盒使用说明书（单克隆抗体免疫荧光法）一、 用途：1. 疾病诊断：检出病变部位（如男性尿道、女性子宫颈）衣原体，用于

24、确诊衣原体感染。2. 各种健康检查和婚前、孕前检查二、 原理： 生殖 泌尿道感染衣原体后，经1-3周潜伏期开始出现临床症状，男性表现为非淋球菌性尿道炎、附睾炎、直肠炎、前列腺炎、女性表现为阴道炎、宫颈炎、输卵管炎、直肠炎等此时采集宫颈或尿道标本，经抗衣原体特异性荧光抗体染色，在荧光显微镜下可查见衣原体颗粒及细胞内包涵体。三、 试验所需试剂和器材：1. 试剂盒提供基本材料：（1） 抗衣原体荧光标记单克隆抗体（用时加无菌生理盐水0.5ml）（2） 吐温 80 （3） 缓冲液浓缩母液（用时每2ml加1000ml水、Nacl 8.5克及吐温-80 0.5ml即为冲洗用缓冲液）2. 试剂盒不提供之必须材

25、料：（1）甲醇 （2）蒸馏水 （3）吸管） （4）消毒棉签（5）载玻片 （6）37孵箱 （7）荧光显微镜 （8）染色湿盒四、 标本采集 衣原体是在细胞内寄生的微生物，检测衣原体必须采集被感染的上皮细胞。先用消毒棉签将尿道口或宫颈口分泌物擦干净（女性患者需用扩阴器），再换一支棉签并将其深入到尿道口或宫颈内2-5cm处，旋转360度，停留片刻后取出，立即将采集的标本涂在干净的载玻片上。五、 衣原体检定程序： 将涂有标本的玻片放入标本缸中，以甲醇固定10分钟，取出后于空气中充分发挥，用记号笔于玻片背面划一小区，加抗衣原体荧光抗体20l,放入湿盒中，密盖，置37度湿箱孵育30分钟，用上述缓冲液冲洗、甩

26、干，滴加缓冲甘油，加盖玻片封片，再加一滴缓冲甘油作为镜油，于荧光显微镜下检查。六、 报告结果标本镜下查见亮绿色、具有典型大小、边界清晰的原形颗粒，柱状细胞内可见亮绿色包涵体，可报告为“衣原体荧光抗体染色阳性”。性病类荧光试剂价格表（参考）梅毒螺旋体25人份500元淋球菌加特纳杆菌衣原体支原体白色念珠菌阴道毛滴虫一、 仪器硬件基本构成1. 三目荧光显微镜 2。图像采集卡 3. 彩色摄像机 4.PII计算机 5. 彩色打印机性病诊断彩色图文报告用户手册一、 功能介绍启动性病诊断彩色图文报告系统，出现口令设置对话框，点“确定”按钮，即进入该分析系统桌面环境，如下所示：1、 菜单区性病诊断彩色图文报告系统采用了下拉菜单：视频控制、系统维护、帮助、网络服务。如下图：A、 视频控制菜单 视频控制菜单的下拉菜单命令及功能命令 功能连接视频（F5） 与视频设备进行连接。活动视频（F4） 激活活动视频。