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1、转氨作用实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除转氨作用实验报告篇一：实验六纸层析法观察转氨基作用实验报告实验六纸层析法观察转氨基作用【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用09救援一班第三大组李岚宇20XX222336室温：28（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理。2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的-酮酸与-酮基的互换反应称为转氨基作用。转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的氨基转移到另一酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝

2、脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：酮戊二酸+丙氨酸谷氨酸+丙酮酸本实验以丙氨酸和-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值

3、Rf表示：?ALT物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液。2、0.2mol/Lna2hpo4溶液81ml与0.2mol/Lnah2po4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。3(:转氨作用实验报告)、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0nnaoh仔细调至ph7.4后,加磷酸盐缓冲液至100ml。4、0.1mol/L酮戊二酸称取酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/Lp

4、h7.4磷酸盐缓冲液中，以1.0nnaoh仔细调至ph7.4后，加磷酸盐缓冲液至100ml。5、0.1mol/L谷氨酸溶液称取谷氨酸0.735克,先溶于少量0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液中，以1.0nnaoh仔细调至ph7.4后,加磷酸盐缓冲液至50ml。6、0.5%茚三酮溶液称取茚三酮0.5克于100ml丙酮中溶解。7、层析溶剂：将重蒸过的酚2份和水1份按比例混合后，放入分液漏斗中，震荡，静置24小时后分层，将下部酚层转移到瓶中备用。仪器：玻璃匀浆器、10ml试管、培养皿、表面皿、沸水浴锅、37恒温水浴箱、9cm圆滤纸、烘箱、手术剪刀、分液漏斗。（四）实验步骤:1、肝匀浆制备：取新

5、鲜动物肝0.5克,剪碎后放入匀浆器,加入冷0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液1.0ml,迅速研成匀浆，用上述缓冲液4.5ml混匀备用。2、酶促反应过程（1）取离心管两支，编号：1（测定管）、2（对照管），各加肝匀浆0.5ml。把对照管放沸水浴中加热10分钟，取出冷却。（2）各加0.1mol/L丙氨酸0.5ml,0.1mol/L-酮戊二酸0.5ml,0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液1.5ml,摇匀。（3）37保温，30分钟后取出，保温完毕。（4）把测定管放沸水浴中煮10分钟，取出后冷却，过滤。3、层析（1）取圆形滤纸一张（直径9cm）放洁白纸上，以圆点为中心，约1cm为半径,用铅笔

6、划一圆线作为基线,在线上四等份处标清四点编号作为点样原点。（2）点样：用四根毛细玻璃管分别进行点样。把丙氨酸液、谷氨酸液分别点在原点2、4处。把测定液、对照液分别点在原点1、3处。注意斑点不宜过大（应在直径0.5cm以下）。在第一次点样点干后，再在原处同样点第2次。（3）层析：先在滤纸圆心处打一小孔（铅笔芯粗细），再取滤纸一条卷成捻如灯芯状,上端插入滤纸中心孔中，下端剪成须状。（4）把滤纸平放在上述培养皿上，使纸芯下浸入层析液中，盖上培养皿盖。可见层析液沿纸芯上升到滤纸中心，渐向四周扩散。当层析液前缘到离滤纸边缘约1cm时，约25分钟，取出滤纸，用镊子小心取下纸芯，放入烘箱中烘干。（5）显色：

7、将上述滤纸平放在培养皿上，滴0.5茚三酮的丙酮溶液，使滤纸全部湿润，再放入烘箱干燥，此时可见紫色斑出现，比较色斑的位置，及色泽深浅，计算Rf值，分析是否发生了转氨基反应。（五）实验结果记录：图（1）（六）实验讨论：1、从表格（1）中可以看出，测定管上清液点样出现了两个色斑，根据Rf值的计算也可以看出，测定管中氨基酸发生了转氨基作用，生成的未知物质b为谷氨酸，则未知溶质a为丙氨酸；对照管中因为酶的失活而没有发生转氨基反应，只有丙氨酸，所以色斑只有一个。2、层析点样时手要洗净，操作中尽可能少量接触滤纸，以免污染。3、层析液中含有腐蚀性酚，取用时注意安全，防止溅到皮肤及眼睛。4、点样点不宜过大，直径

8、小于0.5cm.20XX年9月19日篇二：浙大生化实验报告氨基转换反应实验报告课程名称：生化实验甲指导老师：成绩：_实验名称：氨基移换反应及其产物的鉴定实验类型：同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；2、学习纸层析的原理和操作技术。二、实验基本原理1.氨基移换反应：在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的-氨基和-酮酸的-酮基之间发生的互换反应。转氨酶的种类很多，

9、任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化。转氨酶的最适ph接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（gpT）和谷草转氨酶（goT）的活性最强。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（glutamicpyruvictransaminase,gpT）、谷草转氨酶（glutamicoxalacetictransaminase,goT）活性较高。gpT催化下的转氨基反应为：L谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富，活性高，催化L谷氨酸氧化脱nh2，加碘乙酸能抑制其活性，从而可以保护氨基移换反应的产物L谷氨酸。本实验用纸层析法，检查由丙氨酸和酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨

10、酶（gpT)的作用下所生成的谷氨酸，证明组织内的氨基移换作用。2.纸层析原理：滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。层析溶剂是由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。进行分离时，由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动慢，于是得到分离。用滤纸层析法分离氨基酸，是根据氨基酸样品的R基团的化学结构或极性大

11、小的不同，将样品氨基酸溶解在适当的溶剂（0.01mol/Lph7.4磷酸缓冲液）中，点样在滤纸的一端，再选用适当的溶剂系统（酚溶液），通过毛细现象向另一端展层，展层完毕后，用茚三酮作为显色剂，即可得到氨基酸样品的分离图谱。3.茚三酮的显色原理：氨基酸+茚三酮类紫红色复合物三、实验材料与试剂1、实验材料动物肝脏(牛蛙肝或猪肝）2、实验试剂0.01mol/L磷酸缓冲液（ph7.4）（转氨基反应所需缓冲溶液）；0.1mol/L丙氨酸（ph7.4）（转氨基反应的底物，纸层析的标准样品）；0.1mol/L酮戊二酸（ph7.4）（转氨基反应的底物）；0.1mol/L谷氨酸（ph7.4）（纸层析的标准样品）

12、；展层溶剂酚溶液：水饱和酚：冰乙酸（300：1）（纸层析用）；10三氯乙酸（终止酶促反应，使转氨酶及其它蛋白质变性、沉淀）；0.25%碘乙酸（抑制L谷氨酸脱氢酶活性）；显色剂（0.1%茚三酮-乙醇溶液）。四、实验器材与仪器研钵；试管及试管架；恒温水浴箱（37、100）；铅笔、尺和圆规；毛细管（直径0.5mm)；新华定性滤纸（直径11cm）；剪刀和镊子；电吹风；滴管；康氏皿；喷雾器；烘箱（80）。五、实验操作方法和步骤1、转氨酶液的制备取新鲜牛蛙肝或猪肝约3g，剪碎用研钵将肝脏碾碎，加3ml磷酸缓冲液迅速碾磨，加9ml磷酸缓冲液，用两层纱布过滤，收集浆液或滤液即得转氨酶提取液备用。2、氨基移换反

13、应取4支洁净、干燥的试管，按下表操作3、层析准备：取新华定性滤纸（直径11cm）一张，找出圆心，用圆规画一直径2cm的细圆圈（保持干净），并按图1用铅笔作出点样位置。找出圆心，用铅笔尖在圆心处截一小孔（孔径约0.2cm)。另取2cm3cm滤纸，先将下端剪成须状，卷成“灯芯”，备用。点样：用毛细管依次点标准丙氨酸(Ala)、谷氨酸(glu)各点2次，其余14号管样液各点23次。点样时，要待前次点样干燥（可用电吹风吹干）后方可再次点样，点样直径不超过0.3cm。展层、显色将下端剪成须状,卷成的“灯芯”，然后将上端插入层析滤纸圆心处的小孔中,平放在盛有展层溶剂的康氏皿中,使“灯芯”下端须状浸入展层溶

14、剂中,再在滤纸上盖上另一康氏皿（图1）。展层剂沿灯心上升到滤纸,再向四周扩散,待溶剂前沿距康氏皿外槽内缘0.5cm(约需半小时)，取出滤纸，用镊子拔出灯心，滤纸用电吹风吹干，再用喷雾器向滤纸均匀喷洒0.1%茚三酮乙醇溶液，用电吹风热风吹干或放入烘箱（80）中显色3min。（4）预计结果六、结果分析由实验结果可知，1与3所点的样显然受到了谷氨酸的污染，原因可能为：1、点样的时候用的毛细管可能受到了污染；2、滤纸在点样之前可能碰到了桌面上的一些小液滴。七、讨论、心得1、避免污染滤纸，不要用手接触。2、点样时，毛细管与滤纸轻微接触，不要留下痕迹。3、喷茚三酮显色时，需要戴手套，免得手部被染色。4、实验过程中尽量保持台面干净，免得污染滤纸。篇三：实验四转氨基作用实验四转氨基作用（纸层析法）原理氨基酸分子上的氨基转移到-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。经转氨后，原来的-氨基酸变成了相应的-酮酸，原来的-酮酸则成为新的、相应的-氨基酸。本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸丙酮酸转氨酶（简称gpT）的催化进行转氨基的过程。然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的