1、常用显色剂一、通用显色剂(1)硫酸 浓硫酸与甲醇等体积小心混合,冷却;15浓硫酸的正丁醇溶液;5浓硫酸的乙酸酐溶液;5浓硫酸的乙醇溶液;浓硫酸与乙酸等体积混合。用以上任一试液喷薄层板后,于110烘烤15min,不同类的成分显不同颜色。(2)碘 碘的氯仿溶液;碘蒸气 在一密闭的玻璃缸内预先放入少许碘结晶,使缸为碘蒸气饱和。将薄层板放入缸内数分钟即可显色,碘对很多化合物显黄棕色。(3)高锰酸钾-硫酸 高锰酸钾溶于15ml 40硫酸中。检测易还原性物质。(4)铬酸-硫酸 重铬酸钾5g溶于100ml 40硫酸中。易还原性物质显色。(5)荧光显色液 的罗丹明B乙醇溶液;的荧光素乙醇溶液;的桑色素乙醇溶液
2、。用以上任一试液喷薄层板后,在荧光背景下可能显黑色或其他荧光斑点。二、专属性显色剂(一)生物碱及含氮类化合物(1)改良碘化铋钾(Dragendorff)试剂 碱式硝酸铋溶于10ml冰醋酸与40ml水中;碘化钾溶于20ml水中。试液与试液等量混合置棕色瓶内保存作贮备液。用前将1ml贮备液、2ml冰醋酸与10ml水混合。用于生物碱与某些含氮化合物,显橙红色。(2)碘-碘化钾(Wagner) 碘1g与碘化钾10g溶于50ml水(微温),加2ml乙酸,加水至100ml。用于生物碱,显棕褐色。(3)碘铂酸 5ml 15氯化铂溶液加45ml 10碘化钾溶液,用水稀释至100ml。用于生物碱,不同生物碱显不
3、同颜色。(4)碘铂酸钾 10六氯铂酸溶液3ml与97ml水混合,加100ml 6碘化钾溶液,混匀。新鲜配制。用于生物碱与其他有机含氮化合物,不同生物碱显不同颜色。(5)Ehrlich 10对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液与丙酮按1:4混合。对二甲氨基苯甲醛1g,溶于100ml 96乙醇中。用于吲哚类,有时喷后要加热。(6)硫酸高铈铵 1本品的85磷酸溶液。用于吲哚类,长春花生物碱显各种颜色。(7)对二甲氨基苯甲醛-硫酸 65ml浓硫酸与35ml水混合,放冷后加对二甲氨基苯甲醛125mg,再加入5三氯化铁溶液。本试液可保存一周。用于麦角生物碱。(8)肉桂醛-盐酸 肉桂醛5ml、乙醇95ml和5ml 36
4、盐酸混合,新鲜配制。用于吲哚类衍生物。(9)呫吨氢醇 本品溶于90ml乙醇中,加10ml 36的盐酸,用前新鲜配制。用于色氨酸及其他吲哚类生物碱。(10)氯化铁-过氯酸 L三氯化铁溶液1ml与35过氯酸溶液50ml混合。用于吲哚类生物碱。(11)三氯化铁-碘 三氯化铁5g、碘2g溶于50ml丙酮与50ml 20酒石酸的混合液中。用于黄嘌呤生物碱类,不同生物碱显不同颜色。(12)硫酸铈-硫酸(改良Sonnenschein试剂) 硫酸铈混悬于4ml水中,加1g三氯乙酸,加热煮沸,放冷,逐滴加入浓硫酸直至浑浊消失。用于生物碱、含碘有机化合物的显色,喷后110烤几分钟,不同生物碱显不同颜色。(13)硫
5、氰酸钴()试液 硫氰酸铵3g、氯化钴1g溶于20ml水中。用于生物碱,伯、仲、叔胺类。(14)碘化汞钾(Meyer)试剂 氯化汞和5g碘化钾各溶于20ml水中,混合后加水稀释至100ml即可。(15)硅钨酸(Bertrand)试剂 5g硅钨酸溶于100ml水中,加盐酸少量调至pH2左右。(16)苦味酸试剂 1g苦味酸溶于100ml水中。(17)鞣酸试剂 鞣酸1g加乙醇1ml溶解后再加水至10ml。(18)4-甲基伞形酮 本品溶于35ml乙醇,加水至100ml。用于含氮杂环化合物。(19)硫酸铜-联苯胺 硫酸铜溶于100ml水-乙醇(5:4)的混合液中;联苯胺的50乙醇溶液。用时先喷试液,于60
6、干燥后再喷试液。用于吡啶单羧酸的显色。(20)氯化铜 氯化铜溶液。用于肟类。(21)硝普钠-铁氰化物 10氢氧化钠溶液、10硝普钠溶液、10铁氰化钾溶液和水按(1:1:1:3)混合,冰箱内保存(可保存数周),使用前取适量与等体积丙酮混合。用于氯基氰、胍、肌酸、肌酸酐、脲和硫脲及其衍生物的显色。(22)硝普钠-过氧化氢 5硝普钠溶液2ml、10氢氧化钠1ml与5ml 3过氧化氢溶液混合后,加15ml水。冰箱可保存数日。用于胍、尿素、硫脲及其衍生物、肌酸和肌酸酐的检测。(23)三氯化锑试剂 25g三氯化锑溶于75g氯仿中成饱和溶液。用于秋水仙生物碱类。(二)黄酮类黄酮类化合物在紫外灯或日光下多显不
7、同颜色,用氨薰、喷三氯化铝或氢氧化钠溶液等皆会使颜色加深或变色。(1)三氯化铝-乙醇试液 三氯化铝1g,加100ml乙醇溶解,即得。用于含氧杂环化合物。(2)氢氧化钾(钠)试剂 10氢氧化钾或氢氧化钠水溶液。(3)氨气。(4)三氯化锑试液 10三氯化锑的氯仿溶液。喷后110烤5min,用于黄酮类。(5)碱式(或中性)醋酸铅试剂 1碱式醋酸铅(或饱和中性醋酸铅)水溶液。用于黄酮类。(6)硫酸铜-枸椽酸钠 硫酸铜(CuSO4?5H2O)、柠檬酸钠与无水碳酸钠10g溶于水并稀释至100ml。用于含邻二羟基的黄酮类与香豆精类。(7)硼氢化钾试剂 12硼氢化钾异丙醇溶液,必须新鲜配制;浓盐酸。先喷溶液,
8、5min后放入盐酸蒸气缸内。用于双氢黄酮类化合物,显红、橙红色。(8)盐酸镁粉试剂 浓盐酸和镁粉。(9)醋酸镁试剂 2醋酸镁甲醇溶液。(三)糖类(1)茴香醛-硫酸试剂 茴香醛加入50ml乙酸,混匀后加1ml硫酸,用前新鲜配制。改良试液。茴香醛、9ml乙醇、浓硫酸与乙酸混合后立即使用。用于糖类、甾族、萜类。喷后将薄层板置100105烤,不同糖显不同颜色。(2)-萘酚-硫酸 15的-萘酚-乙醇溶液、浓硫酸、乙醇与水4ml的混合液。喷后100烤几分钟,多数糖显蓝色,鼠李糖显橙色。用于糖类的显色。(3)苯胺-二苯胺-磷酸 4g二苯胺、4ml苯胺与20ml 85磷酸共溶于200ml丙酮中。喷后85烤10
9、min,用于还原糖,不同糖显不同颜色。(4)对二甲氨基苯甲醛-乙酰丙酮 氢氧化钾溶液5ml与20ml乙醇混合;b.乙酰丙酮与正丁醇(1:100)的混合液。两种溶液均需新鲜配制,临用前混合。取a.混合液,加入10ml b.溶液。对二甲氨基苯甲醛1g溶于30ml乙醇中,加30ml 36盐酸,需要时用180ml正丁醇稀释。使用时先喷试液,于105加热5min,再喷试液,于90干燥5min。用于氨基糖类。(5)酚-硫酸试剂 酚3g、浓硫酸5ml溶于95ml乙醇中。喷后110加热几分钟,糖显棕色。(6)1,3-二羟基萘酚-磷酸试剂 1,3-二羟基萘酚乙醇溶液100ml与85磷酸100ml混匀。喷后120
10、加热510min,酮糖显红色,醛糖显淡蓝色。(7)邻氨基联苯-磷酸 邻氨基联苯溶于5ml 85磷酸与95ml乙醇,即得。用于糖类。(8)苯胺-磷酸 2mol/L苯胺的水饱和正丁醇溶液与L磷酸正丁醇溶液,按1:2(体积)混合。用于糖类。(9)咔唑-硫酸 咔唑、5ml硫酸溶于95ml乙醇中。用于糖类。(10)3,5-二氨基苯甲酸-磷酸试剂 3,5-二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于25ml 80磷酸中,加水稀释到60ml。喷后100加热15min,2-去氧糖在日光下显棕色,在紫外光下显黄绿色荧光。(11)苯胺-邻苯二甲酸试剂 苯胺、邻苯二甲酸溶于100ml水饱和的正丁醇溶液中。喷后105110加热10m
11、in,糖显红棕色。(12)百里酚-硫酸试剂 百里酚、硫酸5ml溶于95ml乙醇。喷后120加热1520min,多数糖在白色背影上显暗红色,继续加热则变成浅紫色。(13)萘雷锁辛-磷酸 萘雷锁辛乙醇溶液100ml与85磷酸溶液10ml相混合。用于糖类。(14)4-氨基马尿酸 的4-氨基马尿酸乙醇溶液。用于还原糖。(15)酞酸苯胺 苯胺和酞酸溶于100ml水饱和的正丁醇中。用于糖类。(16)硝普钠-偏高碘酸钠 偏高碘酸钠溶液;7硝普钠溶液、水与饱和的哌嗪乙醇溶液按照1:3:20比例混合。使用时先喷试液,室温干燥10min,再喷试液。用于脱氧糖。(17)偏高碘酸钠-联苯胺-硝酸银 偏高碘酸钠溶液;联
12、苯胺溶于80ml乙醇、70ml水、30ml丙酮与 1mlo/L盐酸的混合液中;20ml丙酮加1ml饱和硝酸银溶液,然后逐滴加水直至沉淀的硝酸银刚刚溶解。使用时先喷试液,干燥,再喷试液,放入含25氢氧化铵溶液的容器内5min后,取出轻轻喷试液。用于糖和含1,2二羟基多醇类。(18)联苯胺-三氯乙酸 联苯胺溶于10ml乙酸,加10ml 40三氯乙酸水溶液,用乙醇稀释至100ml。用于糖类。(19)蒽酮 蒽酮溶于10ml乙酸与20ml乙醇中,加入3ml 85磷酸与1ml水。置冰箱内保存。用于酮糖。(20)氨性硝酸银试剂 1g硝酸银,加20ml水溶解,滴加适量的氨水,边加边搅拌,至开始产生的沉淀将近全
13、溶为止,过滤。用于糖类。(21)碱性酒石酸铜试剂 结晶硫酸铜,加100ml水;酒石酸钾钠、氢氧化钠10g,加100ml水。用时将试液与试液等量混合。用于糖类。(22)呫吨氢醇冰醋酸(Xanthydrol)试剂 10mg呫吨氢醇溶于100ml冰醋酸(含1的盐酸)中。用于-去氧糖。(四)强心苷(1)3,5-二硝基苯甲酸(Kedde)试剂 2 3,5-二硝基苯甲酸的甲醇液与2mol/L氢氧化钾甲醇溶液或5氢氧化钠乙醇液,用前等量混合。强心苷显紫红色,几分钟后褪色。(2)三氯乙酸 25三氯乙酸的乙醇或氯仿溶液。三氯乙酸溶于10ml氯仿,加30过氧化氢溶液12滴。喷后110加热710min,紫外灯下观察
14、荧光。用于甾族、洋地黄苷与藜芦碱。(3)碱性三硝基苯试剂 间三硝基苯100ml溶于40ml二甲基甲酰胺溶液,加浓盐酸34滴,加水至100ml;5碳酸钠溶液。使用时先喷试液,再喷试液,于90100加热45min。用于强心苷,在浅橙色背景上显橙红色。(4)硫酸-次氯酸盐 10ml 1mol/L硫酸与3ml次氯酸钠溶液(10活性氯)混合。用于洋地黄苷。(5)三氯化锑试剂 25或饱和的三氯化锑氯仿溶液。喷后100加热5min,在紫外灯或日光下观察。(五)蒽醌类蒽醌类化合物本身在日光下显黄色或橙黄色,在紫外光下则显黄、红、橙色荧光。薄层展开后用氨熏或喷氢氧化钾(钠)碱溶液,则颜色变深或变色。(1)氢氧化
15、钾试剂 10氢氧化钾甲醇溶液。(2)氨气。(3)醋酸镁试剂 醋酸镁甲醇溶液,喷后100加热5min。(4)乙酸铝溶液 乙酸铝水溶液,喷后紫外灯下看荧光。(5)硼酸试剂 1硼酸水溶液。(6)碱式醋酸铅试剂 1碱式醋酸铅水溶液。(六)香豆素与酯类香豆素母体本身无荧光,但羟基香豆素在紫外光下常显亮蓝色荧光。层析法检识常用以下显色剂。(1)羟胺-氯化铁 a.盐酸羟胺20g溶于50ml水,用乙醇稀释至200ml,冷凉处保存;b.氢氧化钾50g溶于少许水中,加500ml乙醇。氯化铁(FeCl3?6H2O)10g溶于20ml 36盐酸溶液中,加乙醚200ml摇匀,置密闭容器内保存。使用时将试液a.与b.按1:2混合,滤去沉淀,滤液放冰箱保存。先喷此试液,稍干,再喷试液。用于内酯类、酯类、酰胺与羧酸酐类。香豆素类显红色。(2)三氯化铁试剂 5三氯化铁的水溶液或甲醇溶液。检识含有酚羟基的香豆素。(3)重氮化试剂 对硝基苯胺,溶于浓盐酸5ml中,加水至50ml;亚硝酸钠5g,加水50ml。取、液等量在冰水浴中混合后使用。香豆素
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