消毒剂消毒效果确认方案Word格式文档下载.docx

1、为了确认消毒剂的消毒效力我们通过定量悬液试验和定量载体试验对消毒效果进行确认。2.2洁净区设施外表材质有彩钢板、不锈钢和玻璃三种，故定量载体试验选用彩钢板载片、不锈钢载片和玻璃裁片模拟洁净区设施外表进行验证试验。3法规、标准和参考文献3.1中华人民共和国国家标准 消毒与灭菌效果的评价方法与标准3.2中华人民共和国药典 2015年版 第四部4职责和培训 4.1职责部门职务职责4.2Training 培训上表中提及的职工都会参与验证实施，并且会在验证实施前经过培训。培训记录作为附件附入本方案。5验证准备5.1仪器/设备本次验证需要使用到的仪器/设备及其信息如下：仪器名称编号校准有效期至电热恒温水浴

2、锅生化培养箱锥形瓶试管移液枪移液管量筒生物安全柜脉动真空灭菌柜5.2标准物质、试药和试液名称浓度&级别有效期至氯化钠-蛋白胨缓冲液0.1%卵磷脂+0.1%吐温80+0.1%蛋白胨缓冲液5.3菌种微生物检验方法验证方案适用。菌种传代次数金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉5.4培养基培养基批号灭菌批号胰酪大豆胨液体培养基胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基6验证测试6.1通用项目6.1.1培养基：按QS-QC-GAM-014培养基配制标准操作规程和QS-QC-GAM-013培养基适用性检查标准操作规程要求准备相应的培养基，培养基适用性检查记录作

3、为附件附入本方案。6.1.2消毒液：XXXXX6.1.3稀释剂为：氯化钠-蛋白胨缓冲液。中和剂为：6.1.4菌液准备6.1.4.1菌液的制备：见XXXX菌种传代、保藏、使用和灭活标准操作规程。6.1.4.2菌液计数确认：将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的新鲜培养物用氯化钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成10-6、10-7、10-8三个浓度。枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物用氯化钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成10-5、10-6、10-7三个浓度。取黑曲霉新鲜培养物加入35ml含0.05%ml/ml吐温80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后用带纱布的移液管吸出孢子悬液至无

4、菌试管。再用氯化钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成10-5、10-6、10-7三个浓度。每种菌各个浓度的菌液分别取1ml至平皿中，同法平行制备两个平皿。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的平皿倾注1520ml 45以下的胰酪大豆胨琼脂培养基。白色念珠菌、黑曲霉的平皿倾注1520ml 45以下的沙氏葡萄糖琼脂培养基。6.1.4.3胰酪大豆胨琼脂培养基平皿于3035生化培养箱中培养，培养时间不超过3天，每天至少计数一次。沙氏葡萄糖琼脂培养基平皿于2025生化培养箱中培养，培养时间不超过5天，每天至少计数一次。根据各个浓度菌液的计数情况推算出1ml浓菌悬液的含菌数。记录见附件一菌

5、液含菌数计数记录6.1.5中和剂确认试验6.1.5.1根据菌液计数所得数据，将新鲜的浓菌液用氯化钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成5*1055*106CFU/ml的工作菌液。6.1.5.2将配制好的消毒液用不同的工作菌液进行以下分组试验。组号混合液A混匀作用10min混合液B取混合液B或混合液B的稀释溶液平板计数2皿/组取工作菌液加入以下溶液中取混合液A 加入以下溶液1消毒剂稀释液混合液B、10-12中和剂310-2、1034中和产物消毒液与中和剂比例为1:110-2、10-356稀释液和中和剂各注入无菌平皿中，各制备2皿，作为阴性对照组具体操作：第一组：取消毒剂4.5ml+工作菌液，混匀作用

6、10min后，取混合液A0.5ml+稀释液，混匀作用10min，取混合液B或浓度为10-1的混合液注皿，各平行制备2皿。第二组：取消毒剂4.5ml+工作菌液，混匀作用10min后，取混合液A0.5ml+中和剂，混匀作用10min，取混合液B或浓度为10-1的混合液注皿，各平行制备2皿。第三组：取中和剂4.5ml+工作菌液，混匀作用10min后，取混合液A0.5ml+稀释液，混匀作用10min，用稀释剂进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级注皿，各平行制备2皿。第四组：取消毒剂和中和剂1:1的混合液4.5ml+工作菌液，混匀作用10min，取混合液A+稀释液，混匀作用10min后，

7、用稀释剂进行10倍系列稀释成10-2、10-3。第五组：取稀释液4.5ml+工作菌液，混匀作用10min，取混合液A0.5ml+稀释液，混匀作用10min后，用稀释剂进行10倍系列稀释成10-2、10-3。各组高浓度平皿编号为：1、2，低浓度平皿编号为：3、4。第六组：分别取稀释液和中和剂各注入无菌平皿中，胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基各制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌、铜绿假单胞菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，倒置3035培养3天计数；白色念珠菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂培养基，倒置2025培养5天计数计数，逐日观察。6.1.5.3结果判定试验结果应符合以下全部条件，

8、判断所选中和剂合格：第1组无菌生长，或仅有少数试验菌菌落生长。第2组菌落数比第1组菌落数多，但明显少于第3、4、5组菌落数。第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过15%。计算公式如下：3组间菌落平均数-各组菌落平均数的绝对值之和误差率= 100% 33组间菌落平均数6.1.5.4记录见附件二中和剂确认记录6.2消毒剂消毒效果确认6.2.1定量悬液试验6.2.1.1根据菌液计数所得数据，将新鲜的浓菌液用氯化钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成5*1055*106 CFU/ml的工作菌液。6.2.1.2将配制好的消毒液用不同的工作菌液分别进行以下分组试验试验重复3次。作用时间取混

9、合液B或混合液B的稀释溶液1ml平板计数2皿/组试验组8min10min12min阳性对照用稀释液将工作菌液进行10倍系列稀释10-4、10-5阴性对照试验组：取消毒剂4.5ml+工作菌液，分别混匀作用8min、10min、12min后，取混合液A0.5ml+中和剂，混匀作用10min，取混合液B或浓度为10-1的混合液B1ml注皿，各平行制备2皿。阳性对照：用稀释液将工作菌液进行10倍系列稀释至10-4、10-5。取相应稀释级1ml注皿，各平行制备2皿。阴性对照：6.2.1.3记录见附件三消毒剂消毒效果确认定量悬液试验记录6.2.2定量载体试验6.2.2.1所用载体：不锈钢、彩钢板、玻璃6.

10、2.2.2将灭菌载体平放于灭菌平皿内，每个载体滴注定量菌液（载体回收菌量达5*1055*106cfu/片）涂匀，放37培养箱待干。6.2.2.3将配制好的消毒液用不同的染菌载体分别进行以下分组试验试验重复3次。染菌载体与消毒液作用后的染菌载体消毒剂5ml中和剂5ml震荡50至80次稀释剂5ml取消毒剂5ml+染菌载体，分别混匀作用8min、10min、12min后，取与消毒液作用后的染菌载体+中和剂5ml，震荡50至80次混匀作用10min，取混合液B或浓度为10-1的混合液B1ml注皿，各平行制备2皿。用稀释液代替消毒液同试验组操作。将混合液B用稀释剂进行10倍系列稀释成10-2、10-3。

11、6.2.3记录见附件四消毒剂消毒效果确认定量载体试验记录6.2.4各组高浓度平皿编号为：6.2.5按不同稀释度推算出每个样本存活菌数（cfu/mL），计算出杀灭率。杀灭率计算公式如下：阳性对照组-试验组平均值杀灭率= 100%阳性对照组6.3结果判定：3次试验的杀灭率均99.9%判为消毒合格。7偏差和变更7.1偏差登记NumberDescription描述Result结果Attachments附件Recorded by/Date:登记人/日期：Reviewed by/Date:复核人/日期：7.2变更登记8ANNEXES 附件8.1附件一菌液含菌数计数记录8.2附件二中和剂确认记录8.3附件三消毒剂消毒效果确认定量悬液试验记录8.4附件四消毒剂消毒效果确认定量载体试验记录9修订记载Version版本号Issue Date of Previous Version上版生效时间Document History变更历史DepartmentDrafted by起草人01N/A 不适用Initial 初始版本