一清颗粒成品检验方法的验证方案Word格式文档下载.docx

1、组织相关的验证培训；负责起草验证方案、组织项目的具体验证、督促验证小组成员按照验证方案的要求做好验证记录；起草并完成验证报告，对整个验证项目负责。验证小组成员按照方案实施验证、并做好记录、意外情况及时汇报和记录、协助起草验证方案和报告。6、验证程序：分析方法的验证内容程序内容建立验证方案1、确定标准及方法2、确定试验及检查范围3、确定步骤4、方案审批分析仪器的确认1、安装：确认安装、检查、文件检查及保存2、仪器校正3、适用性预试验4、再确认：制订再确认的周期5、制订使用、清洁、保养规程，建立记录适用性试验1、准确度试验：回收率测定2、精密度试验：重现性，相对标准差常规1.0，HPLC应2.03

2、、专属性4、检测限5、定量限6、线性7、范围8、耐用性验证报告评价及批准验证证书审核、签发7、简介：本品为黄褐色的颗粒；味微甜、苦。本品主要能用于清热泻火解毒、火毒血热所致的身热烦躁，目赤口疮，咽喉、牙龈肿痛，大便秘结，及咽炎，扁桃体炎，牙龈炎等不良症状。8、验证实施步骤：8.1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施8.1.1 仪器：己经过校正并在有效期内8.1.2 人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器8.1.3 对照品：盐酸小檗碱对照品、黄芩苷对照品、大黄对照药材、黄连对照药材、大黄素对照品、黄芩对照药材。8.1.4 材料：均符合检验要求8.1.5 参考资料：8.1.5.1

3、 中国药典2010年版一部8.1.5.2 药品生产验证指南（2010版） 9、鉴别：9.1、 试验A：取本品4g，加甲醇25ml，浸渍2小时并时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10ml，合并三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加三氯甲烷每1ml含0.5mg的溶液。作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录B）试验，吸取上述三种溶液5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60900C）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展

4、开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点。9.2、试验B：取本品4g，加甲醇25ml及盐酸12滴，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾

5、干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。9.3、试验C: 取本品4g，加甲醇25ml，浸渍2小时并时时振摇，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg，加甲醇5ml，加热回流15分钟，滤过，滤液加甲醇使成5ml，作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各12l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水（4：2：0.2）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，晾干，置紫外光灯（365nm

6、）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。9.4、检测结果:检验结果结果判断试验A试验B试验C检测人: 检测日期: 年 月 日9.5、 验证标准：在试验A中, 供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在试验B中，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。在试验C中，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。9.6、检验结果评价:10、含量测定:照高效液相色谱法测定；仪器：LC-20AT高效液相色谱仪。10.1、准确度：10.1.1 色谱条件与系

7、统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）（42:58）为流动相；检测波长为275nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于5000。流速 1ml/min；色谱柱规格：lichrospher C18 柱（5um， 4.6200mm）；粒度： ；进样量：10l。10.1.2 对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品12.5mg，精密称定，置250ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含黄芩苷50g）。10.1.3 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细，取约0.75g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲

8、醇10ml，超声处理（功率250W，频率50KHz）10分钟，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。10.1.4 回收率试验：采用加样回收法试验，取已知含量的同一批样品9份，精密称取各0.5g，按照黄芩苷含量的80%、100%、120%的比例加入黄芩苷对照品溶液4ml、5ml、6ml，按照上述色谱图条件检测，记录色谱图，计算含量。10.1.5 计算注：式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值； AT为对照品峰面积；单位v*sec ； n为供试品的稀释倍数； WT为供试品的称量；单位g。 10.1.8计算结果填入下表： 含量测定黄芩苷加样回收率试验表序号样品称量（g）样品

9、中黄芩苷的含量（mg）对照品加入量（mg）实测值（mg）回收率（%）回收率的平均值（）RSD（%）123456789检测人： 检测日期：10.1.9结果评价：10.2、精密度：10.2.1 重复性（设操作人员A）：10.2.1.1 色谱条件与系统适用性试验：10.2.1.2 对照品溶液的制备：取10.1.2项对照品溶液作为对照品溶液。10.2.1.3 供试品溶液的制备：取本品粉末约1.0g，共称六份，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇10ml，超声处理（功率250W，频率50KHz）10分钟，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。然后分别平行进样。10.2.1.4 计算：AT为对

10、照品峰面积；n为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；10.2.1.5 将计算的结果填入下表含量测定黄芩苷重复性试验表含量（g/g）含量的平均值（g/g）10.2.1.6 结果评价10.2.2 中间精密度（换一时间，换一操作人员，设操作人员为B）10.2.2.1 色谱条件与系统适用性试验：10.2.2.2 对照品溶液的制备：10.2.2.3 供试品溶液的制备：10.2.2.4 计算：10.2.2.5 将计算的结果填入下表含量测定黄芩苷中间精密度试验表10.2.2.6 结果评价10.3、专属性：10.3.1 色谱条件与系统适用性试验：10.3.2 对照品溶液的制备：10.3.3 供试品溶液的制备

11、：10.3.4 空白溶液的制备：精密称取阴性对照品1.0g，按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品溶液。含量测定专属性试验表保留时间供试品溶液对照品溶液空白溶液10.3.5 验证标准：供试品溶液中应呈现与黄芩苷对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。10.3.6 结果评价：10.4、线性及线性范围：精密称取在60减压干燥4小时的黄芩苷对照品16.73mg置5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，精密吸取2ml置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含黄芩苷0.1338mg的对照品贮备液；精密吸取1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml置10ml的容量瓶

12、中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含黄芩苷13.38ug、26.76ug、40.14ug、53.52ug、66.90ug、80.28ug的系列对照品，分别精密吸取上述系列对照溶液10ul，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，记录色谱图，并与对照的进样量X（ug）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线图。黄芩苷不同浓度的峰面积浓度（mg/ml）峰面积（v*sec）回归方程相关系数斜率： Y轴轴距：10.4.1 结果评价：10.5、系统重复性：10.5.1 配制工作浓度的0.02%和0.05%样品标准溶液，分别进样6次10.5.2 计算：峰面积的平均值与相对标准偏差0.02%的黄

13、芩苷峰面积峰面积峰面积平均值相对标准偏差0.05%的黄芩苷峰面积峰面积的平均值10.6、检测限：用系统重复性实验中的标准偏差和线性回归方程中的斜率差计算： 计算：黄芩苷的检测限为：10.7、定量限：黄芩苷的定量限限为：10.8、范围：10.9、耐用性:10.9.1 以流动相的组成比例、同一规格的色谱柱为变动因素，得出测定结果不受影响的程度，为使方法用于常规检验提供依据。10.9.2 对照品溶液的制备：取10.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。10.9.3 供试品溶液的制备：取10.1.3项下供试品溶液作为供试品溶液。10.9.4 色谱条件1：10.9.5 色谱条件2：流动相组分比例改变，其他条件不变。10.9.5.1 以甲醇-0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）（47:53）为流动相,C18，检测波长为275nm。流速:1ml/min；10.9.5.2 以甲醇-0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）（52:48）为流动相,C18，检测波长为275nm。10.9.6 将数据整理，填入下表。含量测定耐用性试验表分离度理论板数色谱条件1色谱条件210.9.7 结果评价：11、验证的结果评价及建议：12、再验证周期：质量部门根据验证结果确定再验证周期