激光共聚焦显微镜FV中文说明书完整版文档格式.docx

1、打开 FV10-ASW应用软件. Administrator * 系统软件的启动需要等待一定时间.显微镜镜下观察微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜. （参照Memo.）2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.4.点击FV10-ASW软件中的图标.Note1:使用TD滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“”，如果不是，用手柄按下DICT图标5.标本聚焦荧光观察1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.（参照Memo.）4.标本聚焦.扫描模式扫描速获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光染色（FITC）1.点击

2、FV10-ASW软件中的 按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.（也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，参照附录2.）8.点击XY按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage（x）” 2D界面就

3、出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像. （保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.）1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮（保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.）绿色荧光（ Alexa 488 ）红色荧光（ Alexa 546 ）二重染色序列扫描 （这里介绍线序列扫描.）1.点击FV10-ASW软件中的按钮8.选择AutoHV, 并选择扫描速度.9.点击XY按钮取得一幅图像.10点击SeriesDone按钮, “2D View-11.保存该幅图像:（XY平面-单标+微分干涉差

4、）4.选择TD1. （XY平面-单标+微分干涉差） 8. 选择AutoHV, 并选择扫描速度.10.点击SeriesDone按钮, “2D View- （XYZ扫描-双标）1.采用13和14页步骤1到7.确定Z轴的上限和下限如下.2.输入StepSize大小（点击OP按钮可以使用推荐的值）, 并选择 .3.点击XY Repeat按钮开始扫描.4.点击 按钮上移焦点位置.5.当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定.6.点击 按钮下移焦点位置.7.当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定.8.点击Stop按钮停止扫描.（XYZ扫描-双标） 9.选择AutoHV, 并选择扫描速度.10.选

5、择Depth按钮.11.点击XYZ按钮取得图像.12.点击SeriesDone按钮, “2D View-13.保存该幅图像:*可以通过调用扫描状态来实现该设置. 更多的信息, 参照附录5.4.点击按钮 , 出现光谱设置窗口.5.设置CHS1光谱带宽为10 nm, 以此为例.（参照附录4关于改变光谱带宽的方法.）6.点击XY Repeat按钮开始扫描.7.在观察图像的同时, 移动光谱带到图像最亮的位置状态.注: 移动光谱带位置要保持光谱带宽为10 nm不变.8.调节图像.（参照附录1.）9.点击Stop按钮停止扫描.10选择AutoHV, 并选择扫描速度.（也可以使用Kalman accumul

6、ation方式. 更多的信息，参照附录2.）11设定要扫描的波长范围, 光谱带宽和步距.Start = 开始波长End = 结束波长Resolution = 光谱带宽StepSize = 步距12选择Lambda按钮.13点击XYL按钮取得图像.14点击SeriesDone按钮, “2D ViewLiveImage（x）” 2D界面就出现.15.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.（保存为“oib” 和oif类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.） 1. 双击资源管理器中要选择打开的文件.1.点击按钮 并选择2.要保存此图像, 右击此图像, 选择Save

7、 Display并命名.（比例尺的使用） 1.点击按钮2.点击图像的同时, 拖放此比例尺到一个特定的位置.3.点击手柄的左端或右端, 移动鼠标. 改变比例尺的大小4.选择比例尺并右击选择属性的设置.5.设置具体的比例尺属性.改变文本, 颜色, 字体等. （3D图像的重建）以一定的角度观察3D图像2.创建3D图像.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像. 要保存此图像, 进行下一页第6步的操作. 观察3D图像的某个横截面4.点击按钮 并选定 5.拖动鼠标观察某个垂直横断面. 要保存此图像, 进行下一页第6步的操作. （3D图像的重建保存上一页中第3、5选项的图像6.点击按钮 7.会创建一个2D图像 （

8、带文件名）.8.保存该幅图像:（保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图动画的播放4.点击并控制按钮实现图像围绕着 X-轴旋转.再次点击停止旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着 Y-轴旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着 Z-轴旋转.例:绿色荧光（Alexa Fluor 488）和绿色荧光 （YOYO-1）双标打开一幅 Alexa Fluor 488单标取样的XYL图像.2.为 Alexa Fluor 488选定一个封闭的区域.3.从Processing下拉菜单中选择Spectral Deconvolution图标.4.双击ROI1区域.5.点击Save Profile图标.6.输入保

9、存的名字并且点击OK按钮将Alexa Fluor 488的光谱记载到数据库中.7.对于YOYO1单标, 重复1-6步.8.打开一幅 Alexa Fluor 488和 YOYO1 双标的XYL图像.9.从Processing下拉菜单中选择10.双击数据库中记载的 Alexa Fluor 488 和 YOYO1图标.11.检查处理类型设置为 “Normal”并且点击Execute按钮.12获得图像.XY或者XYZ图像的每个通道存为TIFF格式的文件XY或者XYZ通道合并的图像存为带有比例尺的图像存为BMP格式的文件动态图像存为AVI格式的文件1.右击图像管理器中显示的图像图标, 选择另存为保存该幅

10、图像.2.设置Save as类型为 TIFF并保存.* 存为BMP 和 JPEG格式也可以.3.检查要合并的通道并保存.*1.右击该幅图像.2.选择Save Display并以新的文件名保存该幅图像.1.右击该图像.2.选择Save as AVI并以新的文件名保存该图像.保存到 CD-R 1.插入一张CD-R光盘.2.点击OK.3.选择文件并拖放到CD-R的窗口.4.点击Write these files to CD.5.点击Next.6.开始刻录.7.点击Finish按钮结束.关闭系统1.选择File/Exit, 退出FV10-ASW软件.2.退出Windows XP.（1）选择Start/Shut Down. （2）在Shut Down窗口中, 选择Shut Down并点击OK按钮.3. 关闭激光器.（关闭钥匙开关.）3-1. 多线氩离子 （458 nm, 488 nm, 514 nm） OFF3-2.氦氖绿 （543 nm） OFF3-3.氦氖红 （633 nm） OFF4. 关闭汞灯电源.附录1共聚焦的原理和调节原理附录2获取图像如何降低背景噪音