纯化水微生物限度检查法验证Word文档下载推荐.docx

1、8.验证方案批准B、验证报告5.确证内容8.最终批准9. 再验证周期与年度回顾性验证1 概述由于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性、重现性进行验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。2 适用范围纯化水微生物限度检查薄膜过滤法的验证。3 验证目的验证纯化水微生物限度检查薄膜过滤法符合中国药典2005年版二部的规定要求。4 验证小组及职责分工成 员职 责组 长负责验证期间各部门的协调及整个验证过程的具体实施中心化验室负责验证方案的起草及具

2、体实施，确保验证过程能按方案规定的程序进行，对各种验证资料（验证结果）应及时交与GMP组相关人员整理；负责验证方案的编写规范；负责各种验证资料（检查结果）的收集整理。质量保证部负责验证方案的审核及批准；负责出具检验报告；并对微生物限度检查环境进行检测；负责验证文件的管理。5 验证内容5.1 品种：纯化水5.2 验证方法：中国药典2005年版二部微生物限度检查薄膜过滤法5.3 计数方法的验证5.3.1 验证试验用菌种验证试验用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌（Escherichia coli）

3、CMCC（B） 44 102金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） CMCC（B） 26 003枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC（B） 63 501白色念珠菌（Candida albicans）CMCC（F） 98 001黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC（F）98 0035.3.2 菌液制备取经32.5培养1824小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50100cfu的菌悬液。取经25.5培养2448小时的白色念珠菌改良马丁培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液

4、制成每1ml含菌数为50100cfu的菌悬液。取经25.5培养57天的黑曲霉改良马丁斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液35ml，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液至无菌试管内，用9ml0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含50100cfu的孢子悬液。5.3.3 供试液制备取纯化水1ml，加pH值7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，分别人工污染上述5种代表试验菌株。5.3.4 回收率测定（1）试验组 取纯化水1ml，加PH值7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，过滤。过滤完毕后加入50100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。（2）菌液组 测定所加的试验菌数。（3）

5、供试液对照组取规定量供试液，按菌落计数法测定供试品本底菌数。（4）稀释剂对照组用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。5.3.5 试验结果试验组 菌落计数（cfu/ml）实验次数大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉123平均菌落数 菌液组 菌落计数（cfu/ml）供试品对照组 菌落计数（cfu/ml）稀释剂对照组 菌落计数（cfu/ml）试验组的回收率（%）100%稀释剂对照组的回收率（%）试验组的回收率（%） 平均回收率稀释剂对照组的回收率（%） 5.3.6 合格标准 计算供试品组

6、的菌回收率、稀释剂对照组的菌回收率。A、在3次独立的平行试验中,稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。B、若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%,按此该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数。C、若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%,应采重新验证。5.3.7 验证结果分析与评价稀释剂对照组菌回收率均不低于70%；试验组菌的回收率不低于70%，表明纯化水无抑菌成分。可按供试液制备方法和薄膜过滤法测定纯化水的细菌、霉菌和酵母菌数。6 漏项与偏差及

7、采取的纠偏措施在验证过程中，若出现漏项或偏差，立即向验证领导小组报告，征得同意后，将漏项或偏差部分采取的有关措施详细阐明。结论：检查人： 复核人： 年 月 日7 验证结论评价人：年 月 日8 验证方案最终批准方案名称审核及批准意见批准人批准日期 复核人： 检验人： 日期： 年 月 日 复核人： 复核人： 统计人：稀释剂对照组菌回收率分别为 、 、 ，均不低于70%；试验组菌的回收率分别为 、 、 ，均不低于70%，表明纯化水无抑菌成分。8 最终批准 签字： 日期：9 再验证8.1 修订检验方法后；8.2 供试品组分发生改变可能影响检验结果时；8.3 原检验条件发生改变可能影响检验结果时； 8.4 定期的方法验证：每年一次。