抗风湿类中成药批准件编号025抗风湿类中成药中非法添加化学药品补充检验方法Word文档下载推荐.docx

1、补充检验方法与项目的实施规定本补充检验方法适用于抗风湿类中成药中非法添加氢化可的松，地塞米松，醋酸泼尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠吲哚美辛、对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松等13种化学药品的筛查和验证。补充检验方法与项目的批准日期二九年十二月七日主送单位中国药品生物制品检定所、各省（自治区、直辖市）药品监督管理局抄送单位国家药典委员会、各省（自治区、直辖市）药品检验所备注国家食品药品监督管理局抗风湿类中成药中非法添加化学药品补充检验方法本补充检验方法适用于抗风湿类中成药中非法添加氢化可的松，地塞米松、醋酸泼尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛、对

2、乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松等13种化学药品的快速筛查和确证。该方法中，薄层色谱法用于快速筛查;高效液相色谱法用于定性检查;经快速筛查或定性检查结果为阳性的样品，需经液质联用方法验证后出具检验报告。我局已批复的药品补充检验方法和检验项目批准件（批准件编号2006006）也可同时使用。一、薄层色谱法检查（1）阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸钠、萘普生、对乙酰氨基酚、保泰松、吡罗昔康 取供试品一次服用量（片剂除去包衣;胶囊剂取内容物:大蜜丸剪碎，加适量硅藻土），研细，加甲醇10ml，超声处理20分钟，放至室温，滤过；或取液体制剂，水浴蒸干，加甲醇10ml超声外理20分钟，放至

3、室温。滤过作为供试品溶液。分别取阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸钠、萘普生、对乙酰氨基酚、保泰松和吡罗昔康对照品，加甲醇制成每ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，分别取供试品与对照品溶液各10ul点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15:5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应不得显相应的荧光淬灭斑点。（2） 氨基比林、甲氧苄啶、地塞米松、氢化可的松、醋酸波尼松 分别取氨基比林、甲氧苄啶、地塞米松、氢化可的松、醋酸波尼松对照品，加甲醇制成每

4、ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB试验，分别取检查（1）项下供试品溶液和上述对照品溶液各10ul点于同一硅胶 GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨（9:3:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，应不得显相应的荧光淬灭斑点。二、高效液相色谱法检查（1）氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录D）试验色谱条件与系统试用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱;检测波长240

5、nm，同时用DAD监测。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）2080对照品溶液的制备 取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松对照品各约9mg，分别加甲醇50ml，制成每1ml约含0.18mg的储备溶液，临用时，各取5ml混合，制成混合对照品溶液，即得。供试品溶液的制备 取薄层色谱法（1）项下的供试品溶液作为供试品溶液。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。结果判断 供试品色谱中，应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰。（2）阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛色谱条件与系统试用性试验 以十八基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A，以0.0

6、2mol/LNH4Ac-0.05%HAc溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱;检测波长为230nm。同时用DAD监测。8106090403070对照品溶液的制备 取阿司匹林、布洛芬对照品各约15mg、氨基比林、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品各约5mg，分别加甲醇50ml，制成储备溶液，临用时，各取5ml混合，制成混合对照品溶液，即得。供试品溶液的制备 取薄层色谱法（1）项下的供试品溶液即得。测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。（3）对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松色谱条件与系统试用性试验 以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相 A.以0.

7、02mol/L乙酸铵（含0.05%乙酸）为流动相B，按下表进行梯度洗脱:检测波长为210nm。1535856545对照品溶液的制备 取对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含0.2mg的溶液，作为储备溶液，临用时，各取1ml混合，加甲醇至10ml，制成混合对照品溶液，即得。供试品溶液的制备 取薄层色谱法（1）项下的供试溶液作为供试品溶液。三、高效液相-质谱联用法（1）氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松色谱条件与系统适用性试验（UPLC） 以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈，流动相B为水，按下表程序梯度洗脱;检测波长240nm，柱温45。时间（m

8、in）0-99-9.520505020805050809.5-10质谱条件 电喷雾电离源（ESI），毛细管电压3.5kV孔电30V，萃取电压2.0V,透镜电压1.0V;源温120，脱溶剂温度350;脱溶剂气休流速500L/h，孔气体流速50L/h，负离子检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱（MS/MS），质量采集范围100-500。对照品溶液的制备 分别取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松对照品适量（约5mg）至50mL量瓶中，加甲醇25ml，超声处理10分钟，加水至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液适量稀释成每ml含10g的溶液。供试品溶液的制备与测定 若供试品

9、为片剂或丸剂，应细致研磨粉碎，称取一次服用量置50mL容量瓶中,先加入甲醇25mL，超声处理20分钟,放冷至室温,加水稀释至刻度，振摇，放冷至室温后再加水至刻度，混合均匀:若供试品为胶囊，取出内容物细致研磨粉碎，称取一次服用量置50mL容量瓶中,先加入甲醇25mL，超声处理20分钟,放冷至室温,加水定容至刻度,振摇，放冷至室温后再加水至刻度，混合均匀;若供试品为液体，量取一次服用量置50mL容量瓶中，加入甲醇25mL，加水稀释至刻度，振摇，放冷至室温后再加水至刻度，混合均匀。上述供试品溶液经过夜沉淀后取上层溶液适量,取上清液用50%甲醇溶液稀释10-100倍，用0.20m滤膜滤过。测定法 取对

10、照品溶液与供试品溶液各5l，注入液相色谱仪，进行液-质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图。结果判断 供试品色谱中，应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰;若检出保留时间相同的色谱峰，色谱峰的一级质谱及二级质谱均不得与对照品一致。色谱条件与系统适用性试验（UPLC） 以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为0.02mol/LNHAc 溶液，按下表程序梯度洗脱;检测波长200-400nm，柱温45。质谱条件 电喷雾源（ESI）毛细管电压3.0kV孔电20V，萃取电压2.0V透镜电压1.0V，源温120，脱溶剂温度350，脱溶剂气体流速500L/h，孔气体流速50L/h。

11、正、负离子同时检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱（MS/MS），质量采集范围100-500。对照品溶液的制备 分别取阿司匹林对照品约15mg、布洛芬对照品约20mg、氨基比林、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品各约5mg至同一50ml量瓶中，加甲醇25ml，超声处理10分钟加水至刻度，作为对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液适量稀释成每ml含10ug溶液，即得。供试品溶液的制备 取高效液相色谱质谱联用法方法（1）项下的供试品溶液即得。测定法 取对照品溶液与供试溶液5l，注入液相色谱仪，进行液-质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图。结果判断供试品色谱中，应不得检出与对照品保留

12、时间相同的色谱峰;（3）对乙酰氨基酚、保泰松、萘普生、吡罗昔康、甲氧苄啶色谱条件与系统适用性试验（UPLC） 以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为0.02mol/LNHAc溶液，按下表程序梯度洗脱;0-8.08.0-8.120707020803030808.1-9.0质谱条件 电喷雾电离源（ESI）毛细管电3.5kV，孔20V，萃取电压2.0V，透镜电压0.3V，源温120，脱溶剂温度350，脱溶剂气体流速500L/h，孔气体流速50L/h。正离子检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱（MS/MS），质量采集范围100-500。对照品溶液的制备 分别取对乙酰氨基酚

13、、保泰松、萘普生、吡罗昔康、甲氧苄啶对照品适量（约5mg）至50mL量瓶中，加甲醇25ml，超声处理10分钟，加水至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液，取对照品储备溶液适量稀释成每ml含10g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取高效液相色谱-质谱联用法方法（1）项下的供试品溶液即得。测定法 取对照溶液与供试5l，注入液相色谱仪，进行液-质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图。结果判断 供试色谱中，应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰;附注:1 对乙酰氨基酚2 安乃近 3 甲氧苄啶 4 吡罗昔康5 萘普生 6 保 4、含量测定参考方法必要时，可采用下列方法测定添加成分的含量。（1）氢化可的

14、松、地塞米松、醋酸泼尼松 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VID）试验。色谱条件与系统试用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;检测波长240nm。对照品溶液的制备 取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含60ug的对照混合溶液，即得。供试品溶液的制备 若供试品为片剂或丸剂，应细致研磨粉碎，称取约0.3g，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称重,超声处理20分钟,放冷,用甲醇补足减失重量;若供试品为胶囊，取出内容物,细致研磨粉碎，精密称取约0.3g，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，称重,超声处理20分钟,放冷,用甲醇补足减失重量;

15、若供试品为液体，精密量取5ml置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。取上述溶液适量，用0.45m滤膜滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定即得。以乙腈为流动相A，以0.02mol/L醋酸铵0.05%醋酸溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱;对照品溶液的制备 精密称取阿司匹林、布洛芬对照品各60mg、氨基比林、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品各20mg至同一个100ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理10分钟,摇匀，作为对照品贮备溶液，精密量取对照品贮备溶液 1ml置10ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备 取含量测定（1）项下

16、供试品溶液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定即得。色谱条件与系统试用性试验 以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相 A,以0.02mol/L乙酸铵（含0.05%乙酸）为流动相B，按下表进行梯度洗脱;对照品溶液的制备 精密称取对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松对照品适量，加甲醇制成每lml分别含0.2mg的溶液，作为储备溶液，分别精密量取储备溶液1ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度,摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l,注入液相色谱仪，测定，即得。（起草单位:云南省食品药品检验所）（复核单位:上海市食品药品检验所，辽宁省食品药品检验所）