抗风湿类中成药批准件编号025抗风湿类中成药中非法添加化学药品补充检验方法Word文档下载推荐.docx
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补充检验方法与项目的实施规定
本补充检验方法适用于抗风湿类中成药中非法添加氢化可的松，地塞米松，醋酸泼尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠吲哚美辛、对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松等13种化学药品的筛查和验证。
补充检验方法与项目的批准日期
二〇〇九年十二月七日
主送单位
中国药品生物制品检定所、各省（自治区、直辖市）药品监督管理局
抄送单位
国家药典委员会、各省（自治区、直辖市）药品检验所
备注
国家食品药品监督管理局
抗风湿类中成药中非法添加化学药品补充检验方法
本补充检验方法适用于抗风湿类中成药中非法添加氢化可的松，地塞米松、醋酸泼尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松等13种化学药品的快速筛查和确证。
该方法中，薄层色谱法用于快速筛查;
高效液相色谱法用于定性检查;
经快速筛查或定性检查结果为阳性的样品，需经液——质联用方法验证后出具检验报告。
我局已批复的药品补充检验方法和检验项目批准件（批准件编号2006006）也可同时使用。
一、薄层色谱法
[检查]
（1）阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸钠、萘普生、对乙酰氨基酚、保泰松、吡罗昔康取供试品一次服用量（片剂除去包衣;
胶囊剂取内容物:
大蜜丸剪碎，加适量硅藻土），研细，加甲醇10ml，超声处理20分钟，放至室温，滤过；
或取液体制剂，水浴蒸干，加甲醇10ml超声外理20分钟，放至室温。
滤过作为供试品溶液。
分别取阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸钠、萘普生、对乙酰氨基酚、保泰松和吡罗昔康对照品，加甲醇制成每ml含1mg的溶液作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，分别取供试品与对照品溶液各10ul点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15:
5:
1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应不得显相应的荧光淬灭斑点。
（2）氨基比林、甲氧苄啶、地塞米松、氢化可的松、醋酸波尼松分别取氨基比林、甲氧苄啶、地塞米松、氢化可的松、醋酸波尼松对照品，加甲醇制成每ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB试验，分别取[检查]
（1）项下供试品溶液和上述对照品溶液各10ul点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨（9:
3:
1:
0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。
供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，应不得显相应的荧光淬灭斑点。
二、高效液相色谱法
[检查]
（1）氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥD）试验
色谱条件与系统试用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱;
检测波长240nm，同时用DAD监测。
时间（分钟）
流动相A（%）
流动相B（%）
20
80
对照品溶液的制备取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松对照品各约9mg，分别加甲醇50ml，制成每1ml约含0.18mg的储备溶液，临用时，各取5ml混合，制成混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取薄层色谱法
（1）项下的供试品溶液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
结果判断供试品色谱中，应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰。
（2）阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛
色谱条件与系统试用性试验以十八基硅烷键合硅胶为填充剂;
以乙腈为流动相A，以0.02mol/LNH4Ac-0.05%HAc溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱;
检测波长为230nm。
同时用DAD监测。
8
10
60
90
40
30
70
对照品溶液的制备取阿司匹林、布洛芬对照品各约15mg、氨基比林、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品各约5mg，分别加甲醇50ml，制成储备溶液，临用时，各取5ml混合，制成混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取薄层色谱法
（1）项下的供试品溶液即得。
测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
（3）对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松
色谱条件与系统试用性试验以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A.以0.02mol/L乙酸铵（含0.05%乙酸）为流动相B，按下表进行梯度洗脱:
检测波长为210nm。
15
35
85
65
45
对照品溶液的制备取对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含0.2mg的溶液，作为储备溶液，临用时，各取1ml混合，加甲醇至10ml，制成混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取薄层色谱法
（1）项下的供试溶液作为供试品溶液。
三、高效液相-质谱联用法
（1）氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松
色谱条件与系统适用性试验（UPLC）以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈，流动相B为水，按下表程序梯度洗脱;
检测波长240nm，柱温45℃。
时间（min）
0-9
9-9.5
20→50
50→20
80→50
50→80
9.5-10
质谱条件电喷雾电离源（ESI），毛细管电压3.5kV孔电30V，萃取电压2.0V,透镜电压1.0V;
源温120℃，脱溶剂温度350℃;
脱溶剂气休流速500L/h，孔气体流速50L/h，负离子检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱（MS/MS），质量采集范围100-500。
对照品溶液的制备分别取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松对照品适量（约5mg）至50mL量瓶中，加甲醇25ml，超声处理10分钟，加水至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液适量稀释成每ml含10μg的溶液。
供试品溶液的制备与测定若供试品为片剂或丸剂，应细致研磨粉碎，称取一次服用量置50mL容量瓶中,先加入甲醇25mL，超声处理20分钟,放冷至室温,加水稀释至刻度，振摇，放冷至室温后再加水至刻度，混合均匀:
若供试品为胶囊，取出内容物细致研磨粉碎，称取一次服用量置50mL容量瓶中,先加入甲醇25mL，超声处理20分钟,放冷至室温,加水定容至刻度,振摇，放冷至室温后再加水至刻度，混合均匀;
若供试品为液体，量取一次服用量置50mL容量瓶中，加入甲醇25mL，加水稀释至刻度，振摇，放冷至室温后再加水至刻度，混合均匀。
上述供试品溶液经过夜沉淀后取上层溶液适量,取上清液用50%甲醇溶液稀释10-100倍，用0.20μm滤膜滤过。
测定法取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，进行液-质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图。
结果判断供试品色谱中，应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰;
若检出保留时间相同的色谱峰，色谱峰的一级质谱及二级质谱均不得与对照品一致。
色谱条件与系统适用性试验（UPLC）以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为0.02mol/LNHAc溶液，按下表程序梯度洗脱;
检测波长200-400nm，柱温45℃。
质谱条件电喷雾源（ESI）毛细管电压3.0kV孔电20V，萃取电压2.0V透镜电压1.0V，源温120℃，脱溶剂温度350℃，脱溶剂气体流速500L/h，孔气体流速50L/h。
正、负离子同时检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱（MS/MS），质量采集范围100-500。
对照品溶液的制备分别取阿司匹林对照品约15mg、布洛芬对照品约20mg、氨基比林、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品各约5mg至同一50ml量瓶中，加甲醇25ml，超声处理10分钟加水至刻度，作为对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液适量稀释成每ml含10ug溶液，即得。
供试品溶液的制备取高效液相色谱质谱联用法方法
（1）项下的供试品溶液即得。
测定法取对照品溶液与供试溶液5μl，注入液相色谱仪，进行液-质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图。
结果判断供试品色谱中，应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰;
（3）对乙酰氨基酚、保泰松、萘普生、吡罗昔康、甲氧苄啶
色谱条件与系统适用性试验（UPLC）以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为0.02mol/LNHAc溶液，按下表程序梯度洗脱;
0-8.0
8.0-8.1
20→70
70→20
80→30
30→80
8.1-9.0
质谱条件电喷雾电离源（ESI）毛细管电3.5kV，孔20V，萃取电压2.0V，透镜电压0.3V，源温120℃，脱溶剂温度350℃，脱溶剂气体流速500L/h，孔气体流速50L/h。
正离子检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱（MS/MS），质量采集范围100-500。
对照品溶液的制备分别取对乙酰氨基酚、保泰松、萘普生、吡罗昔康、甲氧苄啶对照品适量（约5mg）至50mL量瓶中，加甲醇25ml，超声处理10分钟，加水至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液，取对照品储备溶液适量稀释成每ml含10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取高效液相色谱-质谱联用法方法
（1）项下的供试品溶液即得。
测定法取对照溶液与供试5μl，注入液相色谱仪，进行液-质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图。
结果判断供试色谱中，应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰;
附注:
1对乙酰氨基酚2安乃近3甲氧苄啶4吡罗昔康5萘普生6保
4、含量测定参考方法
必要时，可采用下列方法测定添加成分的含量。
（1）氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VID）试验。
色谱条件与系统试用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
检测波长240nm。
对照品溶液的制备取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含60ug的对照混合溶液，即得。
供试品溶液的制备若供试品为片剂或丸剂，应细致研磨粉碎，称取约0.3g，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称重,超声处理20分钟,放冷,用甲醇补足减失重量;
若供试品为胶囊，取出内容物,细致研磨粉碎，精密称取约0.3g，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，称重,超声处理20分钟,放冷,用甲醇补足减失重量;
若供试品为液体，精密量取5ml置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
取上述溶液适量，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定即得。
以乙腈为流动相A，以0.02mol/L醋酸铵0.05%醋酸溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱;
对照品溶液的制备精密称取阿司匹林、布洛芬对照品各60mg、氨基比林、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品各20mg至同一个100ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理10分钟,摇匀，作为对照品贮备溶液，精密量取对照品贮备溶液1ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取[含量测定]
（1）项下供试品溶液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定即得。
色谱条件与系统试用性试验以十八基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A,以0.02mol/L乙酸铵（含0.05%乙酸）为流动相B，按下表进行梯度洗脱;
对照品溶液的制备精密称取对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松对照品适量，加甲醇制成每lml分别含0.2mg的溶液，作为储备溶液，分别精密量取储备溶液1ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度,摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定，即得。
（起草单位:
云南省食品药品检验所）
（复核单位:
上海市食品药品检验所，辽宁省食品药品检验所）
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