免疫组化试题有答案Word格式文档下载.docx

1、6.质量控制：指组织化学反应各环节中获得最佳效 量及其代谢状态的学科。其目的是联系形态、化学果的技术把握，是组织化学的关键环节，是取得满 万分和功能来了解组织或细胞的代谢变化。意效果的必要条件，是提高结果可信度的根本保 11. ABC 法：即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 法，其基本原理是在抗生物素和生物素之间形成共 适的第二抗体。价和不可逆的结合，通过抗生物素在辣根过氧化物 12.细胞骨架：指细胞内的结构网架，由一些细丝酶和第二抗体之间建立生物素桥联，使酶定位于所 成分组成，包括微丝、微管、中间丝和微梁网格。需测定的特异性抗体周围

2、。其优点在于易于找到合二、问答题1.简述酶组织化学的基本原理。 杂交后处理冲洗：用一系列浓度不同的和温度答：在酶组织细胞化学方法中，从原理上讲，可分 不等的平衡盐液冲洗（一般原则是盐液的浓度由高为两在类型。一类是酶是活性酶组织细胞化学 到低，温度由低到高），并在冲洗的过程中防止切方法，属于一般组织细胞化学方法。一类是酶蛋白 片干燥；RNA 酶消化处理：仅使用于 RNA 杂交。质的存在及存在的部位免疫酶组织细胞化学 显示/杂交体的检测：同位素标记者：用放射方法，属于免疫组织细胞化学的内容。目前，通常 自显影技术显示。非同位素标记者：应选择相应是将两者结合起来，即显示酶活性，又酶蛋白的存 的方式显

3、示。对照实验：根据核酸探针和靶核苷在、分布及代谢情况。 酸的种类在现有可能条件下选定。2.用箭头表示免疫电镜技术（包埋前法）的过程。 4.组织化学质量控制有哪些方法？包埋前法实用于酶标法和 PAP 法。具体过程 答：组织化学质量控制的方法有：实验过程的质如下：取材 固定 冰冻切片（40150m） 量控制：试剂的质量控制，包括：试剂的特异性 免疫染色（同酶标法和 PAP 法） 选择 和敏感性；最佳的稀释度；在已知阳性和阴性的标阳性部位，在解剖显微镜下，取下阳性部位，裱于 本上，观察其染色结果的复合情况；要确定染色的盖玻片上 1%的锇酸固定，11.5h 脱水 温度和时间；保存的时间和有效期的时间。

4、操作 平 板 包 埋 聚 合 修 块 、 超 薄 切 片 步骤的质量控制，包括：组织标本制备的质量控制；（5080nm）、裱于铜网 重金属盐双重染色 操作过程各环节的质量控制 a. 各种溶液的浓度、电镜观察、记录、照片。 成分、PH 值的控制，容器的质量标准。b. 特殊试3.简述核酸分子原位杂交组织化学的过程。 剂的配制：c. 步骤中间环节的控制；背景染色此过程包括：杂交前准备：取材和固定玻 的控制疏水作用离子作用电荷作用内原片及盖片的处理（粘附剂的使用）器皿处理和溶 性酶活性作用抗体污染或/抗体纯度不高内原液配制容器的处理增加组织的通透性和核酸探 性抗生物素/生物素蛋白结合活性抗原的扩散针的

5、穿透性减低背景染色防止 RNA 酶的污 交差反应其它原因。染；杂交过程（杂交反应）：包括变性与杂交； 5.比较 PA P 法和 ABC 法的异同。 PAP ABC灵敏性 低（1 倍） 高（20 倍）特异性 高 更高背景 一般有背景 一般很少或无背景复合物特点PAP 复合物只用于 PAP 法，且抗体与一抗的种族相同ABC 复合物用途广，可通用，用生物素标记的均可用途 免疫组织化学（IHC） IHC、ELISA、原位杂交6.简述 PAP 法的过程。 的多聚甲醛 4-5h（4）固定后直接进行冰冻切片。处理切片，封闭内源性物质和避免交叉反应； 9.简述结果的判断的类型及意义。抗孵育切片，湿室，37，3

6、0-60分钟；PBS 答：结果的判断类型：定性判断，即实验结果真漂洗，3 次，5 分钟/次；2 抗孵育切片，湿室， 实性判断；定位判断，即结果出现的部位的确定，室温，37，30-60 分钟；PBS 漂洗，3 次，5 可以协助定性判断；定量判断是结果判断中最重分钟/次；加入 PAP 复合物，孵育 30 分钟； 要也最具有意义的判断。意义：实验结果的判断直PBS 漂洗，3 次，5 分钟/次；染色 0.01 接关系着实验的成败，因此，结果判断是整个实验0.02%H2O2+0.01 0.05%DAB+0.05 工作的核心和结论，必须是真实的结果，特别是一0.10UMTris-Hcl（PH7.40）室温

7、，3-5分钟，避光； 些实验结果与前人或与其它文献报道差异较大时，漂洗，双蒸馏水洗涤；复染；漂洗，双蒸馏 作出结果判断时应特别慎重。水洗涤；脱水、透明、封片；光镜观察，记录。 10.简述核酸原位杂交技术的特点。7.定量分析有哪些方法？ 答：核酸原位杂交技术的特点如下：特异性与敏人工定量分析；仪器定量分析：显微荧 感性高。在组织细胞内定位可检测的靶序列。光分光光度计；显微分光光度计/仪；显微图 能够将组织学表现与基因功能的变化相结合。可像分析仪：灰度、长度、周边、面积、曲线长等； 完好的保存组织与细胞的形态结构。不需要从组流式细胞计数仪；激光扫描共聚焦显微镜技 织细胞中提取核酸，避免了抽提中核酸

8、量的损失。术。 对组织中含量极低的靶序列具有极高的敏感性，8.增强组织化学染色的方法有哪些？ 可在 1%细胞中检出目的核酸序列。可用于研究酶消化在抗原暴露中的作用：胃蛋白酶： 个别细胞中的核酸，而不受组织中其他细胞的影0.4%、37、2030分钟。胰蛋白酶：0.1%、 37 响。不需要破裂细胞，经适当处理后探针可进入、540分钟。链霉蛋白酶：0.06%、 室温、 细胞，与细胞内核酸杂交。10 分钟。微波炉处理在暴露抗原中的作用：其 11.用箭头表示石蜡切片技术的步骤。原理在于通过微波管发射较高频率的电磁波而使 答：石蜡切片技术步骤：取材固定脱水组织内部的分子发生高速振荡，使组织温度升高， 透明

9、浸蜡包埋切片。同时加速分子交联，促使组织中抗原决定簇暴露。 12.简述免疫组织细胞化学技术的全过程。步骤：脱蜡、水化的标本微波处理 1020分钟， 答：免疫组织细胞化学技术全过程：抗原提取和纯功率 600W室温冷却 15分钟以上常规免疫细胞 化 免疫动物 抗体的分离、提取、纯化和化学染色。不同抗原组织准备方法的检测：主要 效价的确定 标记抗体 标本制备 免在固定方法和固定剂上存在差异。细胞外和基底 疫反应过程 观察及结果判断与分析。膜相关蛋白抗原：交联固定剂碳二亚胺和蛋白沉淀 13.常见的免疫组织化学方法有哪些？类固定剂乙醇。细胞膜和胞浆相关免疫球蛋白：常见的免疫组织化学方法：免疫荧光组织/首

10、选蛋白沉淀类固定剂乙醇。胞浆酶和胞浆激 细胞化学技术；免疫酶标组织/细胞化学技术；素：醛类固定剂。各类组织和细胞抗原：低浓度 过氧化物酶一抗过氧化物酶法（PAP 法）；抗生物素生物素复合技术（ABC 法）；SPA 免疫 性和复性的原理，用已知碱基序列的单链核酸片段组织/细胞化学技术；免疫电镜技术。 作为探针检测样品中是否存在与其互补的同源核14.影响核酸杂交的因素有哪些？ 酸序列的方法。即双链核酸分子（DNA 双链）分影响核酸杂交的因素：核酸分子的浓度和长 子分解为单链变性（采用加热/提 PH 值来实现）度：核酸浓度大，单链核酸间的碰撞几率大，复性 杂交后单链聚合为双链退火/复性。几率大。单链

11、探针浓度越大，杂交效率高，但双链 16.简述组织化学的基本要求。探针浓度过高会影响杂交的效率。温度：温度过 答：组织化学的基本要求：保持组织细胞良好的高不利于核酸的复性，温度过低不利于少数碱基配 形态结构。具备高度的特异性。应有一定的灵对形成的局部双链分离。离子强度：离子强度低， 敏性。可重复性。生物反映的产物必须在原位杂交速度慢，随着离子强度增高杂交反应率增加。 沉淀、色深、不溶和具有稳定性的特点。杂交液中的甲酰胺：甲酰胺是一种变性剂，能干 17.简述免疫组化在人体研究中的主要用途。扰碱基堆积力和氢键的形成，因此可减低核酸杂交 答：免疫组化在人体研究中的主要用途：免疫组的 Tm。核酸分子的复

12、杂性：核酸的复杂性是指 化在肿瘤病理学的研究和诊断中的主要应用：（1）存在于反应体系中不同顺序的总长度，复杂性越 组织起源不明肿瘤的研究；（2）研究病原体与肿瘤高，形成正确配对难度越大，反应速度越慢。非 的关系；（3）协助确定肿瘤的良恶性；（4）测定肿特异性杂交反应：为减少非特异性杂交反应，在杂 瘤细胞的增殖活性；（5）分化差的癌和肉瘤的鉴别；交前将非特异性杂交位点进行封闭，以减少对探针 （6）确定转移性恶性肿瘤的原发灶；（7）恶性淋的非特异性吸附作用。 巴瘤的诊断和分型；（8）为制定肿瘤的治疗方案提15.简述核酸分子原位杂交的基本原理。 供依据。免疫组化技术在病原微生物的鉴定中的核酸分子杂交

13、是依据 DNA 双链碱基互补、变 应用；免疫性皮肤疾病在诊断中的应用。三、填空题1.影响酶催化反应的因素是 酶浓度、底物浓度、 物素HRP、金属。激活剂浓度、抑制剂浓度、PH 值、温度。 7.根据探针的核酸性质分基因组 DNA 探针，cDNA2.核酸杂交的一般步骤是 待测核酸的制备与变性 探针，RNA 探针，寡核苷酸探针四类。探针的制备及标记固相支持物的选择与处理 8.仪器定量分析技术有显微荧光分光光度计、显微预杂交、杂交、漂洗检测显示杂交信号结果 分光光度计/仪、显微图像分析仪、流式细胞计数的判断分析。 仪、激光扫描共聚焦显微镜技术。3.增强特异免疫染色的方法有蛋白酶消化法 9.组织化学的基

14、本要求是保持组织细胞良好的形合适的抗体稀释液温育的时间长短 3060 4 态结构，具备高度的特异性，应有一定的灵敏性，过夜多层染色，提高敏感度。 可重复性，生物反映的产物必须在原位沉淀、色深、4. 常用的固定剂是 醛类、非醛类、金属类。 不溶和具有稳定性的特点。5.核糖体是核糖核酸和蛋白质组成。 10.石蜡切片的 5 大步骤是取材固定脱6.抗体常用的标记物有荧光素、酶、抗生物素生 水浸蜡、包埋切片。11.组化中常用的酶类：辣根过氧化物酶（HRP）、 22.实验过程的质量控制是试剂的质量控制、操作小牛肠碱性磷酸酶（CIAP）、葡萄糖氧化酶、- 步骤的质量控制、背景染色的控制。半乳糖苷酶。 23.

15、在酶组织化学中，根据其反应原则，显示酶的12. 固定基本原则是组织块要尽量小，固定要及时 方法，可分为 沉淀反应法 和 电子传递法 两大和适时，选择合适的固定剂，要注意固定剂的浓度、 类。PH 值和温度。 24.辣根过氧化物酶（HRP）显色原有 DAB、AEC、13.固定方法是 浸入法 和 灌注法 。 CN、H-Y 试剂 。14.免疫组织/细胞化学特点是高度特异性，高度敏 25.荧光组织化学分为自发荧光、诱发荧光、荧光感性，方法和过程统一，形态、机能、新陈代谢等 染色、免疫荧光、酶促荧光。生命活动相结合。 26.荧光图象的记录方法有描述法、荧光照相、暴15.核酸原位杂交技术的特点是 光时间测定

16、法、强弱表示法、显微荧光测定法。特异性、敏感性高；可检测的靶序列在组织细胞内 27.免疫反应的形成可分致敏阶段、反应阶段 和定位；能够将组织学表现与基因功能的变化相结 效应阶段 三个阶段。合；可完好的保存组织、细胞的形态结构；不需要 28.PAP 法的特点是抗体活性高；灵敏度高；背景从组织细胞中提取核酸，避免了抽提中核酸量的损 染色浅，有利于观察和记录。失；对组织中含量极低的靶序列具有极高的敏感 29.ABC 法的优点是敏感性强；特异性强，背性，可在 1%细胞中检出目的核酸序列；可用于研 景染色浅；方法简单，节约时间；ABC 试剂究个别细胞中的核酸，而不受组织中其它细胞的影 盒国内已大量生产，

17、价格适中；生物素具有与多响；不需破裂细胞，经适当处理后探针可进入细胞， 种显示剂结合的能力，可用作双重或多重免疫染与细胞内核酸杂交。 色。16.内质网分 粗面内质网 和 滑面内质网 两类 。 30.免疫电镜技术的基本要求是保持超微结构完17.根据试剂或标记物的不同分 一般组织化学、荧 好，结构不改变；保存最多的抗原及抗原活性。光组织化学、免疫组织化学、核酸分子原位杂交组 31.免疫电镜技术分铁蛋白标记免疫电镜技术、酶织化学 四类。 标记免疫电镜技术、PA P 法 和 胶体金免疫电镜技18.核糖体分 游离核糖体、附着核糖体、多聚核糖 术 四类。体 三类。 32.胶体金免疫电镜技术优点是金颗粒电子

18、密度19.溶酶体分 初级溶酶体、次级溶酶体、残余体 三 高，清晰可辩，形态规则；方法简单一些，不如类。 PA P 法复杂；同一组实验，可用不同直径的金颗20.细胞骨架是微丝、微管、中间丝 和 微梁网架 粒可作多种抗原的区别研究，双标；金标抗体能组成。 发生二次电子，可作用扫描电镜观察。21.确定最适 PH 的方法是查阅文献，根据前人的经 33.免疫电镜技术包埋后法缺点是抗原及活性损验，预实验印证和实验测定最适 PH 值。 失大；部位不准；得到阳性结果难度大。四、实验设计题（一）某实验室拟采用 ABC 法研究缺血性心肌损 （二）某实验室拟采用 PAP 法研究缺血性脑损伤伤时 ANP（ANF）的变

19、化。请设计此课题。 时 NPY 的变化。1、准备哪些试剂和药品。 1、准备哪些试剂和药品。二甲苯；30% H2O2 和浓盐酸；ABC 免疫复合物试 二甲苯；PAP 免疫复合物试剂；抗大鼠 ANP 的特异性兔抗体（一抗）；生物素 剂（来自于兔）；抗大鼠 NPY 的特异性兔抗体（一标记羊抗兔免疫球蛋白（二抗）；正常羊血清 PBS 抗）；猪抗兔免疫球蛋白（二抗）；正常猪血清 PBS液；DAB 显色剂；梯度酒精溶液（100%、95%、 液；梯度酒精溶液（100%、95%、90%、80%、70%）；蒸馏水；磷酸盐缓冲液 PBS； 90%、80%、70%）；复染液（如苏木精）；封片剂（中性树胶）等。 复染

20、液（如苏木精）；2、写出实验的思路或过程。 2、写出实验的思路或过程。实验动物与分组：取大鼠（同种、同窝别、相近 实验动物与分组：取大鼠（同种、同窝别、相近体重）20 只，随机分为 2 组，实验组（缺血组） 体重）20 只，随机分为 2 组，实验组（缺血组）10 只，对照组 10 只。 10 只，对照组 10 只。实验组大鼠采用结扎冠状动脉方法制作缺血性 实验组大鼠采用结扎双侧颈总动脉方法制作全心肌损伤模型，对照组（即假手术组）只暴露冠状 脑缺血性动物模型，对照组（即假手术组）只暴露动脉但不结扎。 颈总动脉但不结扎。实验过程：从实验组大鼠心肌损伤组织中按设 实验过程：从实验组大鼠大脑皮质组织中

21、按设计好的不同时间点取材（对照组取材部位、时间与 计好的不同时间点取材（对照组取材部位、时间与实验组相同），制备石蜡切片标本；石蜡切片脱 实验组相同），制备石蜡切片标本；石蜡切片脱蜡下水；3%H2O2 室温避光封闭 20min，蒸馏水 蜡下水；3%H2O2 室温避光封闭 20min，蒸馏水洗；TBS 微波修复抗原，0.01mLMPBS 洗 3min 洗；TBS 微波修复抗原，0.01mLMPBS 洗 3min3 次；正常羊血清 37，孵育 20min，甩干不 正常猪血清 37，孵育 20min，甩干不兔抗 ANP37孵育 1h，0.01MPBS 洗 3min 洗；兔抗 NPY37孵育 1h，0

22、.01MPBS 洗 3min生物素化羊抗兔 IgG37孵育 30min， 猪抗兔 IgG37孵育 30min，0.01MPBS0.01MPBS 洗 3min加 ABC 复合物 37 洗 3min加 PAP 复合物 37孵育 30min，孵育 30min，0.01MPBS 洗 4min4 次；DAB 室 0.01MPBS 洗 4minDAB 室温避光显色温避光显色 510min（镜下控制显色时间），自来 510min（镜下控制显色时间），自来水终止；10水终止；10 切片脱水，透明封片。 切片脱水，透明封片。实验组与对照组均按上述实验过程进行。 实验组与对照组均按上述实验过程进行。观察记录结果：

23、出现棕黄色颗粒即为阳性结果。 观察记录结果：将实验组与对照组比较，用统计学方法分析，得 将实验组与对照组比较，用统计学方法分析，得出结论。 出结论。（三）某实验室拟采用核酸原位杂交技术研究缺血 实验组与对照组均按上述实验过程进行。观察性脑损伤时 SPmRNA 的变化。 记录结果： 将实验组与对照组比较，用统计学方法分析，得梯度酒精溶液（100%、95%、90%、80%、70%）；复 （四）某实验室拟采用免疫电镜技术（包埋前法）染液（如苏木精）；封片剂（中性树胶）；0.1M PBS 研究缺血性脑损伤时 NPY 的变化。（pH7.2）；0.2M PB （pH7.2）；0.1M 甘氨酸；4%多 1、

24、准备哪些试剂和药品。聚甲醛；16Denhardt 溶液；预杂交液；20SSC； 二甲苯；抗体稀释液；TSM1；DIG DNA 标记检测试剂盒。 （100%、95%、90%、80%、70%）；0.01M PBS 缓冲液；封片剂（中性取大鼠（同种、同窝别、相近 树胶）；0.5%戊二醛-2%多聚甲醛；30%蔗糖/PBS体重）20 只，随机分为 2 组，实验组（缺血组） 溶液；1%牛血清；实验组大鼠采用结扎双侧 抗）；生物素标记羊抗兔免疫球蛋白（二抗）。 颈总动脉方法制作全脑缺血性动物模型，对照组2、写出实验的思路或过程。（即假手术组）只暴露颈总动脉但不结扎。 实验动物与分组：麻醉大鼠后，用 4%多聚

25、甲醛灌流 体重）20 只，随机分为 2 组，实验组（缺血组）固定后取材，制备冰冻切片。随机引物制备 10 只，对照组 10 只。实验组大鼠采用结扎双侧cDNA 核酸探针，并用 DIG DNA 标记检测试剂盒 颈总动脉方法制作全脑缺血性动物模型，对照组检测探针敏感性。预杂交：滴加适量预杂交液， （即假手术组）只暴露颈总动脉但不结扎。42 30 min。杂交：倾去预杂交液，在每张切 实验过程：麻醉大鼠后，经主动脉灌流 0.5%片上滴加 10-20l 杂交液（将探针变性后稀释在 戊二醛-2%多聚甲醛固定后取材，制成厚切片。预杂交液中，0.5 ng/l ），覆以盖玻片或蜡膜， PBS 漂洗 3 次，每次 15min。30%蔗糖/PBS 溶液42 过夜。（注意阴性对照）洗片：4SSC、2 中室温下静置至沉底。液氮冻融，增加细胞膜通SSC、1SSC、0.5SSC 37各洗 20min；0.2 透性。1%牛血清孵育组织块 30min 后 PBS 漂洗SSC 37洗 10min；0.2SSC 与 0.1M PBS